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2009年06月10日

【期刊论文】甲状腺癌组织端粒酶逆转录酶和P53基因表达及其临床意义

马清涌, 霍雄伟, 许康铃, 孙学军, 刘浩, 车向明, 盛薇

西安交通大学学报(医学版),2004,25(5):453~455、474,-0001,():

摘要

目的 探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)和P53基因与甲状腺癌的发生、发展及预后的关系以及它们的相互关系。方法 应用免疫组织化学sP法检测60例甲状腺癌、10例正常甲状腺组织、10例结节性甲状腺肿及10例甲状腺腺瘤组织中hTERT和P53的表达。结果 hTERT和P53阳性率在甲状腺癌中增高(P<0.05);hTERT与P53日性率在未分化癌、有淋巴结转移或Ⅲ、Ⅳ期病例中增高(P<0.05):hTERT表达与P53表达具有相关性(P<0.05)。结论 hTERTgn P53的过度表达在甲状腺癌的发生发展过程中具有重要作用,P53突变在转录水平上调控hTERT基因的表达,激活端粒酶可能是甲状腺癌发生发展的重要阶段;hTERT和P53在甲状腺癌中表达的变化可用于评估其生物学行为和判断预后。

关键词: 端粒酶逆转录酶(, hTERT), P53, 甲状腺癌, 免疫组织化学

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2009年03月18日

【期刊论文】两种端粒酶逆转录酶启动子真核表达载体的构建

马春红, 刘华, 刘素侠, 王晓燕, 高立芬, 韩丽辉, 朱法良, 张艳, 杨咏梅, 吴伟芳

,-0001,():

摘要

目的:构建hTERT启动子和保留HBV同源序列的缺失点变hTERT启动子(pGL3del445)的真核表达载体,为进一步研究HBV与hTERT启动子的关系奠定实验基础。方法:通过双酶切及PCR方法从pCRTRTP载体上将全长及含有HBV同源序列的hTERT启动子的基因序列克隆到pPLbasic多克隆位点上,构建真核表达载体pGL3TRTP与pGL3Bdel445,将该两质粒与pRLtk共转染不同细胞系,评估其端粒酶启动子活性。结果:经测序证明成功构建了全长及含有HBV同源序列的hTERT启动子的真核表达载体pGL3TRTP和pGL3Bdel445,共转染实验中,证实在永生细胞系中重组子高效表达,在非永生正常细胞中重组子不表达。结论:构建的两种重组表达载体具有端粒酶启动子活性,在不同端粒酶表型的细胞系中其表达具有选择性。

关键词: 端粒酶逆转录酶・启动子・基因表达・基因融合・肝炎病毒, 乙型

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2006年08月16日

【期刊论文】RNA干扰hTERT基因治疗喉鳞状细胞癌的实验研究*

陶泽璋, 刘丹, 陈始明, 肖伯奎

中国肿瘤临床,2005,32(20):1182-1186,-0001,():

摘要

目的:探讨RNA干扰hTERT(人端粒酶逆转录酶)基因对人喉鳞状细胞癌的治疗作用。方法:根据hTERT cDNA序列构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1、pshRNA2。将shRNA质粒分别转染人喉癌Hep-2细胞株及荷瘤裸鼠瘤体内。以激光共聚焦显微镜观察质粒在Hep-2细胞及瘤体内的表达;以MTT法观察质粒对Hep-2细胞增殖的抑制作用;以蛋白印迹法(Western blot法)检测Hep-2细胞中hTERT蛋白的表达;以免疫组化SP 法检测裸鼠瘤体内hTERT蛋白的表达。结果:pshRNA1、pshRNA2转染Hep-2细胞及pshRNA1转染瘤体后,共聚焦显微镜下见大量的癌细胞表达绿色荧光,hTERT蛋白表达明显下降。细胞受pshRNA1、pshRNA2转染后, 其生长活性受到明显抑制。体内抑瘤实验表明,与空质粒载体组(pshRNA4)和生理盐水组相比,pshRNA1 组移植瘤生长明显受到抑制。结论:表达shRNA的、hTERT基因特异的真核表达质粒能有效转染体内、外喉鳞癌细胞,并可有效抑制人喉鳞癌细胞的生长,为今后应用RNA干扰基因治疗喉癌提供重要的实验参考。

关键词: hTERT RNAi, 头颈部肿瘤, 癌, 鳞状细胞, 基因治疗

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2006年08月16日

【期刊论文】小干扰RNA对喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原及p53蛋白表达的影响

陶泽璋, 周俊旭△, 周绪红, 肖伯奎, 陈始明, 刘丹

J Clin Otorhinolaryngol (China), Mar 2006, Vol 20, No6,-0001,():

摘要

目的:应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制裸鼠喉癌皮下移植瘤人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达,探讨移植瘤中增殖细胞核抗原(PCNA)及p53蛋白表达的变化。方法:根据hTERTcDNA序列构建表达短发夹RNA(shRNA)的、靶向hTERTmRNA的真核表达质粒pshRNA,其载体质粒含荧光素报告基因。建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下接种模型,将pshRNA转染入荷瘤裸鼠瘤体内,观察肿瘤生长情况。以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤体内的表达;以免疫组织化学SP法检测PCNA及p53蛋白在肿瘤内的表达。结果:所有裸鼠均接种成功,5d后可见皮下肿瘤形成,14d 左右肿瘤直径达5~7mm。pshRNA及空质粒载体转染入瘤体后,共聚焦显微镜下见癌组织中有绿色荧光表达。病理学检查发现:pshRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞分裂少见,可见大量癌细胞坏死。与注射生理盐水的对照组比较,转染质粒完毕后7d抑瘤率为76.50%,P<0.01。pshRNA治疗后瘤体内PCNA蛋白表达显著下调(P<0.05),p53蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论:靶向hTERTmRNA的shRNA可显著抑制人喉癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能是诱导PCNA 下调,促进p53蛋白表达所致。

关键词: 喉肿瘤, 癌,, 鳞状细胞, 小干扰RNA, 人端粒酶逆转录酶, 增殖细胞核抗原, p53蛋白

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2006年08月16日

【期刊论文】短发夹RNA沉默hTERT基因对人喉癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用

陶泽璋, 刘丹, 肖伯奎, 陈始明, 池花明

《癌症》Chinese Journal of Cancer, 2006, 25 (1): 11- 16,-0001,():

摘要

背景与目的:RNA干扰( RNA interference,RNAi) 是指双链RNA导入细胞后诱导靶mRNA发生特异性的降解,导致基因转录后沉默的现象。RNAi在基因功能和抗病毒基因治疗等方面均有报道。但对喉癌等头颈恶性肿瘤中高表达的人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因,目前尚未见报道。本课题利用RNAi 技术,研究短发夹RNA(short hairpinRNA,shRNA)抑制hTERT基因表达对裸鼠喉鳞状细胞癌皮下移植模型的抑瘤作用。方法:根据hTERT cDNA序列构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA。建立人喉癌Hep-2细胞株裸鼠皮下接种模型。将pshRNA转染入荷瘤裸鼠瘤体内,观察肿瘤生长情况。以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤组织内的表达;以HE染色法观察质粒治疗后瘤组织的病理改变;以原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况;以免疫组化SP法检测hTERT蛋白在肿瘤内的表达;光镜下观察心、肝、肾、脾结构的改变并测量血液学和血液生化指标。结果:pshRNA组(A组)、空质粒载体组(B组)与生理盐水组(C组)之间比较,A组与C组瘤体积有显著性差异(P<0.01),B组与C组之间瘤体积无显著性差异(P>0.05),抑瘤率为76.50%。pshRNA及空质粒载体转染入瘤体后,共聚焦显微镜下见大量的癌细胞表达绿色荧光。病理学检查及TUNEL检测发现:A组肿瘤生长受到抑制,细胞分裂相少见,可见大量肿瘤细胞坏死及凋亡,该组肿瘤细胞的凋亡指数[(26.47±4.25)%]明显高于B组[( 3.40±1.41)%]和C组[(2.73±1.35)%]。给予pshRNA后瘤体内hTERT蛋白表达明显下调,而且对心、肝、肾、脾无明显损害,对造血系统无影响。结论:表达shRNA的DNA载体质粒沉默hTERT基因可显著抑制人喉癌裸鼠肿瘤的生长,而且对心、肝、肾、脾及造血系统无明显的毒副作用。

关键词: 喉肿瘤, 短发夹RNA, hTERT 癌,, 鳞状细胞

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2006年03月03日

【期刊论文】Inhibition of human telomerase reverse transcriptase gene expression by gambogic acid in human hepatoma SMMC-7721 cells

郭青龙, Qing-Long Guo a, *, Sen-Sen Lin a, Qi-Dong You b, Hong-Yan Gu a, Jun Yu a, Li Zhao a, Qi Qi a, Fei Liang a, Zi Tan c, Xiaotang Wang c

Q.-L. Guo et al./Life Sciences xx(2005)1~8,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Gambogic acid, Human hepatoma, hTERT c-MYC, Telomerase

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2006年03月03日

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2010年07月16日

【期刊论文】Characterization and antitumor activity of triethylene tetramine, a novel telomerase inhibitor

刘建辉, Jianhui Liu, Lixia Guo, Fei Yin, Xuxu Zheng, Gang Chen, Yun Wang

Biomedicine & Pharmacotherapy 62(2008)480-485,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Triethylene tetramine, Telomerase, Human telomerase reverse trans, c, r, i, p, t, ase (, hTERT),

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2005年11月09日

【期刊论文】hTERT1658-2070在大肠杆菌中的克隆及表达

金洁, TONG Yin, JIN Jie, LOU Yinjun

肿瘤,2002,4(22):276~278,-0001,():

摘要

目的用基因工程的方法在大肠杆菌中表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)部分活性片段。方法PCR扩增hTERT cD-NA 1658-2070片段,将其克隆至表达载体pGEX-5x-3上,转化大肠杆菌TGl,获得hTERT蛋白片段表达。并经DNA测序及Westem blot验证表达蛋白。结果表达出的蛋白为GST-hTERT融合蛋白,分子量为38.8kD。经DNA测序及Westem blot 证实表达蛋白即为所需蛋白。结论在大肠杆菌中克隆并表达了hTERT部分片段。

关键词: 人端粒酶逆转录酶, 基因克隆, 蛋白表达

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2005年11月09日

【期刊论文】As2O3对KM3细胞端粒酶及其逆转录酶作用的研究

金洁, GUO Zhen-Xing, JIN Jie

中国实验血液学杂志,2004,12(3):346~349,-0001,():

摘要

为了探讨三氧化二砷(As2O3)对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3的作用及其可能机制,用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,用光镜、透射电镜观察形态变化,用DNA电泳观察As2O3诱导KM3细胞凋亡,用流式细胞仪检测细胞周期的变化,用TRAP-PCR-ELISA法检测As2O3作用KM3细胞后的端粒酶活性变化,并用半定量RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶(hTERT mRNA)的表达水平。结果表明:As2O3抑制KM3细胞的生长,具有诱导细胞凋亡的作用;As2O3阻滞细胞于G2期;As2O3可抑制KM3细胞的端粒酶活性和hTERT mRNA的表达。且hTERTmRNA下降趋势与端粒酶活性相一致。结论:端粒酶及其逆转录酶活性的下调可能在As2O3诱导KM3细胞凋亡的过程中起了重要作用。

关键词: 三氧化二砷, 多发性骨髓瘤, KM3细胞, 端粒酶, 端粒酶逆转录酶

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