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2010年12月16日

【期刊论文】A族链球菌(GAS)Fba蛋白单克隆抗体对应表位核心氨基酸的确定①

魏林, 郭奕阳, 马翠卿, 魏澎, 王秀荣, 冯惠东, 阎婉依

中国免疫学杂志,2009,25(12):1059~1062,-0001,():

摘要

目的:对A族链球菌Fba蛋白McAb2所对应的表位进行定位。方法:以初步定位的表位区段为线索合成三段重叠多肽,dot-ELISA检测McAb2与合成肽的亲合力,并以McAb2为靶分子,利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,用竞争ELISA鉴定阳性克隆。结果:dot-ELISA检测结果表明Fba100-112肽段与McAb2的结合能力最强。经过3轮亲和筛选后,随机挑选20个噬菌体克隆,竞争ELISA对其与McAb2的亲和力做检测,其中12个克隆显示较强的阳性结果。阳性克隆DNA测序,与Fba基因第100位氨基酸至110位氨基酸中ITPDL同源性较高。结论:通过dot-ELISA将A族链球菌Fba蛋白McAb2对应的表位定位于100~112位氨基酸,结果同噬菌体随机肽库筛选的核心氨基酸位置吻合。为进一步研制表位肽疫苗、研究Fba蛋白及其单克隆抗体的生物学功能奠定了基础。

关键词: A族链球菌, Fba蛋白, 单克隆抗体, 表位, 噬菌体肽库

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2005年04月29日

【期刊论文】应用噬菌体肽库技术定位沙门氏菌鞭毛蛋白上属特异性共同抗原表位

焦新安, 刘文博, 高崧, 张扬, 潘志明, 王芳, 张如宽, 刘秀梵

畜牧兽医学报,2003, 34 (2), 183-187 ,-0001,():

摘要

用生物素标记的沙门氏菌属特异性单克隆抗体de7作为分子探针,应用亲和筛选法从噬菌体肽库中筛选该单抗所针对的表位克隆,最终进行定位。经三轮筛选后,用斑点印迹法检测,得到良好的富集效果。通过免疫筛选法从第三轮筛选物中挑取了24个阳性克隆,再以斑点印迹、竞净ELISA进一步鉴定阳性克隆,证实已获得了沙门氏菌鞭毛属特异性共同抗原的模拟表位。测得的序列为SRRSFTTTE,将其与沙门氏菌共毛蛋白氨基酸序列相比较,同源性较小,但在不同血清型沙门氏菌鞭毛蛋白氨基酸序列的I区高度保守序列为RAXXT,且这种序列排列的几率为1/205,因此推断该单抗所针对的表位在该区段上。此外,以阳性克隆免疫Balb/c小鼠,并制备高免血清进行间接荧光检测和竞争ELISA鉴定,结果表明其具有优良的免疫原性和高度的特异性,这亦为模拟表位疫苗的研究提供了新思路。

关键词: 沙门氏菌, 鞭毛蛋白, 属共同抗原表位, 模拟表位, 噬菌体肽库 表位定位

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