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2017年03月10日

【期刊论文】香芹酚纳米乳剂结合酸性电解水灭活鲜切卷心菜表面细菌,酵母和原生菌群

杨宏顺, Sow LC, Tirtawinata F, Yang H*, Shao Q, Wang S

Food Control,2017,76(-):88-95

2017年08月29日

摘要

Carvacrol is an effective antimicrobial agent originated from essential oils, this natural antimicrobial agent has higher consumer acceptance compared to chemical agents. Due to the low solubility of carvacrol in water, carvacrol was delivered as a nanoemulsion. A carvacrol nanoemulsion contained 3.5% (w/w) oil phase (1% carvacrol and 2.5% corn oil, w/w) and 3.5% (w/w) Tween 80 was produced by ultrasonification at 10 min using 100% amplitude; the median particle size was 309 ± 19 nm. The nanoemulsion was shelf-life stable for 1 month without any significant changes in particle size. When applied against Escherichia coli ATCC 25922 and Pichia pastoris GS115 growth in nutrient broth, carvacrol nanoemulsion (0.5% w/w carvacrol) achieved 3 log reductions of microorganisms. When microorganisms were fixed and dried on stainless steel coupon surface, the carvacrol nanoemulsion treatment was more effective on E. coli than P. pastoris with about 5 and 0.3 log reduction of viable count, respectively. The native microflora on shredded cabbages was challenged by combining carvacrol nanoemulsion and acidic electrolysed water (AEW) that contained 4 mg/L free available chlorine (FAC). The treatment reduced about 0.5 log of aerobic mesophilic and psychrotropic bacteria counts and the antimicrobial activity of carvacrol nanoemulsion and AEW lasted up to 2 days. The results indicated that carvacrol nanoemulsion is promising in controlling the safety of fresh-cut vegetables.

关键词: 纳米乳剂, 香芹酚, 纳米技术, 抗菌剂, 鲜切, 食品安全, 有机食品, 消毒, 大肠杆菌, 毕赤氏酵母, 超声强化, 高压匀浆;Nanoemulsion, Carvacrol, Nanotechnology, Antimicrobial, Fresh cut, Food safety, Organic food, Organic vegetables, Sanitisation, Escherichia coli, Pichia pastoris Ultrasonification, High pressure homogenisation

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2011年05月18日

【期刊论文】Cloning and Functional Analysis of a β-Amyrin Synthase Gene Associated with Oleanolic Acid Biosynthesis in Gentiana straminea MAXIM.

向凤宁, Yanling LIU, a, # Yunfei CAI, b, # Zhongjuan ZHAO, a Junfeng WANG, a Jing LI, c Wei XIN, a Guangmin XIA, a and Fengning XIANG*

Biol. Pharm. Bull. 32(5)818-824(2009),-0001,():

摘要

暂无

关键词: Gentiana straminea, β-amyrin synthase, methyl jasmonate, Pichia pastoris triterpenoid

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2010年10月18日

【期刊论文】Expression ofa laccase cDNAfromTrametes sp. AH28-2 in Pichia pastoris and mutagenesis of transformants bynitrogen ion implantation

肖亚中, Yuzhi Hong, Yazhong Xiao, Hongmin Zhou, Wei Fang, Min Zhang, Jun Wang, Lijun Wu & Zengliang Yu

FEMS Microbiol Lett 258(2006)96-101,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Trametes, laccase, Pichia pastoris recombinant expression, low-energy nitrogen ion implantation.,

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2010年08月31日

【期刊论文】巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展

王琦, 王黎明, 王琦*, 梅汝鸿

微生物学杂志,2004,24(2):42~45,-0001,():

摘要

巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱导表达及发酵等方面的基础研究及新近研究进展。

关键词: 巴斯德毕赤酵母, 基因表达系统, 外源蛋白

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2010年08月31日

【期刊论文】蜡样芽孢杆菌M22锰超氧化物歧化酶基因在毕赤酵母中的表达*

王琦, 王黎明, 尚玉磊, 王勇军, 王琦**, 梅汝鸿

农业生物技术学报,2005,13(3):360~364,-0001,():

摘要

实验成功地构建了毕赤酵母(Pichia pasfom)表达质粒pPIcZA-Min-sod,质粒线性化后通过电激法导人毕赤酵母GS115,抗生素zeocm抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株。PCR鉴定及Mut+表型分析表明,目标基因已经重组到宿主基因组染色体上;0.5%甲醇诱导表达后,SDS-PAGE结果显示,表达蛋白的相对分子量约为23kD,活性电泳出现明显活性条带;酶活性测定显示,重组菌株SOD活性比对照提高5倍左右;氯仿乙醇(3:5/V:V)和KCN(5mmol/L)抑制反应进一步证明,所表达的SOD为锰超氧化物歧化酶C。来源于蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)M22的Mn-sod基因在毕赤酵母中得到正确表达。为研究该酶的生理功能提供了必要的物质条件。

关键词: 锰超氧化物歧化酶(, Mn-SOD), 毕赤酵母, 表达

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2011年01月19日

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2009年10月21日

【期刊论文】豌豆来源的毒性抗虫白蛋白cDNA在毕赤酵母中异源表达及抗虫毒性分析

周天鸿, 李弘剑), 张毅), 周天鸿)*

中国生物化学与分子生物学报,2004,20 (1): 44~49,-0001,():

摘要

一种来源于豌豆的白蛋白(PA)对多种昆虫具有明显的毒性作用,为了进一步研究其抗虫机理,采用基因工程的方法富集蛋白质.将该白蛋白基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPICZaA.并导入毕赤酵母茵CS115中表达,通过PCR和Northem印迹法分析基因的整合及转录,对工程茵进行发酵,采用两步培养:第一步富集菌体,第二步甲醇诱导工程菌表达重组蛋白,并分泌到培养基中.经过超滤和HPLC分离,重组抗虫白蛋白得率约10 mg/L.重组蛋白对象鼻虫敏感株表现出很强的毒力,半致死剂量LC50为4.7,与直接纯化于豌豆种子的白蛋白毒力一致,而对象鼻虫抗性株无明显毒力.

关键词: 杀虫剂,, 豌豆白蛋白,, 异源表达,, 毕赤酵母,, 象鼻虫

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2009年04月27日

【期刊论文】SARS冠状病毒M 基因的克隆及其表达*

江丽芳, 晏辉钧, 赵卫, 方丹云, 周经姣, 龙北国, 张文炳, 郭辉玉, 江丽芳**

中国病毒学,2005,20(1):1~4,-0001,():

摘要

从SARS冠状病毒(GD322株)组织培养上清中提取RNA,进行RT PCR扩增其M基因并克隆到巴氏毕赤酵母表达载体pPICZ-B,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P-pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut-菌用甲醇诱导表达,SDS-PAGE检测其表达产物。Mut-酵母转化菌经甲醇诱导可分泌表达约6kDa和42 kDa的蛋白质,与SARS恢复期病人血清的免疫印迹证实它们为特异的重组M 蛋白质,且获得的重组M蛋白质具有免疫反应性。

关键词: SARS冠状病毒, M基因, 克隆, 巴氏毕赤酵母, 表达

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2009年04月27日

【期刊论文】Ⅱ型登革病毒E基因的克隆及其酵母表达*

江丽芳, 薛耀华, 魏惠永, 方丹云, 郭辉玉

中国人善共患病杂志,2003,19(6):31~33,-0001,():

摘要

目的 克隆2型登革病毒E基因并用酵母真核表达,获得全长的重组E蛋白,为其结构与功能的研究提供条件。方法 从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清中提取RNA,通过RT-PCR扩增E基因片段,与载体pPICZaB连接筛选得到重组质粒,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P. pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut菌诱导表达,SDS-PAGE、免疫印迹检测表达产物。结果 RT-PCR得到1.5kb的E基因片段,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因;Mut 酵母转化菌可分泌表达约69kDa的蛋白,与DEN2 E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白。结论 成功将克隆的全长DEN2 E基因在酵母菌中表达,获得的重组E蛋白具有免疫反应性。

关键词: 登革病毒, E基因, 克隆, 酵母菌, 表达

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2009年02月17日

【期刊论文】Investigation of recombinant Schistosoma japonicum paramyosin fragments for immunogenicity and vaccine efficacy in mice

潘卫庆, D. M. ZHANG, W. Q. PAN, L. QIAN, M. DUKE, L. H. SHEN, & D. P. MCMANUS

Parasite Immunology, 2006, 28, 77-84,-0001,():

摘要

暂无

关键词: paramyosin,, Pichia pastoris,, Schistosoma japonicum,, vaccine

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2007年04月30日

【期刊论文】Effective induction of phytase in Pichia pastoris fed-batchculture using an ANN pattern recognition model-basedon-line adaptive control strategy

史仲平, Hu Jin, Zhiyong Zheng, Minjie Gao, Zuoying Duan, Zhongping Shi, Zhen xiang Wang, Jian Jin

H. Jin et al. Biochemical Engineering Journal xxx (2007) xxx-xxx,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Fed-batch culture, On-line adaptive control, Pattern recognition, Phytase production, Pichia pastoris

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2009年07月29日

【期刊论文】mMR-1基因的克隆和在毕赤酵母中分泌表达

夏焕章, 李天伯, 胡洋*, 王以光**

生物工程学报, 2005, 21(1): 26~29,-0001,():

摘要

hMR-1为本实验室首次克隆发现的一个人类新基因,是一种和三种肌肉收缩蛋白及多种细胞信号蛋白具有相互作用的膜蛋白。经与鼠基因组数据库进行同源分析后设计合成引物,利用RT-PCR技术从小鼠C57BIJ6J脾脏T淋巴细胞总RNA中反转录得到鼠源MR-I基因(mMR-1),提交GenBank,收录号(AY299972)。序列分析证明其与人源MR-1基因(hMR-1)同源性为90.1%。构建表达载体pPIC9-mMR-1电转化Pichia pastoris GS115,筛选得到整合分泌表达mMR-1蛋白的重组酵母菌株。表达目的蛋白分子量25kD,诱导5d时产量达到50mg/L,通过Westem blot验证了表达产物的正确性。本研究为进一步研究新基因MR-1的生物学功能奠定了基础。

关键词: MR-1, 克隆与表达, 毕赤酵母

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2006年09月05日

【期刊论文】Construction of a recombinant Pichia Pastoris strain secreting insulin

李明刚, Shao-Hui Yang, Long-Fei Wang, Gui-Lan Li, Hou-Jian Hua, Tao Bo, Gong Chen, Xin Li, Hong-Zhou Jiang and Ming-Gang Li*

,-0001,():

摘要

暂无

关键词: expression, human insulin gene, Pichia pastoris GS115, secretion

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2004年12月28日

【期刊论文】高山被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的胞内表达

邢来君, 李明春, 孙颖, 张琦, 邢来君*

生物工程学报,2004,20,(1):34~38,-0001,():

摘要

γ-亚麻酸(GLA)作为人体必需的不饱和脂肪酸,具有重要的营养和药用价值。Δ6-脂肪酸脱氢酶是γ-亚麻酸合成途径中的关键酶。为了在毕赤酵母中建立一种新的合成γ-亚麻酸的表达体系,将高山被孢霉Δ62脂肪酸脱氢酶基因与胞内表达载体pPIC3.5K连接, SacⅠ线性化后电击法转化毕赤酵母SMD1168,获得的转化子经PCR鉴定目的基因已整合到毕赤酵母的基因组中。用甲醇诱导表达,通过脂肪酸气相色谱和气相色谱2质谱(GC2MS)联用分析表明高山被孢霉Δ62脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中获得表达,γ-亚麻酸含量占总脂肪酸的16.26%。

关键词: 高山被孢霉,, Δ6-脂肪酸脱氢酶,, γ-亚麻酸,, 毕赤酵母

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2005年03月31日

【期刊论文】凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1的cDNA克隆及在毕赤酵母中的表达

程克棣, 黄镇太, 杨金玲, 朱平

华中农业大学学报,2004,1(23):123~126,-0001,():

摘要

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)是氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的主要受体,它与动脉粥样硬化过程密切相关。通过RT-PCR从THP-1细胞系获得LOX-1cDNA并被克隆到载体pPIC9K的a信号肽的下游。线性化的重组质粒转化Pichia pastoris GSll5。阳性转化子经过BMMC液体培养基培养,上清液经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,出现1条在受体菌对照中不曾有的大小约43 kDa的蛋白带。重组蛋白的功能研究在进行中。

关键词: LOX-1, Pichia pastoris RT-PCR

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2005年01月28日

【期刊论文】Recombinant human heparin-binding neurite-promoting factor expressed with yeast stimulates neurites outgrowth

陈峥嵘, WANG Yichao, CHEN Zhengrong, CHEN Zhongwei, GUAN Xiaoqun, SONG Houyan, WU Xin and LIU Yinkun

Chinese Medical Journal 2002; 115(9): 1352-1357,-0001,():

摘要

暂无

关键词: gene expression, recombinant proteins, Pichia pastoris tumor cells,, cultured

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2005年01月28日

【期刊论文】D-氨基酸氧化酶在巴斯德毕赤酵母中的表达研究

周珮, 冯美卿, 史训龙, 于建, 袁中一, 周珮*

中国医药工业杂志2004,35(7),-0001,():

摘要

用分子生物学方法获得了D-氨基酸氧化酶(DAAO)的表达质粒(pPIC3.5k-DAAO),用其电转化巴斯德毕赤酵母GS115获得重组菌,经筛选获得高表达菌株PD27,并对其高密度培养和诱导条件进行了优化。PD27工程菌经250ml摇瓶发酵得到的DAAO活力达到2500~2600IU/L,在14L发酵罐中的表达水平优于其它表达系统。

关键词: D-氨基酸氧化酶, 巴斯德毕赤酵母, 表达

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2005年01月28日

【期刊论文】重组人载脂蛋白A-Ⅰ在Pichia pastoris中表达

周珮, 冯美卿, 蔡钦生, 宋大新, 钟江, 吴满平, 周珮*

,-0001,():

摘要

高密度脂蛋白(High-density Lipoprotein, HDL)是血浆中重要的脂蛋白,其主要成分为载脂蛋白AⅠ(Apoliprotein AⅠ, ApoAⅠ为了大量制备该蛋白,首先尝试利用Pichia pastoris表达系统高效表达ApoAⅠ。通过PCR扩增获得天然含人载脂蛋白ApoAⅠ的基因片断,将其插入到P.pastoris分泌型载体pPIC9K上,BglⅡ酶切线性化后电转化P.pastoris GS115,将获得的1000多个转化子依次在含不同G418浓度的YPD平板筛选高抗性转化子,得到的22个高抗性转化子经甲醇诱导,SDS-PAGE检测得到6株高表达菌。然后对其中的高表达菌株AP16的培养及诱导条件进行了优化,结果显示:接种后培养24-28h,转入诱导阶段,培养基pH值在7-7.5,菌体密度OD600=80左右,以1%甲醇诱导96h最有利于ApoAⅠ的表达,表达水平达160mg/L。14L发酵罐结果显示表达水平与摇瓶相当,均高于其它表达系统,为大批量制备奠定了基础。

关键词: 重组人载酯蛋白ApoAⅠ, Pichia pastoris(, 毕赤酵母), 表达优化,

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2005年01月28日

【期刊论文】D2氨基酸氧化酶在不同毕赤酵母宿主菌中的表达比较

周珮, 冯美卿, 黄海, 史训龙, 余志良, 袁中一*, 周珮*

生物工程学报,2004,20(4):572~577,-0001,():

摘要

D2氨基酸氧化酶(DAAO)在转化头孢菌素C生产72ACA和转化DL2氨基酸制备α-酮酸和L-氨基酸上起着重要的作用。采用DNA操作技术,将来源于三角酵母的DAAO基因连接至表达载体pPIC3·5K上,再将表达质粒pPIC3·5K-DAAO分别整合P. pastoris的宿主细胞KM71和GS115,经筛选获得阳性重组菌PDK13(MutS)和PD27(Mut+)。重点对两种突变菌的表达条件进行了比较。结果显示:PDK13(MutS)株比PD27(Mut+)株消耗甲醇慢、诱导时间长,但对通气量要求低、表达水平高,摇瓶活力分别达到2700和2500IUPL,14L发酵罐内活力分别达到10140和8463IUPL。初步探索了DAAO对DL2苯丙氨酸的拆分,结果显示基因工程菌表达的DAAO 具有良好的转化DL2苯丙氨酸制备苯丙酮酸和L2苯丙氨酸的能力。

关键词: D2氨基酸氧化酶,, 甲醇酵母,, 不同宿主菌,, 表达比较,, DL2苯丙氨酸,, 拆分

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2004年12月31日

【期刊论文】Comparing expression of different forms of human DNA topoisomerase I in Pichia pastoris

周世宁, Guowu Yang a, b, Huiqiong Zhou c, Yongjun Lu a, Yongcheng Lin d, Shining Zhou a, *

Enzyme and Microbial Technology xxx(2003)xxx-xxx,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Human DNA topoisomerase I, Pichia pastoris Secretory expression

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