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2009年05月12日

【期刊论文】血管内皮生长因子(VEGF)基因转染促进成骨细胞成骨活性的实验研究

裴福兴, 钟刚, 李胜富

中华创伤骨科杂志,2004,6(10):1147~1150,-0001,():

摘要

目的 了解外源性血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对成骨细胞成骨活性的影响。方法 利用阳离子脂质体Lipofectamine转染将pBLAST49-mVEGF基因导入体外培养的成骨细胞,与对照组比较,观察外源性VEGF在成骨细胞内的表达,及其对成骨细胞合成分泌骨钙素、Ⅰ型胶原的影响。结果 pBLAST49-mVEGF基因转染组第1~5代细胞合成分泌骨钙素浓度和Ⅰ型胶原的表达均明显高于对照组,二者间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论 pBLAST49-mVEGF基因转染能促进成骨细胞生成骨钙素和合成Ⅰ型胶原的能力。

关键词: 血管内皮生长因子, 基因转染 成骨细胞, 骨钙素, Ⅰ型胶原

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2009年03月20日

【期刊论文】多聚赖氨酸淀粉纳米颗粒基因载体的研制及应用*

刘选明, 肖苏尧, 刘选明**, 童春义, 刘俊, 唐冬英, 赵李剑

中国科学B辑化学,2004,34(6):473~477,-0001,():

摘要

以可溶性淀粉为原料,利用反向微乳液法,加入交联剂三氯氧磷,制备了直径为50nm左右带负电荷的交联淀粉纳米颗粒。以该纳米颗粒为内核,经多聚赖氨酸修饰,得到了多聚赖氨酸淀粉纳米颗粒(PLL-StNP)。对PLL-StNP进行了颗粒粒度、稳定性和电性的表征,并通过颗粒的体外细胞毒性检测、颗粒与DNA结合能力及细胞转染等方面的分析,发现多聚赖氨酸淀粉纳米颗粒(PLL-StNP)有可能作为基因载体,在此基础上发展了多聚赖氨酸淀粉纳米颗粒基因载体的构建与基因转染技术。作为非病毒基因载体,赖氨酸淀粉纳米颗粒具有基因装载量大、转染率高、细胞毒性低以及可生物降解等优点。

关键词: 阴离子淀粉纳米颗粒 多聚赖氨酸 非病毒基因载体 基因转染

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2009年01月19日

【期刊论文】重组载体pLNCX/iNOS的构建及其在NIH3T3细胞中滴度的测定

陈宝安, 朱梁军, 朱敏生, 潘英, 杜娟, 陈苏宁, 王骏, 邵泽叶

东南大学学报(医学版),2002,21(2):28~30,-0001,():

摘要

目的:构建重组质粒pLNCX/iNOS。方法:用PCR技术从pCMV/iNOS质粒中扩增出iNOS全长eDNA,与逆转录病毒pLNCX构建重组质粒pLNCX/iNOS;通过脂质体介导把重组质粒转染入包装细胞PA317中,经G418筛选出抗性克隆。通过NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果:经过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定重组质粒构建正确。G418筛选出16个抗性克隆,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒。NIH3rI3细胞测定病毒滴度为2.1×l04CFU•ml。结论:逆转录病毒载体pLNCX可有效地介导iNOS的转染。

关键词: 一氧化氮合酶, 逆转录病毒, 基因转染 聚合酶链反应

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2006年11月09日

【期刊论文】绿色荧光蛋白标记人脂肪基质细胞成骨分化能力体外实验研究*

田卫东, 林云锋, 敬伟, 陈希哲, 乔鞠, 李志勇, 严征斌, 吴凌, 田卫东△

四川大学学报(医学版),2006,37(5): 700~703,-0001,():

摘要

目的研究绿色荧光蛋白(GFP)基因体外转染人脂肪基质细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能。方法体外分离培养人脂肪基质细胞,用重组腺病毒载体Ad-GFP及脂质体介导质粒pEGFP-C1两种方法转染GFP基因,通过流式细胞术观察比较GFP转染和表达的结果;倒置显微镜下观察细胞生长情况;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况。结果重组GFP基因的腺病毒Ad-GFP转染的脂肪基质细胞的感染率达(42.5±1.5)%,16h即有GFP表达,7d时表达趋于稳定,感染6周时仍可见有GFP表达,明显优于脂质体转染组(转染效率最高为11.4%)。感染Ad-GFP后的脂肪基质细胞与未感染的对照组脂肪基质细胞成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)表达均逐渐增高,两组间差异无统计学意义(P>0105);诱导21d后两组均见到茜素红钙盐染色阳性。结论重组GFP基因的腺病毒载体Ad-GFP可高效率感染脂肪基质细胞,基因转染后细胞的增殖分化能力未受到影响,可以作为一种高效可靠的人脂肪基质细胞标记方法。

关键词: 人脂肪基质细胞, 绿色荧光蛋白, 基因转染 分化

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2006年10月10日

【期刊论文】BMP2-EGFP融合蛋白的构建及其生物活性

郭雄, 张银刚, 师常宏, 邹爱民, 许鹏

中南大学学报(医学版),2005,30(1)16~20,-0001,():

摘要

目的:构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并检测其表达的融合蛋白的生物活性。方法:用基因重组技术构建BMP2/pLEGFP重组逆转录病毒表达载体,并通过酶切和PCR鉴定。脂质体法转染COS27细胞,用荧光显微镜检测和Western blotting分析其在COS27细胞表达,细胞活性实验和动物体内异位成骨实验进一步检测融合蛋白的生物活性。结果:经酶切和PCR鉴定重组质粒BMP2/LEGFP构建成功。转染COS27细胞后,荧光显微镜和Western blotting检测均显示融合蛋白在细胞中表达;分泌的产物经细胞活性实验和动物体内异位成骨实验证实具有BMP2和EGFP的双重蛋白活性。结论:基因重组技术成功构建BMP2/pLEGFP重组体,重组体表达的融合蛋白具有GFP和BMP2的双重活性。

关键词: BMP2, 基因转染 真核表达, 生物活性

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2006年10月10日

【期刊论文】携EGEP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定

郭雄, 张银刚, 周京军, 鱼兵, 刘兵

第一军医大学学报,2005,25(1)30~36,-0001,():

摘要

目的 探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法。方法 用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞用荧光显微镜观察转染结果:依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞。并利用PCR、RT-PCR对其鉴定;以NIH3T3为靶细胞。对其滴度进行测定。结果 荧光显微镜显示用脂质体介导的方法成功的转染PA317细胞在4次连续流式细胞仪分选后得到了稳定表达的多克隆和单克隆源性的包装细胞。PCR和RT-PCR分别从多克隆和单克隆源性的包装细胞细胞基因组DNA以及多克隆和部分(6/8)单克隆源性的包装细胞培养上清中的重组逆转录病毒RNA中扩增出了插入的EGFP片段。滴度测定显示得到的包装细胞能够产生有效的病毒滴度。结论 荧光激活细胞分选技术是获得有效病毒滴度的包装细胞的有效方法。

关键词: EGFP, 重组逆转录病毒载体, 荧光激活细胞分选技术, 基因转染

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2006年05月26日

【期刊论文】重组逆转录病毒pLNCX2-GDNF转染许旺细胞及其表达

李青峰, PING Ping, LI Qing-feng, ZHANG Di-sheng

中华显微外科杂志,20003,26(2):123~126,-0001,():

摘要

目的 利用基因转染技术将胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因转入许旺细胞(SC)以提高其分泌该因子的水平。方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法合成GDNFcD-NA片段,以逆转录病毒pLNCX2为载体导入许旺细胞内,并运用RT-PCR、免疫细胞化学染色、ELISA及运动神经元联合培养法检测外源性基因在mRNA和蛋白水平的表达及其产物的活性。结果:RT-PCR检测结果示GDNF-SCs表达GDNFmRNA的水平明显优于SCs;免疫细胞化学检测发现CDNF-SCs抗GDNF蛋白的水平升至正常SCs呈弱阳性;ELISA法检测结果示转染后4周CDNF-SCs分泌GD-NF蛋白的水平升至正常SCs的5.1倍;运动神经元联合培养法结果显示GDNF-SCs分泌的外源生基因产物具有生物学活性。结论 GDNF基因转染SC在mRNA和蛋白水平表达GDNF明显优于正常SCs,外源性基因表达产物具有神经生物学活性。

关键词: 许旺细胞, 胶质细胞源性神经营养因子, 基因转染 逆转录病毒

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2009年03月30日

【期刊论文】转化生长因子β1基因转染对大鼠骨髓树突状细胞免疫功能的影响

钟翠平, 张新华, 钟翠平*, 周播江, 顾云娣, 冯久贤, 吴超群

解剖学报,2004,4(2):184-189,-0001,():

摘要

目的 研究人转化生长因子βl(TGFβ1)基因修饰对大鼠骨髓树突状细胞(DC)免疫功能的影响。方法 构建TCFβ1-pcDNA3质粒并转染未成熟DC。检测转染后DC的TGFβ1表达及其功能变化,输注l周后检测TGFβ1-DC在受者睥和淋巴结的分布、T细胞捅亡水平及T绳胞端粒酶表达。结果 TGFβ1-pcDNA3船最粒转染Dc能有效抑制DC的成熟和分化,并下调DC的多种功能。TG即1基因转染不仅能降低DC对LPS的反应,同时抑制DC在MLR中刺激T细胞增殖的能力。TGFβ1-DC输注受者后,l周内可在脾和淋巴结内形成微嵌合,并有效诱导T细胞的凋亡,抑制T细胞端粒酶的活性和表达。结论 TGFβl基因能有效抑制DC的多种功能,可用于诱导机体免疫耐受。

关键词: 转化生长因子βl基因, 树突状细胞, 免疫功能, 基因转染 大鼠

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