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2009年11月01日

【期刊论文】人胚胎生殖细胞在人胚胎成纤维细胞饲养层上的生长

王亚平, 刘永刚, 韩兵, 陈地龙, 李芳菲, 王亚平*, 王莎莉

解剖学报,2005,36(3):716~719,-0001,():

摘要

目的探讨以人胚胎成纤维细胞为饲养层分离、培养人胚胎生殖细胞的方法和条件。方法分离、培养3-4月胚胎成纤维细胞,取3~15代细胞经丝裂酶素处理后铺板备用;分离6~11周胚胎原始生殖细胞,将其置于人胚胎成纤维细胞饲养层上,在含生长因子、分化抑制因子的培养体系中培养胚胎生殖细胞;用免疫细胞化学方法检测胚胎生殖细胞表面标志SSEA-1和SSEA-4;钙,钴法检测碱性磷酸酶活性;RT-PCR检测转录因子Oct-4的表达。结果人胚胎成纤维细胞可连续传代25代以上(6月),3~15代细胞可以用作饲养层细胞。分离的胚胎生殖细胞在饲养层上可增殖形成典型胚胎生殖细胞集落,并能连续在体外培养超过8代。集落未分化标志检测显示SSEA-1、SSEA-4呈阳性,碱性磷酸酶活性呈强阳性,Oct-4表达阳性。结论用人胚胎成纤维细胞作为饲养层能获得可连续增殖的胚胎生殖细胞。

关键词: 胚胎生殖细胞, 胚胎成纤维细胞, 细胞培养, 免疫细胞化学, 逆转录聚合酶链反应, 人胚

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2009年06月09日

【期刊论文】人胚胎成纤维细胞与小鼠胚胎成纤维细胞生物学特性比较

赵连三, 张怡, 八汪成孝, 雷秉钧

生物医学工程学杂志:251-254,-0001,():

摘要

探讨人胚胎成纤维细胞用于人胚胎干细胞体外长期培养的可行性,以含10%胎牛血清的DMEM(低糖)溶液为培养基,对人胚胎成纤维细胞的生长形态、对胰酶的敏感性、生长曲线及细胞周期进行研究,并与小鼠胚胎成纤维细胞作比较。结果显示,人胚胎成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞在体外均为贴壁生长型细胞,与小鼠胚胎成纤维细胞相比,人胚胎成纤维细胞生长更旺盛,且细胞寿命更长;在室温条件下,对0.255胰酶更敏感,消化时间不宜超过3mim。提示人胚胎成纤维细胞不仅在生长状况上与小鼠胚胎成纤维细胞类似,而且作为人胚胎干细胞体外长期培养的饲养层,在使用期限上优于后者,值得进一步研究。

关键词: 人胚胎成纤维细胞, 小鼠胚胎成纤维细胞, 生物学特性

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2011年04月06日

【期刊论文】水稻中的磷转运蛋白基因在异源表达系统中的功能分析

孙淑斌, 郭强, #, Yu Ling, 徐国华, *

中国水稻科学,2008,22(3):227~233,-0001,():

摘要

为了更好地研究植物在磷素吸收过程中的分子机制以及生物化学过程的变化,将水稻中分离得到的一个磷转运蛋白基因(OsPT6)用于互补实验。互补实验结果表明,OsPT6能够与缺失磷转运功能的酵母突变体实现互补,并在低磷条件下促进酵母突变体对磷的吸收。进一步分析表明OsPT6属于水稻Phtl家族运输蛋白基因,所编码的蛋白对磷酸盐(Pi)的吸收Km值为96μmol/L,属于高亲和的磷转运蛋白。不同的酵母转化子对不同pH环境的响应实验显示,OsPT6是一个与质子相偶联的磷运输蛋白,其吸收磷素的最佳pH为6.0。对OsPT6在人的胚胎肾细胞(HEK293)中的表达分析表明,该基因能够编码蛋白并定位于细胞膜,证明OsPT6的功能与酵母磷转运子PHO84相似,是一个定位于细胞膜上的具有吸收转运磷素作用的运输蛋白。

关键词: 水稻, 磷转运蛋白, 酵母, 人胚胎肾细胞, 功能分析

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2005年03月08日

【期刊论文】人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ基因的克隆与表达

杨慧, 苏玉金, 江小华, 姜重建, 张宇新, 杨秋慧, 徐群渊

解剖学报,2003,34(4):349~352,-0001,():

摘要

目的 研究人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ(GCH Ⅰ)基因在多巴胺代谢过程中的作用。方法 从人胚胎肝脏中提取总RNA,以RT-PCR法扩增GCH ⅠcDNA,克隆于PGEM-T-easy载体中,测序正确后+G18再构建真核表达载体,转染猴肾成纤维细胞系COS7,原位杂交检测其表达。结果 RT-PCR扩增出904bp的cDNA,并成功构建真核表达载体pCI-neo-GCH Ⅰ,原位杂交证实其在COS7表达阳性率为70%~80%。结论 GCH Ⅰ有望用于帕金森病的基因治疗。

关键词: 三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ, RT-PCR, 原位杂交, 人胚肝脏

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