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2009年11月08日

【期刊论文】反义技术及其在G蛋白研究中的应用

周元国, 余方圆)

生物化学与生物物理进展,1999,26(4):312~315,-0001,():

摘要

反义技术至少包括反义寡核苷酸技术、反义RNA技术和核酶技术。在G蛋白研究中,反义技术在G蛋白受体及受体亚型研究、G蛋白转导信号特异性研究方面及对G蛋耦联信号传导途径与其他信号传导途径之间“crocc talk”认识方面的研究中,有着广泛的应用。

关键词: 反义技术, 反义寡核苷酸, 反义RNA 核酶, G蛋白

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2009年11月08日

【期刊论文】反义cubilin RNA对白蛋白刺激肾小管上皮细胞分泌趋化因子的影响

何娅妮, 杨聚荣, 周萍, 刘大维, 张建国, 陈晶

中华肾脏病杂志,2004,20(4):250~254,-0001,():

摘要

目的观察反义cubilin RNA对白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞(HK-2)表达单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、RANTES的影响。方法应用基因克隆技术构建反义及正义cubilin真核表达载体(pcDNA-ACUB、pcDNA-CUB),酶切鉴定及序列测定证实插入序列是否正确。脂质体DOTAP将其转染至HK-2细胞,流式细胞仪(FCM)检测反义cubilin RNA对HK-2细胞重吸收白蛋白的抑制作用。细胞转染72h后给予高浓度白蛋白(10g/L)刺激24h,细胞ELISA、Western印迹法检测HK-2细胞表达MCP-1、RANTES的变化。结果pcDNA-ACUB转染组白蛋白摄取率较DOTAP组显著降低(P<0.01)。与DOTAP组比较,pcDNA-ACUB转染组HK-2细胞MCP-1、RANTES的表达显著降低(P<0.001)。结论反义cubilin RNA可抑制肾小管上皮细胞对白蛋白的摄取,并能拮抗白蛋白刺激肾小管上皮细胞趋化因子的表达,提示cubilin在白蛋白介导的肾小管上皮细胞分泌趋化因子中起重要作用。

关键词: 反义RNA 趋化因子, 白蛋白, cubilin, 肾小管上皮细胞

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2009年09月05日

【期刊论文】PAI-1反义RNA对人主动脉平滑肌细胞中血管内皮生长因子的影响

李晖, 富路, 梅宇

,-0001,():

摘要

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogenactivatorinhibitor-1,pai-1)反义RNA对离体培养的主动脉平滑肌细胞(smoothmusclecell,SMC)PAI-1表达的作用及对血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响。方法PCR扩增PAI-1第2外显子,将PCR产物纯化克隆后连入真核细胞表达载体pcDNA3。1,构建PAI-1反义RNA重组质粒。将pcDNA3。1-反义PAI-1重组质粒转染SMC中。通过免疫组化。Western印迹,ELISA检测细胞中PAI-1表达的改变;通过免疫荧光技术观察细胞中PAI-1表达量的变化对VEGF的影响。结果转染后第3天,细胞中PAI-1含量最低,VEGF也相应增加。第7天,PAI-1含量接近于正常,CEGF也增加至正常水平。结论反义PAI-1RNA能有效阻断SMC中PAI-1的蛋白合成,同时抑制细胞中VEGFDE的表达。

关键词: 纤溶酶原激活物抑制剂-1, 反义RNA 血管内皮生长因子, 平滑肌细胞

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2007年05月10日

【期刊论文】PA I-1反义RNA 对人主动脉平滑肌细胞中血管内皮生长因子的影响

富路, 梅宇, 李晖

,-0001,():

摘要

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1 (plasminogen activator inhibitor-1, PA I-1) 反义RNA对离体培养的主动脉平滑肌细胞(smooth muscle cell, SMC) PA I-1 表达的作用及对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, V EGF) 表达的影响。方法PCR 扩增PA I-1 第2 外显子, 将PCR 产物纯化克隆后连入真核细胞表达载体pcDNA 311, 构建PA I-1 反义RNA 重组质粒。将pcDNA 3.1-反义PA I-1 重组质粒转染SMC 中。通过免疫组化、Western 印迹、EL ISA 检测细胞中PA I-1 表达的改变; 通过免疫荧光技术观察细胞中PA I-1 表达量的变化对V EGF 的影响。结果转染后第3 天, 细胞中PA I-1 含量最低,V EGF 的表达也减少。第5 天, PA I-1 含量逐渐升高,V EGF 也相应增加。第7 天, PA I-1 含量接近于正常,V EGF 也增至正常水平。结论反义PA I-1 RNA 能有效阻断SMC 中PA I-1 的蛋白合成, 同时抑制细胞中V EGF 的表达。

关键词: 纤溶酶原激活物抑制剂-1, 反义RNA 血管内皮生长因子, 平滑肌细胞

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2007年05月10日

【期刊论文】反义纤溶酶原激活物抑制剂1 RNA 对家兔动脉粥样硬化形成的影响

富路, 李佳, 李晖, 梅雨, 尹申, 孔一慧

中国动脉硬化杂志2003年第11卷第3期/Chin J Arterioscler, Vol. 11, No. 3,-0001,():

摘要

为探讨纤溶酶原激活物抑制剂1 反义RNA 对家兔血浆纤溶活性及纤溶酶原激活物抑制剂1 的表达、血脂及对动脉粥样硬化斑块形成的影响,通过聚合酶链反应扩增纤溶酶原激活物抑制剂1 第二外显子,将聚合酶链反应产物纯化克隆后连入真核细胞表达载体pcDNA3. 1 ,构建纤溶酶原激活物抑制剂1 反义RNA 重组质粒。将pcDNA3. 1-反义纤溶酶原激活物抑制剂1 重组质粒注射到哈尔滨大白兔腹部皮下组织。通过发色底物法测定家兔血浆组织型纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制剂1 活性变化,通过免疫组织化学方法检测组织中纤溶酶原激活物抑制剂1 表达的改变。测定家兔血脂变化,病理检测其动脉粥样硬化程度。结果显示,应用反义纤溶酶原激活物抑制剂1 RNA 重组质粒的家兔血浆纤溶酶原激活物抑制剂1 活性降低,组织型纤溶酶原激活物活性升高, 纤溶酶原激活物抑制剂1 蛋白表达于内皮细胞,而在平滑肌细胞中未表达(动脉粥样硬化对照组中内皮细胞、平滑肌细胞和泡沫细胞内均有表达);应用反义纤溶酶原激活物抑制剂1 RNA 重组质粒的家兔胆固醇和甘油三酯明显低于动脉粥样硬化对照组(96±42 mg/L 比123±12 mgPL , 15±10 mgPL 比46±29 mg/L) ,且动脉粥样硬化程度亦轻于后者。以上提示,反义纤溶酶原激活物抑制剂1 RNA 重组质粒的皮下注射能有效阻断家兔体内纤溶酶原激活物抑制剂1 蛋白的合成,减轻动脉粥样硬化程度。

关键词: 分子生物学, 纤溶酶原激活物抑制剂1对动脉粥样硬化形成的影响, 聚合酶链反应, 反义RNA 组织型纤溶酶原激活物, 血脂, 动脉粥样硬化

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2007年05月10日

【期刊论文】纤溶酶原激活物抑制剂-1反义RNA对主动脉内皮细胞部分功能的影响

富路, 梅宇, 李晖

中华老年医学杂志2001年10月第20卷第5期/Chin J Geriatr, Oct., 2001, Vol. 20, No. 5,-0001,():

摘要

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1 (plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)反义RNA对离体培养的主动脉内皮细胞(endothelial cell,EC) PA-I表达的作用及对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。 方法 聚合酶链反应(PCR)扩增PAI-第2外显子,将PCR产物纯化克隆后连入真核细胞表达载体pcDNA3.1(一),构建PAI-反义RNA重组质粒。将pcDNA3.1-反义PAI-1重组质粒转染EC中。通过免疫组化、免疫印迹法(Westemblot)、双抗体夹心法(ELISA)检测细胞中PAI-1表达的改变,通过免疫荧光技术观察细胞中PAI-1表达量的变化对VEGF的影响。结果转染后第3天,细胞中PAI-l含量为0.017 ng/ml,细胞浆内代表VEGF的绿色荧光最弱,表明VEGF的表达也减少;第5天,PAI-含量为0.093 ng/ ml,细胞浆内绿色荧光物质略增加;第7天,PAI-1含量为0. 143 ng/ ml,接近正常值,VECF的荧光染色接近于正常水平。 结论反义PAI-l RNA能有效阻断EC中PAI-1的蛋白合成,同时抑制细胞中VEGF的表达。

关键词: 纤溶酶原激活物抑制剂, 反义RNA 内皮细胞生长因子

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