黄绍良
小儿血液病及小儿哮喘的临床与实验研究,特别对小儿溶血性贫血、白血病/肿瘤及再生障碍性贫血有深入研究。
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- 姓名:黄绍良
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- 担任导师情况:
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学术头衔:
博士生导师,
- 职称:-
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学科领域:
光学
- 研究兴趣:小儿血液病及小儿哮喘的临床与实验研究,特别对小儿溶血性贫血、白血病/肿瘤及再生障碍性贫血有深入研究。
黄绍良,主要研究方向是小儿血液病及小儿哮喘的临床与实验研究,特别对小儿溶血性贫血、白血病/肿瘤及再生障碍性贫血有深入研究。从七十年代起在国内率先开展小儿G6PD缺陷及新生儿Hb病的大规模普查研究、小儿G6PD缺陷症所致感染性溶血性贫血及慢性非球形溶血性贫血临床与实验研究。提出G6PD缺陷症所致的CNHA的临床分型及G6PD缺陷是广东地区新生儿高胆红素血症的重要病因之一。八十年代后期着重于小儿白血病、恶性肿瘤及再障的临床与实验研究,九十年代主要从事干细胞与细胞治疗研究,在国内率先开展了脐血移植的基础与临床应用研究、人胚胎干细胞分离培养、定向诱导分化及人间充质干细胞(MSCs)应用研究。从1992年起获得有关脐血移植及胚胎干细胞研究的相关基金项目近二十项,其中国家自然科学基金7项、省自然科学基金5项、国家“863”合作项目一项、美国中华医学基金1项及中法合作先进科学研究项目1项。2002年成功建立中国人胚胎干细胞系并诱导分化为人表皮干细胞及高效诱导小鼠胚胎干细胞分化为造血干细胞。在基础研究成熟的同时,于1998年起先后在国内首例成功以同胞脐血和外周血干细胞移植治疗重症β地中海贫血,2000年取得国际首例非血缘相关脐血移植成功治疗地贫。近5年来已进行50例造血干细胞移植治疗地贫、白血病及淋巴瘤,其中脐血移植37例;并与国际上同步成功进行人MSC与脐血联合移植促进造血重建临床应用(已进行14例)。在上述研究工作基础上,有关“提高儿童脐血造血干细胞移植临床效果的实验与临床研究”获2004年卫生部临床重点项目基金资助。
2002年牵头成立了“中国小儿脐血移植协作网”和“中国小儿造血干细胞移植协作组”,为我国脐血移植的快速、健康发展做出了重要贡献。对小儿白血病及再障的诊治有深入的研究,从1994年起开展儿童白血病系统化疗及造血干细胞、再障的强化免疫治疗,建立小儿白血病专科病房、造血干细胞移植中心及干细胞研究中心,为干细胞及细胞治疗建立实验技术平台及临床应用基地。先后制定中山医科大学小儿ALL化疗97方案、99方案,并组织成立了中山大学小儿白血病化疗协作组,使我院小儿ALL 3年无病存活率达到83%,预期5年无病存活率达到80.5%,重型再障疗效达75%,进入国内先进行列。同年又成功组建“广州地区小儿白血病化疗协作组”及广东省抗癌协会小儿肿瘤专业委员会,并积极加强国际交流,取得Camp quality of Hong Kong和美国International Consortion for care of childhood cancer in China及中国福利社会上海宋庆龄基金会资助。已培养博士后5人、博士生13人、硕士生11人。发表论文160篇(其中SCI收录3篇),主编专著3本。有关“脐血生物学特性研究”获1999年广东省卫生系统科技进步三等奖。“脐血造血干细胞移植的基础与临床系列研究”获得2004年国家教育部科技进步一等奖。1992年获国家有突出贡献专家政府津贴,1996年被列入广东省医药卫生系统“五个一兴医工程”学术带头人,2000年被评为广东省白求恩式先进工作者。获2004年度广东省柯麟医学教育基金医学奖,中山大学杰出教师称号并获桐山奖。
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【期刊论文】体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为造血干/祖细胞方法的初步研究*
黄绍良, HE Zhi-xu, HUANG Shao-liang, ZHOU Qi-feng, LI Shu-nong
中国病理生理杂志,2003,19(4):443-447,-0001,():
-1年11月30日
目的:探讨体外定向诱导胚胎干细胞(ESC)发育为造血干细胞(HSC)的方法。方法:将小、鼠E14胚胎干细胞在含于细胞生长因子(SCF)和血管内皮生长因子(VEGF)的甲基纤维素培养基上首先诱导发育为胚胎体(EB),再将EB置于均含SCF、VEGF、IL-3、IL-6及促红细胞生成素(EPO)的3各不同培养体系中定向分化为HSC,并观察HSC表面标志性抗原、造血集落形成及瑞氏-姬姆萨染色的结果。结果:经两阶段诱导ESC分化为HSC,发现在甲基纤维半固体培养体系中HSC发育缓慢,分化14d后CD34+/Sca-1+细胞数量最高为(31.5+-4.7)%;而在骨髓基质细胞饲养层上HSC发育缓慢较快,细胞数量较多,分化第10dCD34+/Sca-1+细胞数即达到峰值,为(47.8+-6.3)%;骨髓基质细胞饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系中HSC发育同样迅速,所产生的CD34+/Sca-1+细胞数量在3个体系中最高,为(53.6+-7.2)%。经瑞氏-姬姆萨染色证实上述细胞为早期造血细胞,均有形成各系造血细胞集落的能力。结论:使用骨髓基质饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系及SCF、VEGF、IL-3、IL-6及EPO等细胞因子,通过阶段诱导分化,可从小鼠ESC获得较高比例的HSC。
胚胎干细胞, 造血干细胞, 骨髓细胞, 分化, 小鼠
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黄绍良, HUANG Shao-liang, MIN Jun, GUO Zhong-min, WU Yan-feng, BAO Rong
中华肝脏病杂志,2004,12(12):714-717,-0001,():
-1年11月30日
目的 探索体外定向诱导胚胎细胞分化为肝细胞。方法 常规方法培养E14小鼠胚胎干细胞(ESC)后,进行悬滴-悬浮培养,形成胚胎体,再进分阶段定向诱导,在培养第q~12天、第12~18天以及第15~18天分别加入酸性成纤维细胞生长因子、肝细生长因子和制制瘤素M,利用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,逆转取聚合酶链反应(RT-PCR)法分析特异性基因nRNA的表达,并用吲垛氰绿(ICG)摄取和过碘酸雪夫反就(PAS)分析细胞的分化用或能。结果 存诱导培养的第13天,细胞出现肝细胞样改变。RT-PCR分析可见,在诱导的第6天和第12天分别可以检测到内胚层或卵黄曩分化标志基因——甲状腺素运载蛋白和α1抗胰蛋白酶的mRNA表达,第6天出现未成熟肝细胞标志基因——甲胎蛋白mRNA表达,第9天第15天和第18天分别开始出现成熟肝细胞的特异性标志基因——白蛋白、葡萄糖6磷酸酶、酪氨酸氨基转移酶mRNA表达。同时,ESC源性肝细胞表现为ICG摄取和RAS反应阳性、经过诱导,ICG阳性 细胞数约占85.1%。结论 ESC源性肝细胞具备肝细咆特性,ESC有可能成为肝细胞治疗的替代供体细胞。
胚胎, 干细胞, 肝细胞, 分化
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【期刊论文】两步法体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为CD34+/Sca-1+造血干细胞的研究
黄绍良, HE Zhi-xu*, HUANG Shao-liang, ZHOU Qi-feng, LI Shu-nong
中华儿科杂志,2004,42(11):830-834,-0001,():
-1年11月30日
目的 建立一种体外诱导胚胎干细胞(embryonic stem cell, ESC)定向发育为CD+34/Sca-1+造血干细胞(hematopoietie stem cell, HSC)的实验方法。方法 联合应用血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor, VEGF)、干细胞因子(stem cell factor, SCF)、白血胞介素3(interleukin 3.IL-3)、白细胞介素6(interleukin 6, IL-6)和促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)分阶段首先诱导ESC形成富含CD+34/Sca1+细胞的胚胎体(embryoid body, EB),然后分别观察EB细胞在甲基纤维素半固体培养体系和骨髓基质细胞饲养层培养体系中进一步分化为HSC的情况。结果 VEGF联合其他细胞因子能有效促进EB中HSC的形成,CD+34/Sca-1+细胞数高达(13.72+-1.92)%,收获此阶段的EB进一步诱导发现。甲基纤维素培养体系造血克隆形成率明显低于骨髓基质细胞培养体系,在甲基纤维素中CD034/Sca1-1+细胞数最高只能达到(20.52+-2.78)%,而基质细胞中CD+34/Sca-1+细胞数可达(34.60+-3.71)%(t=5.26,P<0.001)以上,且来自骨髓基质细胞培养体系的造血分化细胞在造血集落培养时能形成类型和数量更多的造血克隆。结论 使用VEGF联合SCF、IL-3、IL-6、EPO分阶段诱导ESC形成富含CD+34/Sca-1+细胞的EB,并进一步在骨髓基质细胞培养体系扩增,是体外诱导ESC发育为HSC的较好方法。
干细胞, 造血干细胞, 骨髓细胞, 细胞分化
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【期刊论文】异基因造血干细胞移植中杀伤细胞抑制性受体(KIR)在GVHD和GVL发生中的作用
黄绍良, CHEN Chun, HUANG Shao-Liang
中华实验血液学杂志,2004,12(2):236-243,-0001,():
-1年11月30日
杀伤细胞抑制性受体(KIR)属于免疫球蛋白超家族成员I型跨膜蛋白分子,主要表达于人NK细胞和某些T淋巴细胞。它们的配体为HLAI类分子。当KIR所识别的MHC配体缺失时,即表现为对靶细胞的杀伤作用(所谓丢失自我“missing-self”机制)。己证实,NK细胞和T细胞的KIR分子与靶细胞的MHC分子特异性的识别机制参与植物抗宿主病(GVHD)的发生并且影响移植物抗白血病(GVL)作用。KIR的存在可能是免疫活性细胞不攻击逢身组织的主要机制。KIR基因家族及其配体HLA-C分子均具有基因多态性,因此在HLA相合和不全相合的异基因造血干细胞移植中,供受者KIR基因表达的差异在一定程度上影响移植效果。本文主要就KIR如何影响异基因造血干细胞移植后GVHD和GVL进行综述。
杀伤细胞抑制性受体, 异基因造血干细胞移植, NK细胞, 移植物抗宿主病, 移植物抗白血病
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黄绍良, ZHANG Cheng, FENG Hui-yu, HUANG Shao-liang, FANG Jian-pei, XIAO Lu-lu, YAO Xiao-li, CHENG Chun, YE Xin, ZENG Yin, LU Xi-lin, WEN Jian-ming, ZHANG Wei-xi, LI Zhong, FENG Shan-wei, XU Hong-gui, HUANG Ke, ZHOU Dun-hua, CHEN Wei, XIE You-mei, XI Jing, ZHANG Meng, LI Yang, LIU Ying.
中华医学遗传学杂志,2005,22(4):399-405,-0001,():
-1年11月30日
目的 比较假肥大型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy, DMD)患者经脐血干细胞移植治疗前后其肌肉再生、抗肌萎缩蛋白表达和运动功能的改变;以及评价治疗的安全性。方法 对1例经基因分析和肌肉活检及抗肌萎缩蛋白检测确诊的、已丧失行走能力的DMD患儿,经HLA配型,在脐血库中寻找到一个全相合的脐血供体。采用白消安+环磷酰胺+兔抗胸腺淋巴细胞球蛋白预处理后进行异基因脐血干细胞移植;术后采用环孢素A和骁悉方案预防移植物抗宿主反应(graft wersus host reaction, GVHD)。同时定期检测原发病的生化指标如血清肌酸激酶(creatine kinase, CK)、造血重建的植入证据(血型转变、肌肉和血液系统的聚合酶反应短串联重复序列分析)、缺陷基因是否纠正、新生肌肉是否出现、肌肉中抗肌萎宿蛋白是否表达和运动功能是否改善。结果 (1)中性粒细胞在脐血干细胞移植后第15天(+15天)达到0.5×109/L,白细胞在+25天达正常水平;血小板于+22天达到20×109/L;血红蛋白维持于85-100g/L。术后140天骨髓穿刺提示三系生长旺盛;(2)移植后140天血型转为供体AB型。至今没有出现移植物抗宿主反应。(3)术后18天、30天、42天、55天、74天、233天患者外周血DNA和术后140天、183天、235天骨髓细胞DNA经PCR-STR检测为供者独立植入;(4)患儿术后60天取外周血做基因分析,显示19号缺失的外显子得到完全纠正,患儿转变为正常基因型;(5)患儿在移植75一的肌肉活检可见新生肌管形成,抗肌萎宿蛋白免疫组化呈弱阳性,少数为强阳性反应,DNA分析:供者基因DNA占1%~25%;(6)患儿血清CK从移植治疗前的5735U/L降至274U/L;(7)术后100天体检发现患儿肌力略有改善,肢端温暖。结论 异基因脐血干细胞移植治疗DMD,可在移植后短期内重建造血功能、血清CK显著下降、肌肉抗肌萎缩蛋白表达,患儿运动有所改善,提示造血干细胞移植将有益于DMD的治疗。
假肥大型肌营养不良症, 脐带血造血干细胞移植, 抗肌萎缩蛋白
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【期刊论文】人脐血间充质干细胞对脐血CD34+细胞体外扩增作用的研究
黄绍良, ZHOU Dun-hua, HUANG Shao-liang, ZHANG Xu-chao, WEI Jing, WU Yan-feng, HUANG De, LI Yang, FANG Jian-pei
中华儿科杂志,2005,43(7):194-498,-0001,():
-1年11月30日
目的 折探讨含人脐血来源的间充质干细胞(MSCs)体系在体外对脐血造血干细胞(HSCs)扩增作用。方法 (1)用含人脐血MSCs及不同造造血生长因子(HGFs)组合的无血清扩增体系对人脐血CD34+细胞进行体外扩增。(2)于扩增前及增后笫6、12天分别用双色流式细胞仪动态检测HSCs表面抗原标记:CD34+、CD34+、CD38-、CD34+CD3+、CD34+CD19+、CD34+CD33+和CD34+CD41a+细胞的含量。(3)按本实验室方法行体外半固体培养,观察扩增前后脐血细胞粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、爆式红系集落形成单位(BFU-E)、混合集落形成单位(CFU-Mix)及高增殖集落形成单位(CFU-HPP)集落形成情况。结果 (1)含人脐血MSCs体系对脐血CD34+;CD38-细胞的扩增倍数在笫6天和第12天分别为159和437倍。该亚群百分比在单纯因子组增第12天时为1.98%,而在含脐血MSCs组为9.98%,明显高增前。(2)集落培养表明,含脐血MSCs组增第12天与增第6天相比,其CFU-Mix和CFU-HPP的扩增倍数增加,而单纯因子组这两种集落的增数下降。(3)随增天数的增加,两组相比,含脐血MSCs组差异更显著。结论 (1)含脐血MSCs体系不仅能扩增更原始的造血干/祖细胞(HSPC),且具有在短期内(12d)保持HSCs不耗竭。(2)含脐血MSCs体系对脐血CD34+细胞向定向祖细胞的扩增,主要为髓系及巨核系祖细胞,而对其向淋巴系祖细胞的扩增具有抑制作用。
间质干细胞, 细胞,, 培养的, 抗原,, SD34+, ,, 流式细胞术, 胎血
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【期刊论文】 定向诱导小鼠ES细胞为肝脏细胞及其凝血因子Ⅷ, Ⅸ的表达*
黄绍良
中国科学C辑生命科学,2005,35(3):269-274,-0001,():
-1年11月30日
凝血因子vⅢIX缺陷导致血友病A和B的发生、肝细胞是产生凝血因子的器官,利用肝细胞进行替代治疗是纠正凝血因子缺陷的根本办法,但是其来源及利用存在难以克服的问题Es细胞具有体外培养时保持未分化状态和无限的增殖能力,具有在一定条件下可以分化发育成各个胚层细胞的潜能,利用Es细胞源性肝细胞作为供体细胞,解决了肝细胞来源困难、增殖能力差的难题体外分阶段定向诱导E14小鼠Es细胞分化为肝细胞,ICG摄取及PAs反应结果证实Es源性细胞具备肝细胞功能,在此基础上,利用RT-PCR法对诱导细胞初步进行了凝血因子VⅢIX表达分析,为进一步开展利用Es细胞纠正凝血因子缺乏奠定了研究基础。
胚胎干细胞, 分化, 肝细胞, 凝血因子
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【期刊论文】胎鼠血及新生鼠外周血分次移植对造血干细胞植入影响的实验研究
黄绍良
中华血液学杂志,2002,23(12):658-659,-0001,():
-1年11月30日
我们拟在建立鼠-鼠同种异体脐血移植动物模型的基础上,采用胎鼠血及新生鼠外周血(FNPB)单次或分次移植,观察移植后免疫和造血重建。试图探讨促进脐血造血,干细胞(Hsc)植入,提高脐血移植(UCBT)效率的新策略,为克服UCBT存在的问题和进一步开发利用提供实验应用依据。
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黄绍良
中华儿科杂志,2001,39(10):633-635,-0001,():
-1年11月30日
干细胞是指具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的 一类细胞,它所产生的子代细胞与其具有相同的基因型和现型。作为“种子细胞”的干细胞可以通过细胞工程的方法在体外发育为各种特异性的细胞供移植和细胞替代所需,并要作为基因疗法的靶细胞用于治疗和研究。由于干细胞有广泛的应用前景。它已成为近年来医学和生物学领域研究的热点。20世纪90年代以来,随着细胞生物学技术的发展及体外分离,培养人胚干细胞的成功,干细胞经适当诱导分化可发育为不同类型的细胞、组织和器官,成为移植体的新来源,由此掀起干细胞研究的新一轮热潮。
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黄绍良, HUANG Shaoliang, FANG Jianpei, CHEN Chun
中华儿科杂志,2001,39(10):583-587,-0001,():
-1年11月30日
目的 评估异基因造血干细胞移植治疗儿童血液病的疗效及合并症。方法 脐血移植(UCBT)治疗9例重症β地中海贫血(β-thal)、1例慢性特发性溶血性贫血(CIHA)、3例急性髓性白血病(AML-M3b、M2a、M5)及1例急性淋巴细胞白血病(ALL)合并中枢神经和系统白血病;异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)治疗5例β-thal及1例慢性粒细胞白血病慢性期(UD-USBT)中4例为6/6,1例5/6,双份脐血混合者为5/6和6/6,allo-PBSCT中5例均为血缘相关,HLA相合同胞及1例5/6父亲供者。输入脐血(USB)有核细胞数(NC)为7.5(3.4-19.4)×10 7/kg,外周血NC为9.39(2.5~14.4)×10 8/kg。结果 血缘相关脐血移植(RD-UCBT)8例中植入6例,其中排斥1例,死于肝静脉闭塞病(HVOD)1例,恢复地中海贫血状态2例;UD-UCBT中2例β-thal及2例AML均植入,1例AML-M5复发,AML-M3b自体恢复造血并完全缓解,1例AML-M2a死一巨细胞病毒间质性肺炎,1例ALL未植入,死于败血症。急性移植物抗宿主病(aGVHD)8例(80%),Ⅲ度以上2例,广泛慢性移植抗宿主病(aGVHD2)例。β-thal总生存率为90%,无病存活率(EFS)为60%,平均生存时间为21个月(2~42个月)。allo-PBSCT病例全部植入,cGVHD5例,Ⅲ°,以上者2例,广泛cGVHD3例,死于HVOD1例。EFS5例,中位生存时间10个月(3~26个月)。结论 UCBT及allo-PBSCT是治疗儿童血液病的有效方法,UD-UCBT首次成功治疗β-thal。
移植,, 同种, 造血干细胞移植, 血液病
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