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2011年06月21日

【期刊论文】单核细胞化学吸引蛋白质1小分子干扰RNA人肾小管上皮细胞株的建立

严海东, 刘娜, 李雪竹

中华肾脏病杂志,2007,23(4):251~256,-0001,():

摘要

目的建立单核细胞化学吸引蛋白质1(MCP-1)小分子干扰RNA(siRNA)人肾小管上皮细胞株,并检测MCP-1 siRNA对人肾小管上皮细胞(HKC)MCP-1基因的抑制效应。方法针对人MCP-1 mRNA 67、116、142位点设计并合成3对MCP-1 siRNA序列。构建MCP-1特异性siRNA真核表达载体,以脂质体法瞬时转染至HKC。转染24h后分别应用实时定量RT-PCR及Westem印迹技术检测HKC内MCP-1 mRNA、蛋白表达,筛选出抑制效率最高的MCP-1 siRNA。以筛选出的MCP-1 siRNA序列构建慢病毒穿梭质粒。使用慢病毒穿梭质粒进行慢病毒颗粒的包装和生产,得到病毒液并确定其滴度。以病毒液感染HKC,筛选MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株,并应用实时定量RT-PCR及Westem印迹技术检测HKc内MCP-1 mRNA、蛋白表达。结果成功建市MCP-1特异性siRNA人肾小管上皮细胞株。MCP-1 siRNA稳定转染能下调人肾小管上=皮细胞MCP-1 mRNA(68.49±6.38)%、蛋白(72.97±6.13)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论MCP-1特异性siRNA能高效抑制HKC内MCP-1基因表达。MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株的建立为MCP-1基因功能及肾问质纤维化防治研究提供实验材料和依据。

关键词: 单核细胞化学吸引蛋白质1; RNA, 小分子干扰; 纤维化; 人肾小管上皮细胞; 转染

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2011年04月21日

【期刊论文】三角帆蚌外套膊细胞蜡弊与组织培养的比较

施志仪, 李巍, 李松荣, 楼允东

上海水产大学学报,2002,11(1):27~30,-0001,():

摘要

通过对三角帆蚌外套膜外表皮进行组织培养和细胞培养的比较研究,表明组织培养比细胞培养更易荻得大量游离细胞,并且通过原子吸收光谱分析,证明体外培养的三角帆蚌组织和细胞皆能正常分泌珍珠质,且两者的分泌能力大体相同。

关键词: 三角帆蚌, 外套膜, 上皮细胞 珍珠囊, 蛆织培养, 细胞培养

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2011年03月18日

【期刊论文】鸡肠上皮细胞体外原代培养研究

高峰, 杨文平, 许辉堂, 施传信, 赵国刚, 周光宏*

江西农业学报,2007,19(5):113~115,-0001,():

摘要

取1月龄三黄鸡十二指肠的上皮细胞(intestinalepithelialcell,IEC),经分离纯化进行培养。结果表明:胰蛋白酶-EDTA配合使用、短时间消化收获细胞法可获得大量的健全肠绒毛隐窝单位,进一步培养获得的IEC完全可供相关实验研究之用。

关键词: 鸡, 小肠, 上皮细胞 体外原代培养

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2011年03月16日

【期刊论文】中华鳖胃黏膜和胃腺上皮细胞的超微结构

陈秋生, 苏泽红, 陈晓武

南京农业大学学报,2004,27(3):139~141,-0001,():

摘要

用透射电子显微镜观察15只健康中华鳖的胃黏膜上皮和腺上皮细胞的超微构造。结果显示,胃黏膜上皮为单层高柱状,细胞上部胞质中充满黏液性颗粒,其形状多样化;上皮中有少量淡染的亮细胞,其结构与周围细胞基本相同,只是数量有差异;上皮细胞之间具有明显的细胞连接。胃腺上皮细胞还未分化为独立的主细胞和盐酸细胞,但腺体细胞的结构同时具备两种细胞的特征,即既有发达的细胞内小管和丰富的线粒体,又有大量膜包分泌颗粒和粗面内质网。上述结果表明,中华鳖胃黏膜上皮具有分泌黏液的细胞结构;一种胃腺细胞可同时执行分泌盐酸和胃蛋白酶原的功能。

关键词: 中华鳖, 胃黏膜, 胃腺, 上皮细胞 超微结构

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2010年12月16日

【期刊论文】兔眼与猪眼视网膜色素上皮细胞分离及培养方法的对比

马景学, 刘丽娅, 高彦军, 安建斌, 温晓英

眼科研究,2010,28(1):11~14,-0001,():

摘要

目的 分别对兔眼及猪眼视网膜色素上皮(RPE)细胞进行体外分离、培养和鉴定,探讨二者的异I司点及注意事项。方法 对有色兔眼和猪眼的RPE细胞采用胰蛋白酶消化法进行分离、培养和传代,取第4代细胞用于实验。免疫细胞化学染色对传代的细胞进行鉴定。光学显微镜F观察并比较培养的2种动物来源RPE细胞的形态、特征,并对2种动物来源的RPE细胞的培养过程进行比较。结果 2种动物来源的RPE细胞分离片法的不同与各自眼球的解剖结构相关,主要体现在消化过程,猪眼RPE细胞1次消化即可分离,兔眼RPE细胞需2次消化得到。原代猪眼RPE细胞24 h内贴壁较兔眼48~72 h贴壁时间。培养早期细胞生长活跃,随传代次数增加活力下降,色素颗粒减少。免疫细胞化学染色提示细胞角蛋白(AEl/AEl3)表达阳性。结论 2种动物来源的RPE细胞均可通过胰蛋白酶消化法分离,获得的RPE细胞数量多,培养成功率高。猪眼RPE细胞的分离培养更为容易。4代以内的RPE细胞适合于实验研究。

关键词: 视网膜色素上皮细胞 兔, 猪, 细胞培养

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2009年11月08日

【期刊论文】反义cubilin RNA对白蛋白刺激肾小管上皮细胞分泌趋化因子的影响

何娅妮, 杨聚荣, 周萍, 刘大维, 张建国, 陈晶

中华肾脏病杂志,2004,20(4):250~254,-0001,():

摘要

目的观察反义cubilin RNA对白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞(HK-2)表达单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、RANTES的影响。方法应用基因克隆技术构建反义及正义cubilin真核表达载体(pcDNA-ACUB、pcDNA-CUB),酶切鉴定及序列测定证实插入序列是否正确。脂质体DOTAP将其转染至HK-2细胞,流式细胞仪(FCM)检测反义cubilin RNA对HK-2细胞重吸收白蛋白的抑制作用。细胞转染72h后给予高浓度白蛋白(10g/L)刺激24h,细胞ELISA、Western印迹法检测HK-2细胞表达MCP-1、RANTES的变化。结果pcDNA-ACUB转染组白蛋白摄取率较DOTAP组显著降低(P<0.01)。与DOTAP组比较,pcDNA-ACUB转染组HK-2细胞MCP-1、RANTES的表达显著降低(P<0.001)。结论反义cubilin RNA可抑制肾小管上皮细胞对白蛋白的摄取,并能拮抗白蛋白刺激肾小管上皮细胞趋化因子的表达,提示cubilin在白蛋白介导的肾小管上皮细胞分泌趋化因子中起重要作用。

关键词: 反义RNA, 趋化因子, 白蛋白, cubilin, 肾小管上皮细胞

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2009年11月08日

【期刊论文】牛磺酸对顺铂引起的原代培养兔肾小管上皮细胞膜流动性的影响

周世文, 刘世杰

中国药房,2001,8(12):460~461,-0001,():

摘要

目的:研究顺铂对培养的兔原代肾小管上皮细胞膜流动性的改变以及牛磺酸对肾小管上皮细胞膜的保护作用。方法:采用体外培养兔肾小管上皮细胞,顺铂损伤组用不同浓度的顺铂与肾小管上皮细胞共同孵育24h,牛磺酸保护组用不同浓度牛磺酸预先与肾小管上皮细胞孵育24h,然后再加入顺铂(26µmol/L)共同孵育24h,用DPH荧光探剂法测定细胞膜流动性。结果:顺铂13、26、52µmol/L能导致肾小管上皮细胞荧光偏振度(P),各向异性(γ)和微粘度(η)显著下降(P<0.01),牛磺酸在lOg/L时可逆转顺铂导致的P、γ和η的下降(P<0.05)。结论:顺铂可引起体外培养的兔肾小管上皮细胞膜流动性增加,牛磺酸可降低膜流动性,具有膜稳定性。

关键词: 顺铂, 牛磺酸, 肾小管上皮细胞 膜流动性

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2009年11月02日

【期刊论文】肺炎链球茵在体外触发人肺Ⅱ型上皮细胞F-actin细胞骨架重排

尹一兵, 徐邦牢, 张雪梅, 罗进勇

中华微生物学和免疫学杂志,2003,23(4):288~291,-0001,():

摘要

目的通过体外实验研究肺炎链球菌(Streptococcus pnezunoniae,S.pn)侵袭A549细胞和微丝肌动蛋白细胞骨架重排之间的关系。方法采用Factin特异性FITC-phalloidin荧光染料,观察_s.pn作用于A549细胞前后的F—actin细胞骨架重排情况;用F—actin细胞骨架重排抑制剂——细胞松弛素D预处理A549细胞,观察S.pn对A549细胞的侵袭率;分别使用PLC、TPK信号转导抑制剂U73122、(enistein处理因素预处理A549细胞,观察其与F—actin细胞骨架重排的关系。结果S.pn作用4,49细胞后,F-actin细胞骨架呈块状、丝状聚集;F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D可明显降低s.pn对A549细胞的侵袭率,在其浓度为0.25ug/ml时,未得到可测的细菌数;PLC(磷脂酶C)、TPK(酪氨酸蛋白激酶)信号转导途径抑制剂可部分抑制4 549细胞Factin细胞骨架重排,其相关系数分别为:rPLC=-0.88(P<0.05); rTPK=-0.91(P<0.05)。S.pn细胞壁作用4549细胞后,Factin绌胞骨架呈块状、丝状聚集,二者间存在剂量依赖关系。结论S.pn可通过PLC、TPK细胞信号转导途径触发A549细胞F-actin细胞骨架重排,进而导致S.pn侵袭A549细胞

关键词: 肺炎链球菌, 肺Ⅱ型上皮细胞(, A549), 细胞骨架, 信号转导, 侵袭

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2009年11月02日

【期刊论文】钙信号转导途径介导肺炎链球菌侵袭人肺Ⅱ型上皮细胞

尹一兵, 徐邦牢, 罗进勇, 朱旦, 孟江萍

微生物学报,2003,43(6):789~792,-0001,():

摘要

用F-actin特异性FITC-phalloidin荧光染料,观察肺炎链球菌(StrepLococcus penumonioe)作用A549细胞前后的F-actin细胞骨架重排情况;用细胞松弛素D预处理A549细胞,观察肺炎链球菌对A549细胞的侵袭率;使用Datrolene预处理A549细胞,观察其与F-actin细胞骨架重排百分率间是否存在剂量依赖关系;用Fura-2/AM荧光探针负载A549细胞后测定肺炎链球菌粘附A549细胞后的胞内Ca2+浓度.结果发现肺炎链球菌作用A549细胞后,F-actin细胞骨架呈块状、丝状聚集;而松弛素D可明显降低肺炎链球菌对A549细胞的侵袭率;肺炎链球菌粘附A549细胞后胞内Ca2+高于对照;Datrolene可部分抑制A549细胞F-actin细胞骨架重排,且与Factin细胞骨架重排百分率间存在量效关系。以上结果提示肺炎链球菌可通过Ca2+细胞信号转导途径触发A549细胞Factin细胞骨架重排,进而导致肺炎链球菌侵袭A549细胞:

关键词: 肺炎链球菌,, 肺Ⅱ型上皮细胞(, A549), ,, 细胞骨架,, 信号转导,, 侵袭

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2009年05月08日

【期刊论文】Wilms瘤1基因在肾小管上皮细胞转分化中的表达及作用

姜傥, 袁飞, 刘云启, 杜勇, 周建中

中华肾脏病杂志,2005,21(8):448~452,-0001,():

摘要

目的 探讨Wilms肿瘤1基因(WT1)在肾小管上皮细胞(TEC)向肌成纤维细胞转分化中的可能作用。方法 将体外原代培养TEC分别置含IL-1α(10ng/ml)、IL-1α+抗WT1中和抗体(10μg/ml)的DMEM/F12培养基中培养,观察TEC的形态变化及免疫学特征。采用RT-PCR检测各组TEC中WT1及α-SMA的表达。结果 经IL-1α掺入培养5d后,体外培养的TEC形态特征趋于成纤维细胞化,细胞拉长、梭形变,失去原有的呈铺路石样的生长方式。电镜下细胞极性丧失,表面微绒毛消失。正常情况下,成年TEC不表达WT1。经IL-1a掺入培养1d后,TEC重新表达WT1,同时伴有α-SMA的表达;3d后WT1表达消失。呈一过性特征,而α-SMA的表达则随时间的延长而逐渐增强。在培养中掺入抗WT1抗体以中和WT1基因产物后.尽管仍给予IL-1a刺激,TEC大都保持原有特征不变,α-SMA及WT1mRNA仅呈微弱表达。结论 高浓度IL-1α可导致FEC向肌成纤维细胞的转分化。在TEC的转分化过程中。WT1基因的重新、一过性表达可能起着重要作用。成年TEC重新获得WT1表达,可能是其发生转分化的内在启动机制。体外中和WT1的基因产物可明显抑制TEC的转分化进程,并可能籍此影响肾脏的纤维化发生。

关键词: 肾小管, 上皮细胞 Wilms瘤基因, 转分化

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2009年04月23日

【期刊论文】同源盒基因Pax-6在晶状体发育过程中的表达分析

刘奕志, 夏朝霞, 刘欣华

眼科研究,2003,21(1):4~7,-0001,():

摘要

目的 建证晶状体连续发育模型,检测Pax-6基因在小鼠晶状体发茸的不同阶段的表达情况,探讨该基因在小鼠晶状体发育叶中的作用。方法 利用RT-PCR法和Weslenl blot法,检测Pax-6在小鼠品状体发育不同阶段中的表达状况。结果 在鼠肝9.5d(E9.5)即可榆测到Pax-6的表达,在萁连续发育阶段的E12.5,E17.5及新生10、20、60d均可检测到Pax-6的表达。Western blot法同样在体外发现培养的原代细胞,传第1、第2及第3代的晶状体上皮细胞(LECs)中均能检测到Pax-6蛋白水平的表达,结论 小鼠晶状体发育的各个阶段均具有Pax-6基因,该基困的正常表达是晶状体发育的必要条件。

关键词: 晶状体上皮细胞 Pax-6基因 发育

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2009年04月20日

【期刊论文】支气管哮喘与原癌基国c-fos关系探讨

罗百灵

中国现代医学杂志,2000,10(5):11~12,-0001,():

摘要

为探讨支气管哮喘与原癌基国Proto-oncogene c-fos间关系,该文建立了哮喘豚鼠模型,用免疫组化及图像分析测定支气管上皮细胞c-fos蛋白表达量。结果哮喘组病理检查细支气管壁上皮细胞脱落、上皮层破坏明显,上皮细胞c-fos蛋白表达量(29.13±7.2)%显著高于DXM治疗组(15.0±2.96)及对照组(4.19±1.25)。说明c-fos表达增强可能与哮喘发生癌切相关,而且c-fos作用机制可能与其治化、损伤气道上皮细胞有关。骨上殊皮质淑素能控制哮喘可能与其下调c-fos基国表达相关。

关键词: 支气管哮喘, c-fos基因, 支气管上皮细胞 豚氟

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2009年03月15日

【期刊论文】N2乙酰化壳聚糖膜的制备和性质研究

刘万顺, 刘伟治, 韩宝芹, 贺君

中国生物医学工程学报,2004,23(2):182~186,-0001,():

摘要

以乙酸和甲醇为介质,利用壳聚糖和乙酸酐制备出N2乙酰化壳聚糖膜。对膜的亲水性、吸水性、结晶性、透光性、渗透性以及对血清蛋白的吸附性和与兔角膜上皮细胞的生物相容性进行了研究。结果表明N2乙酰化壳聚糖膜有一定的亲水性、吸水性、结晶性,有很好的透光性和渗透性,对血清蛋白有一定的吸附能力,以该膜为载体培养兔角膜上皮细胞实验结果表明膜与兔角膜上皮细胞具有很好的生物相容性。

关键词: N2乙酰化壳聚糖膜, 物理性质, 角膜上皮细胞 生物相容性

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2009年02月16日

【期刊论文】小鼠实验性肺纤维化上皮细胞—间充质细胞转变及骨桥蛋白的表达

许增禄, 吕娟, 许增禄*, 仇文颖, 钱晓菁, 徐园园, 常青, 张成侠

解剖学报,2008,39(3):420~425,-0001,():

摘要

目的 从形态学上证实小鼠实验性肺纤维化上皮细胞-间充质细胞转变(EMT)及骨桥蛋白(OPN)的表达变化。方法 将60只健康雄性C57BLP6小鼠随机分为生理盐水对照组和博来霉素(BLM)模型组,采用口咽抽吸法经咽部注入气管50μl博来霉素溶液,对照组注入50μl生理盐水。分别在造模后第3d、7d、14d、21d及28d 5个时间点处死对照组及模型组小鼠。取小鼠左肺制备石蜡切片,行苏木素-伊红(HE)染色及天狼猩红染色观察肺组织形态变化及胶原增生情况;行表面活性物质相关蛋白-C(SP-C)、上皮型钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形蛋白(vimentin)、成纤维细胞特异蛋白1(FSP1)和骨桥蛋白(OPN)免疫组织化学染色,观察肺纤维化上皮细胞-间充质细胞转变(EMT)形态与OPN表达,利用图像分析软件Image-Pro Plus 6.0(IPP6.0)测量切片积分吸光度(IA)并进行统计分析。结果 HE及天狼猩红染色显示出小鼠肺组织正常结构和纤维化形态变化,并且模型组小鼠肺组织的胶原生成量随时间推移而增加(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,模型组小鼠肺OPN表达量随病程进展持续升高,在纤维化期达到峰值,而对照组表达量很少(P<0.05);对照组SP-C在Ⅱ型肺泡细胞恒定表达,模型组SP-C持续增加,且胞体增大;对照组E-Cadherin表达量多,而模型组在肺实变部位几乎不表达,但肺实变部位产生波形蛋白及FSP1,这些蛋白提示肺纤维化存在EMT。结论 BLM诱导性肺纤维化中存在EMT,且与显著增加的OPN有潜在关系。

关键词: 肺纤维化, 上皮细胞-间充质细胞, 转变, 骨桥蛋白, 免疫组织化学, 小鼠

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2007年11月26日

【期刊论文】神经组织细胞特异性蛋白在大鼠羊膜上皮细胞中的表达

陈东, Lou

中国临床康复2006-07-10出版第10卷第25期/Chinese Journal of Clinical Rehabilitation July 10, 2006, Vol. 10, No. 25,-0001,():

摘要

背景:有证据表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原,且可以分泌多种神经营养因子及递质。若羊膜上皮细胞能够代替神经细胞,其神经营养作用必将为治疗神经推行性病变带来广阔前景。 目的:检测神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中是否表达? 设计:重复测量设计。 单位:吉林大学第二临床医学院,吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。 材料:实验于2004-10/2005-10在吉林大学基础学院组织与胚胎学教研室完成。选取清洁级孕12~14d的Wistar大鼠1只,将分离出的羊膜上皮细胞用于实验。小鼠抗大鼠神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶单克隆抗体、免抗大鼠神经元特异性烯醇化酶和NT-3多克隆抗体(武汉博士德公司);大鼠抗大鼠Musashi抗体(日本庆应义塾大学岗野荣之教授惠赠)。 方法:取孕12~14d的Wistar大鼠胎盘,剥离羊膜获得上皮细胞,在37℃、体积分数为0.05的CO2环境下,胰蛋白酶消化5min,加入DMEM/F12培养液,以5×109L-1的浓度接种于培养瓶中。培养3d后,细胞以1×108L-1的浓度接种于预先涂有多聚赖氨酸的直径35mm平皿中,用质量浓度为40g/L的多聚甲醛固定20min。采用免疫细胞化学染色方法对神经元特异性抗原微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶在羊膜上皮细胞中的表达情况进行检测。 主要观察指标:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况。 结果:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察:羊膜上皮细胞培养24h后,细胞扁平呈成纤维细胞样。3~5d后,胞体饱满,核大而圆,核仁清晰,突起发达,并互相连成网状。②神经组织细胞培养特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况:培养4d后免疫细胞化学染色结果可见,羊膜上皮细胞表达Nestin、神经元特异性烯醇乙酶、乙酰胆碱转移酶以及Musashi、神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白。 结论:羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性,可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源。

关键词: 羊膜, 上皮细胞 免疫细胞化学, 染色法, 组织细胞, 大鼠

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2007年11月26日

【期刊论文】羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病大鼠的实验研究

陈东, 朱梅, 孟晓婷, 陈爱军

中国老年学杂志2006年2月第26卷,-0001,():

摘要

目的 探讨羊膜上皮细胞纹状内移植对帕金森病(PD)大鼠的治疗作用。方法 采用RT-PCR方法检测人羊膜上皮细胞株FL表达脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子-3(NT-3)mRNA;Hoechest33342标记后微移植方法将其移入PD大鼠模型纹状体内,免疫荧光技术检测移植细胞表达BDNF、NT-3状况。结果 羊膜上皮细胞能够表达BDNF、NT-3,植入纹状体内能够存活,并在第2周内明显改善PD大鼠的行为学症状。结论 羊膜上皮细胞可作为表达神经营养因子治疗PD的移植细胞。

关键词: 细胞移植, 神经营养因子, 帕金森病, 羊膜上皮细胞

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2007年11月26日

【期刊论文】羊膜上皮细胞促进共培养神经干细胞存活及分化

陈东, 孟晓婷, 刘佳梅, 路来金

吉林大学学报(医学版)2004年3月第30卷第2期/Journal of Jilin University (Medicine Edition) March., 2004, Vol. 30, No.2,-0001,():

摘要

目的:探讨羊膜上皮细胞是否能在体外促进胚胎脑神经干细胞的存活及分化。方法:Neurosphere法分离、克隆E12~14d Wistar大鼠脑组织的神经干细胞。同时从羊膜中分离羊膜上皮细胞。将神经干细胞与羊膜上皮细胞在不同条件下共培养,通过免疫组织化学法对羊膜上皮细胞及神经干细胞的分化进行检测。结果:羊膜上皮细胞表达神经干细胞及神经元、神经胶质细胞表面抗原;与羊膜上皮细胞共培养的神经干细胞克隆的分化细胞总数、分化为神经元的百分率及神经元初级突起长度明显高于对照组。结论:羊膜上皮细胞与神经干细胞具有一定的同源性;羊膜上皮细胞能促进体外培养的神经干细胞的分化,且主要向神经元分化,并促进神经元初级突起的生长。提示羊膜上皮细胞为神经干细胞提供促进其分化及存活适宜的微环境。

关键词: 神经干细胞, 羊膜, 上皮细胞 细胞分化

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2007年05月22日

【期刊论文】CD11c和NLDC-145单克隆抗体标记的阳性细胞的观察

徐玉东, 徐媛媛, 刘丽, 贾立敏, 钟淑琦, 魏岚, 赵太平, 马月秋, 伊藤恒敏

解剖学报2004年8月第35卷第4期/ACTA ANATOMICA SINICA Aug., 2004, Vol. 35, No. 4,-0001,():

摘要

目的:探讨CD11c和NLDC-145单克隆抗体标记胸腺内何种间质细胞,并是否具有特异性。方法:应用CD11c单克隆抗体及NLDC-145单克隆进行标记,采用免疫荧光双重染色法及免疫电镜法对胸腺内间质细胞进行观察。结果:CD11c阳性细胞为指状嵌入突起细胞((interdigitating cell, IDC)及少数巨噬细胞。NLDC-145阳性细胞为胸腺上皮细胞。结论:CD11c标记IDC,NLDC-145标记胸腺上皮细胞。胸腺巨噬细胞中存在小同亚群。

关键词: 指状嵌入突起细胞, 胸腺上皮细胞 巨噬细胞, CD11c抗体, NLDC-145抗体, 小鼠

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2006年11月15日

【期刊论文】罗格列酮对高糖刺激下肾小管上皮细胞整合素β1表达的影响

黄颂敏, 唐晓红, 谭世桥, 任敏

西部医学,2006,18(2):134~136,-0001,():

摘要

目的观察罗格列酮(Roslglltazone,ROS)对肾小管上皮细胞整合索水平的影响。方法将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞分为对照组、正常血糖组(N)、高糖组(H)、正常培养液+罗格列酮组(ROS)、高糖+罗格列酮低浓度组和高糖+罗格列酮高浓度组六组,采用WesternBlot及RT-PCR了解不同浓度的罗格列酮(5#mol/L、10,umol/L)对高糖刺激(30mmol/L)下整合紊βl(Integrin-beta1)蛋白质水平表达的影响。结果高糖刺激下,IntegrinBl(84710、79±1810.4)较对照组(23283.17±827.55)及正常葡萄糖组(47896.31±2014.63)明显增加(P<0.05),ROS组IntegrlnBl(22609.495=1076.26)较高糖组降低,ROS10mol/L组(38603. 43±1409.30)的降低程度较ROS5μmol/L组(31327.16±1721.36)更明显。结论罗格列酮可明显抑制高糖刺激下肾小管上皮细胞Integrinβ1的表达,且有明显剂量依赖关系。

关键词: 近端肾小管上皮细胞 高糖, 罗格列酮, 整合素β1

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2005年03月16日

【期刊论文】永生化人晶状体上皮细胞细胞周期调控相关基因表达的检测

曾骏文, 吴明星, 李绍珍, 高劲松, 刘奕志

中华眼科杂志,2002,38(6):367-372,-0001,():

摘要

目的 探讨人类晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)周期调控中的细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白激酶(cyclin dependent kinase 2,CDK2)和细胞周期蛋白激酶抑制因子(cyclindependent2kinase inhibitor,CKI) p21基因的表达,阐明HLEC增殖和晶状体后囊膜混浊(posterior capsule opacification,PCO)的分子机制。方法 体外培养永生化HLEC系HLE-B3,用二步过量胸苷阻断法进行细胞周期同步化;流式细胞仪检测细胞周期;收集不同时相的细胞提取总RNA。用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测细胞周期蛋白E、CDK2和p21的mRNA表达;分别用免疫组织化学染色和Western blot法检测细胞周期蛋白E和CDK2及p21的蛋白表达。结果 流式细胞仪检测:HLE-B3细胞周期处于G1期,占33.5%;S期,占46.1%;G2期,占20.4%;处于S期及G2期细胞的比例约占总数的66.5%。RT-PCR检测:可见不同周期时相的HLE-B3细胞(细胞周期蛋白E和CDK2)mRNA的表达,但在不同步化的细胞时相中未检测出细胞周期蛋白E的表达。而在同步化的S期细胞中有少许p21mRNA表达。免疫组织化学染色未检测出细胞周期蛋白E阳性细胞,仅可检测出少部分p21阳性细胞。Western blot法检测结果:CDK2阳性表达以S期细胞明显,G1期和G2期略低于S期表达。不同步化细胞也有CDK2的表达。提示细胞周期蛋白E、CDK2与p21的mRNA蛋白表达不平衡。结论体外培养HLE-B3细胞周期过程中存在细胞周期蛋白E、CDK2和p21的表达,且存在表达不平衡。细胞周期蛋白E、CDK和CKI间的表达不平衡有可能是其体外增殖细胞周期分子机制之一。

关键词: 晶体, 上皮细胞 细胞培养, 细胞周期蛋白E, 细胞周期蛋白质依赖激酶类

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