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2006年11月09日

【期刊论文】人体脂肪基质细胞分离培养及其成骨潜能

田卫东, 陈希哲, 林云锋, 乔鞠, 闫征斌, 李声伟

实用口腔医学杂志,2004,20(1):12~15,-0001,():

摘要

目的:分离人体脂肪基质细胞并诱导培养其成骨表型。方法:将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行机械分割,通过Ⅰ型胶原酶消化后得到脂肪基质细胞,在BGJb培养基中原代培养10d,消化传代后用含体积分数10%FBS及10-8mol/L地塞米松,50mg/L左旋抗坏血酸,10nmol/L维生素D3,10mmol/Lβ2磷酸甘油钠的DMEM/F12培养基中诱导培养14d,观察细胞形态,绘制细胞生长曲线并对其成骨表型进行鉴定。结果:脂肪基质细胞呈成纤维细胞样贴壁生长,其中的成体干细胞经诱导培养后体积明显增大,胞核大面圆,胞浆丰富,群体倍增时间为66h。Gomori萘酚磷酸酯法染色显示其胞浆内富含碱性磷酸酶颗粒,vonKossa染色表明聚集的细胞团能形成矿化结节。结论:脂肪基质细胞中的成体干细胞经过矿化诱导培养后可向成骨细胞分化,并具有明显的成骨表型。

关键词: 脂肪基质细胞 成体干细胞, 细胞培养, 成骨表型

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2006年11月09日

【期刊论文】绿色荧光蛋白标记人脂肪基质细胞成骨分化能力体外实验研究*

田卫东, 林云锋, 敬伟, 陈希哲, 乔鞠, 李志勇, 严征斌, 吴凌, 田卫东△

四川大学学报(医学版),2006,37(5): 700~703,-0001,():

摘要

目的研究绿色荧光蛋白(GFP)基因体外转染人脂肪基质细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能。方法体外分离培养人脂肪基质细胞,用重组腺病毒载体Ad-GFP及脂质体介导质粒pEGFP-C1两种方法转染GFP基因,通过流式细胞术观察比较GFP转染和表达的结果;倒置显微镜下观察细胞生长情况;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况。结果重组GFP基因的腺病毒Ad-GFP转染的脂肪基质细胞的感染率达(42.5±1.5)%,16h即有GFP表达,7d时表达趋于稳定,感染6周时仍可见有GFP表达,明显优于脂质体转染组(转染效率最高为11.4%)。感染Ad-GFP后的脂肪基质细胞与未感染的对照组脂肪基质细胞成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)表达均逐渐增高,两组间差异无统计学意义(P>0105);诱导21d后两组均见到茜素红钙盐染色阳性。结论重组GFP基因的腺病毒载体Ad-GFP可高效率感染脂肪基质细胞,基因转染后细胞的增殖分化能力未受到影响,可以作为一种高效可靠的人脂肪基质细胞标记方法。

关键词: 脂肪基质细胞 绿色荧光蛋白, 基因转染, 分化

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2006年11月09日

【期刊论文】大鼠脂肪源性血管内皮细胞的培养及其形态特征*

田卫东, 林云锋, 陈希哲△, 阎征斌, 郑晓辉

生物医学工程学杂志,2006,23(4):836~838,-0001,():

摘要

切取4只雄性SD大鼠鼠蹊部皮下脂肪,通过机械分割和组织消化法获得脂肪基质细胞,用人内皮细胞培养基进行定向诱导,倒置显微镜下观察细胞生长状况,并以透射电镜及Ð因子免疫细胞化学方法对诱导后的细胞进行鉴定。SD大鼠脂肪基质细胞经过定向诱导后呈典型的铺路石样单层融合贴壁生长;细胞浆中Ð因子免疫细胞化学染色阳性;透射电镜显示细胞内具有内皮细胞特征性的Weibel-Palade氏小体,细胞边缘可见较多指状突起,胞浆内可见溶酶体等结构。结果证实从SD大鼠皮下脂肪获取得基质细胞经过定向诱导后,可以分化成为内皮细胞,该细胞具有与其它来源的血管内皮细胞相同的特征。皮下脂肪可以成为内源性血管内皮细胞的又一细胞来源。

关键词: 脂肪基质细胞 内皮细胞, 细胞培养

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