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2010年12月16日

【期刊论文】A族链球菌表面蛋白Fba的原核表达及免疫原性分析

魏林, 马翠卿, 李彩虹, 王秀荣, 王秀文, 尹晓琳, 顾海燕, 冯惠东

中华传染病杂志,2008,26(3):146~150,-0001,():

摘要

目的 研究A族链球菌(GAS)表面新型纤连蛋白Fba的免疫原性,探讨GAS感染机体的免疫应答机制。方法 PCR扩增fba基因,测序正确后克隆至原核表达质粒pGEX4T-2,并在-E. coli BL21中表达,应用ELISA和Western印迹法鉴定目的蛋白表达,以该蛋白作为抗原,包被酶联板,检测GAS全菌免疫鼠血清、33份抗链球菌“O”阳性患者血清。同时,将该蛋白免疫Balb/C小鼠,3次免疫后收集皿清,检测IgG效价。结果 ELISA和Western印迹证实,表达的Fba重组蛋白可与已知兔抗Fba阳性血清产生特异性反应;且Fba蛋白可与GAS全菌免疫鼠血清、抗链球菌“O”阳性患者血清发生特异性结合。Fba蛋白免疫小鼠后抗血清IgG效价达1:4800。结论 GAS感染或Fba蛋白免疫动物后均可诱导动物体产生Fba抗体,该抗体与Fba重组蛋白可产生特异性反应,提示Fba蛋白具有良好的免疫原性和抗原性。Fba蛋白可作为GAS的候选疫苗及检测GAS感染患者血清效价的重要工具。

关键词: 链球菌,, 酿脓, 纤连蛋白类, 基因表达, 免疫原性 疫苗,, 合成

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2010年12月16日

【期刊论文】丙型肝炎病毒重组蛋白抗原联合免疫的免疫原性和保护性研究

魏林, 曾瑞红, 李广学, 凌世淦, 张贺秋, 姚智燕, 杨建岭, 贺峰, 黄睿, 刘艳坤

中华微生物学和免疫学杂志,2009,29(7):642~645,-0001,():

摘要

目的 研究两个丙型肝炎病毒(HCV)多表位重组抗原联合免疫后诱导的细胞免疫和体液免疫应答,以及对小鼠的保护作用。方法 用两个多表位抗原HCV-T和HCV-E1联合免疫BALB/e小鼠3次,ELISA检测血清中抗体IgG、IgCl和IgG2a滴度;最后一次免疫后10d杀死一半小鼠,取脾细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性;ELISPOT法检测分泌IFN-y和IL-4的细胞;最后一次免疫后2周,在免疫小鼠的背部皮下注射106个SP2/0-NS3细胞,考察联合免疫对小鼠的保护作用;另取BALII/e小鼠,先在背部皮下注射106个SP2/0-NS3细胞,7d后开始联合免疫,免疫3次,考察免疫治疗作用。结果 用HCV-T+HCV-E1联合免疫诱导了高滴度的HCV-E1特异性的IgG、IgG1和IgG2a抗体以及高水平的CTL活性;与单独免疫相比,联合免疫产生的分泌IFN-y和IL-4的细胞数量有协同作用;而且联合免疫能有效预防和治疗SP2/0-NS3对小鼠的攻击。结论 HCV-T+I-ICV—E1联合免疫诱导了保护性的体液免疫和细胞免疫应答,有望进一步开发为一种有效的重组IICV疫苗。

关键词: 丙型肝炎病毒, 多表位抗原, 联合免疫, 免疫原性

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2009年11月08日

【期刊论文】仿生髓核组织工程细胞支架的免疫原性研究

周跃, 李长青

第三军医大学学报,2005,27(9):837~840,-0001,():

摘要

目的探讨自行设计构建髓核组织工程支架材料的免疫原性。方法将75只SD大鼠随机分为3组:正常组、对照组及移植组。将自行设计构建的支架材料植入移植组大鼠皮下,以未植入支架组作为对照。分别于术后1、3、7、14、28、56、84d取支架及周围织,并分离血清。行组织学观察及RT-PCR检测IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10 mRNA表达,ELISA检测血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平。结果支架材料在大鼠体内表现为轻度的炎性反应,逐步为纤维肉芽组织取代。RT-PCR未检测到IFN-γ、IL-2 mRNA表达,IL-4、IL-10 mRINA表达增高,反映支架材料移植后促进T辅助细胞向Th2方向转化,抑制机体炎症发生。同时血清中未检测到抗Ⅱ型胶原抗体表达增高。结论 自行设计的髓核组织工程支架材料无明显免疫原性,可进行深入研究。

关键词: 支架髓核, 组织工程, 免疫原性

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2009年11月03日

【期刊论文】空肠弯曲菌galE变异株免疫性及免疫保护性评价*

蔡方成, 束晓梅, 蔡方成**

中国人兽共患病杂志,2005,21(9):758~761,-0001,():

摘要

目的评价galE变异株免疫原性及免疫保护效力。方法分别采用galE变异株低茵量及高菌量单次或重复免疫(口服)BALB/c小鼠。ELISA方法检测动物肠液及血清中特异性sIgA及IgG的滴度。免疫后26d.用大剂量CJ攻击被免疫动物,观察galE变异株的保护效应。结果(1)低菌量及高菌量galE变异株单次或重复免疫后,动物肠液及血液中sIgA及IgG滴度均明显增高,与阴性对照组比较差异非常显著(P<0.01);未显示低剂量与高剂量之间、单次免疫与重复免疫之间抗体水平有明显差异(P>0.05);与亲代株免疫组比较,抗体水平也无明显不同(P>0.05)。(2)galE变异株免疫可明显降低动物受CJ攻击后的疾病指数(P<0.01),变异株的临床保护效率为79.5%~83.1%;清除CJ肠定植的能力明显高于阴性对照组(P<0.05);低菌量与高菌量之间,单次及重复免疫清除肠道感染效力无明显差异(P>0.05)。结论(1)galLE变异株保留与亲代株相似的免疫原性及免疫保护性,可刺激动物产生特异性抗体,有效保护细菌攻击,明显降低动物疾病指数,缩短细菌肠道定植时间。(2)galE变异株仅小剂量单次口服即可产生良好的免疫效果。

关键词: 空肠弯曲菌, 变异株, 活菌苗, 免疫原性 免疫保护

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2009年09月13日

【期刊论文】绿脓杆菌外膜蛋白对感染的保护作用

曹郁生, 廖立新, 曹郁生*李国辉, 陈燕*

中国生物制品学杂志,2003,16(6):330~332,-0001,():

摘要

目的 寻找一种防治绿脓杆菌感染的有效方法。方法 用绿脓杆菌外膜蛋白免疫的兔抗血清对4种不同血清型的菌株1和株临床绿脓杆菌进行体内外交叉保护性试验。结果 家兔免疫1周后即产生抗体,并逐渐升高,至第6周抗体滴度达到1:163 840,并维持高水平;抗血清能与4种不同血清型菌株和1株临床菌株产生直接凝集反应。第8周的血清(1:8以上)与其外膜蛋白的EIJSA抗体效价相近,小鼠的半保护剂量均在0.05~011ml之间。结论 外膜蛋白疫苗具有较强的抗原性,而且具有良好的交叉保护作用。

关键词: 绿脓杆菌 外膜蛋白 免疫原性

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2005年02月24日

【期刊论文】禽大肠杆菌血清型O2、O78融合双价弱毒菌株免疫原性的研究*

黄青云, 罗贤忠, 林泰松

华南农业大学学报,1998,19 (2):50~54,-0001,():

摘要

试验鸡在10d龄用禽大肠杆菌O2、O78融合双价弱毒菌苗免疫,免疫后14d对O2、O78强毒株攻击的保护率分别为73%和80%,免疫后42d的保护率分别为66.7%和73.3%,与对照组比较差异极显著(P <0.01)。采用ELISA检测免疫鸡血清抗O2、O78的IgM、IgG、IgA 等类抗体的消长情况,结果显示,血清中各类抗体的ELISA总滴度与保护效果呈正相关。其中,IgM在免疫后2周内起主要保护作用,IgG在2周后起主要保护作用,IgA在血清中出现迟缓。

关键词: 大肠杆菌, 弱毒菌苗, 酶联免疫吸附测定, 免疫原性

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2005年04月29日

【期刊论文】运送鹅源新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌及其免疫原性*

焦新安, 潘志明, **, 张小荣, 张晓明, 黄金林, 万洪全, 刘秀梵

农业生物技术学报,2004,12,(4):412~415,-0001,():

摘要

根据GenBank中发表的新城疫病毒融合(F)基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5F基因,约1700bp,测序确认后,将其克隆人真核表达载体Pvax1,得到候选DNA疫苗Pvax1-F。将pvax1-F转化减毒 伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)X4550,获得运送DNA疫苗的重组沙门氏菌X4550(Pvax1-F)。以2×108CFU/只的剂量两次CD1小鼠,免疫小鼠可以检测至特异性针对NDVF蛋的血清抗体应答,X4550(Pvax1-F)免疫组抗体水平显著高于X4550(Pvax1)组(P<0.05),表明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒,并能够剌激机体产生免疫应答。

关键词: 减毒沙门氏菌, DNA疫苗, 新城疫病毒, 免疫原性

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2009年05月31日

【期刊论文】重组质粒pYTA/Aβ-HBcAg的构建及其在大肠杆菌中的表达

胡海涛, 冯改丰, 董炜疆, 王全颖, 杨广笑

细胞与分子免疫学杂志,2004(6):671-674,-0001,():

摘要

目的:研究β-淀粉样肽(AB)与HBcAg的融合基AB--HBcAg的原核表达,并检测表达的融合蛋白AB-HBcAg的免疫原性。方法:从重组质粒7Z/A3-HBcAg中,切下含Aβ-HBcAg的基因片段,将其融合于质粒pYTA1的lac启动子之后,构建重组表达质粒pYTA/AB-HBcAg。以此重组质粒转化大肠杆菌DHSa,在IPTG诱导下表达。超声破碎表达的细菌,通过SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色,检测融合蛋白。MB-HBcAg的表达。采用EusA法检测融合蛋白的反应原性。融合蛋白经饱和硫酸铵盐析法分离和纯化后免疫BALB/c小鼠,用ELISA法检测血清中抗-AB抗体的滴度。结果:融合蛋白以可溶性形式存在于细菌裂解液的上清中,其表达量为菌体总蛋白量的7%。表达的融合蛋白既有AB的反应原性,又有与HB-cAg的反应原性。经3次免疫后,BALB/c小鼠血清中抗-AB抗体的滴度最高可为1:16000。结论:融合基因AB-HBcAg可在大肠杆菌DH5a中表达。表达产物为可溶性蛋白,存在于细菌裂解液的上清中,具有较强的免疫原性。本研究为正在进行的AD基因工程疫苗的动物实验打下了基础。

关键词: 阿尔茨海默病, β-淀粉样肽, HBcAg, 免疫原性 疫苗

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2009年05月31日

【期刊论文】融合基因Aβ-HBcAg的原核表达及表达蛋白的免疫反应性和免疫原性分析

胡海涛, 冯改丰, 董炜疆, 王全颖, 杨广笑

西安交通大学学报(医学版),2004,6(3):220-222,-0001,():

摘要

目的 研究β-淀粉样肽(β-amyloidpeptied,Aβ)与乙型肝炎核心抗原(HBcAg)融合基因Aβ-HBcAg的原核表达,检测融合蛋白的免疫反应性及免疫原性。方法 将重组质粒pBv220/Aβ-HBcAg转化大肠杆菌DH5d,温控表达,超声破碎细菌,通过SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色和EusA等方法,观察Aβ-HBcAg的表达及融合蛋白的免疫反应性;用融合蛋白免疫Balh/c小鼠,ELISA法检测血清中的抗-Aβ抗体和抗-HBc抗体滴度。结果 融合蛋白以包涵体的形式存在于沉淀中,表达量为菌体沉淀的5%,融合蛋白既有AB的免疫反应性,又有HBcAg的免疫反应性。Balb/c小鼠经过3次免疫后,血清中的抗体滴度很低,继续强化免疫2次后,血清中抗-Aβ抗体滴度、抗-HBc抗体滴度分别上升为l:800和l:3200。结论 融合基因Aβ-HBcAg可在大肠杆菌DH5a中表达,表达蛋白有一定的免疫反应性和免疫原性,但表达量较低,免疫反应性和免疫原性较弱。提示融合基因Aβ-HBcAg的表达量和融合蛋白免疫原性的提高尚需进一步研究。

关键词: 阿尔茨海默病, β-淀粉样肽, HBcAg, 免疫反应性, 免疫原性

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