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2011年06月07日

【期刊论文】前阳离子脂质体的构建及有关性质研究

何勤, 钟志容, 邓勇, 刘戟, 张志荣, 宋庆国, 何勤*

中国药学杂志:2007,42(9)672~675,-0001,():

摘要

目的制备前阳离子脂质体并考察其相关性质。方法化学合成含二硫键的胆固醇衍生物(2.[[4-[(羟甲基)二硫]-1-亚氨丁基]氨基]乙基]氨基甲酸胆固醇酯,CHETA);薄膜分散-膜挤压法制备空白前阳离子脂质体;以鱼精蛋白缩合质粒DNA再与空白前阳离子脂质体作用,形成载基因前阳离子脂质体;粒度电位测定仪测定前阳离子脂质体的粒径和Zeta电位,电镜观察形态;考察在二硫键还原酶二硫苏糖醇的作用下前阳离子脂质体Zeta电位变化情况;以LacZ为报告基因转染HepG2细胞,X-gat原位染色定性观察,并定量测定β-半乳糖苷酶活性和总蛋白含量计算转染效率。结果前阳离子脂质体形态近似于球体,平均粒径为145.8nm(PDI=0.086),Zeta电位为-33.83mV,载基因前阳离子脂质体转染肝癌细胞HepG2转染效率为12.18mU•mg-1protein,是裸质粒的10.5倍。结论二硫键修饰的前阳离子脂质体是具有发展潜力的非病毒载体。

关键词: 基因治疗 二硫键, 前阳离子脂质体, 转染效率

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2009年11月03日

【期刊论文】RNA干扰介导对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

黄爱龙, 唐霓①, 张秉强①, 闰歌①, 蒲丹①, 高小玲①, Tong-Chuan He②, 黄爱龙①*

科学通报,2004,49(12):1145~1150,-0001,():

摘要

构建针对乙型肝炎病毒(HBV)核心区或表面抗原编码区的siRNA表达载体pSI-C和pSI-S,在体外HBV复制细胞模型中观察对HBV复制和表达的影响。将pSI-C,pSI-S与1.3倍HBV真核表达质粒pHBV共转染HepG2细胞,分别在转染后24,48和72 h,观察pSI-C和pSI-S对细胞上清和胞内病毒抗原表达的影响,并用分子杂交方法从病毒复制、转录和翻译水平检测目的基因的表达情况,实验结果表明,pSI-C及pSI-S能明显抑制细胞内HBsAg和HBcAg的合成,呈序列特异性和剂量依赖性的特点,而对照组siRNA无抑制作用。pSI-C比pSI-S抑制作用更强,转染后第2天对HBsAg和HBeAg押制率达高峰,分别为92%和85%。Southern和Northern杂交结果表明,HBV siRNA能降低目的基因转录和病毒复制中间体的表达水平,提示针对乙型肝炎病毒核心区和表面抗原编码区的siRNA能有效抑制HBVRNA分子转录和病毒复制,最终降低病毒抗原表达,这为运用RNAi技术进行HBV基因治疗提供了新的思路。

关键词: 抗病毒治疗 乙型肝炎病毒 RNA干扰 病毒复制 基因治疗

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2009年08月30日

【期刊论文】腺病毒介导的P53基因抗人胃腺癌增殖的研究

凌虹, 尹新华, 郭彩玲, 王宇

中国公共卫生,2003,19(3):257~259,-0001,():

摘要

目的 研究腺病毒介导的野生型P53基因(Ad-P53)抗人胃腺癌细胞增殖的效果。方法 利用携带P53基因的复制缺陷型腺病毒(Ad-P53)感染人胃腺癌细胞株SGC-7901,以携带报告基因LacZ的同型载体(Ad-LacZ)作对照,MTT法测定及克隆形成实验分析P53基因对胃腺癌细胞的体外抑瘤效应。用流式细胞技术分析P53基因转染后对细胞周期的影响以及引起凋亡情况,并用电镜观察细胞的超微结构变化。结果 野生型P53基因转移对SGC-7901具有明显的抗增殖作用。Ad-P53感染SGC-7901后细胞生长明显被抑制,抑制率达88.73%(MOI为200,7d)。克隆形成能力也明显受到抑制,当MOI分别为50,100,200时,克隆形成数为22,0,0。流式细胞计数分析显示.Ad-P53(能引起SGC-7901细胞发生周期阻滞和细胞凋亡,凋亡百分率达71.4%(MOI为200,7d)。电镜观察结果也显示细胞出现凋亡的特征性形态改变。结论 腺病毒成功介导野生型P53基因转移入人胃腺癌SGC-7901细胞中,野生型P53基因有显著抑制胃腺癌细胞增殖的作用。其表达可以诱导肿瘤细胞的凋亡及细胞周期阻滞。

关键词: 胃腺癌, P53基因, 腺病毒, 基因治疗

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2009年08月17日

【期刊论文】肌肉注射可调控胰岛素基因对糖尿病小鼠降糖作用*

吕申, 李鸿, 苏本利**, 刘海霞, 张雪扬吕申, 刘敏, 纪晓鹏, F.BOSCH

生物化学与生物物理进展,2004,31(3):278~282,-0001,():

摘要

为研究四环素调控的胰岛素表达载体肌肉直接注射后对实验性糖尿病小鼠的降糖作用,构建了质粒prTA-tet42rhINS。以链脲佐菌素(STZ)诱导Balb/C小鼠成糖尿病模型,300μg质粒注射至小鼠的股部肌肉,并同时在饮水中加入不同浓度强力霉素(Dox),监测小鼠末梢血糖、体重,测定血清人胰岛素、C肽水平。用RT2PCR检测小鼠肌肉注射部位组织中人胰岛素原mRNA水平的表达情况。结果表明:质粒prTA2tet42rhINS注射后,给予Dox可显著降低糖尿病小鼠的血糖,血清人胰岛素、C肽水平相应升高,体重增加。效果持续大约二周。小鼠肌肉组织中有人胰岛素原mRNA表达。降糖效果和基因表达程度随Dox浓度增加而增强。质粒prTA2tet42rhINS对STZ诱导的糖尿病小鼠高血糖起到明显的降低作用。在糖尿病小鼠肌肉组织能很好地表达,并受Dox调控。

关键词: 糖尿病, 基因调控, 基因治疗

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2009年08月07日

【期刊论文】人 IL-2重组腺病毒转染人肺腺癌细胞的体外生物学特性及体内抗肿瘤研究①

李殿俊, 田长富, 李殿俊②, 刘旭, 李天天, 刘辉

,-0001,():

摘要

目的:研究感染hIL-2重组病毒的人肺腺癌细胞(Anip973)的体外生物学特性及小鼠体内抗肿瘤作用。方法:将携带有hIL-2基因的重组腺病毒(rAd-hIL-2)感染人肺腺癌细胞系,通过细胞生长实验、克隆形成实验等观察其对Anip973肿瘤细胞的作用;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL-2的分泌量;通过肿瘤局部注射rAd-hIL-2的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果:rAd-hL2经扩增、纯化后,滴度可达10l0PFU/ml,当病毒量为30MOI时,对Anip973细胞的转染率达90%以上。转染的Anip973肿瘤细胞其生长能力、克隆形成率等无明显变化。24小时细胞培养上清IL-2的分泌量为20pg/lml/2×105细胞。体内实验表明注射rAd-hIL-2的小鼠肿瘤生长缓慢,体积明显小于对照组(P<0.05),生存期显著延长。结论:腺病毒介导的细胞因子基因hIL-2转染的Anip973肿瘤细胞体外生物学特性未见明显变化,而体内实验则有明显的抗肿瘤作用。

关键词: 重组腺病毒, 肿瘤, 基因治疗 细胞因子

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2009年08月07日

【期刊论文】hTNF-a重组腺病毒转染人肺腺癌细胞的体外生物学特性及体内抗肿瘤研究

李殿俊, 田长富, 申宝忠, 刘旭, 李天天

中国肿瘤生物治疗杂志,2002,9(2):113~116,-0001,():

摘要

目的:研究携带hTNF-a基因的第二代重组腺病毒对人肺腺癌细胞系Ani973的体外生物学特性的影响,探讨重组腺病毒在体内抗肿瘤作用。方法:将携带有hTNF-a基因的重组腺病毒(rAd-hTNF-a)感染人肺腺癌细胞系,通过细胞生长实验、克隆形成实验、流式细胞分析、形态学检查等观察其对Anip973肿瘤细胞的作用;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞TNF-a的分泌量;通过肿瘤局部往射rAd-LacZ,rAd-hTNF-a的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果:rAd-hTNrF-a经扩增、纯化后,滴度可这1010PFC/ml,在30MOl时,对Anip973细胞的转染率达90%以上。转染的Anip973肿瘤细胞除表面结构和超微结构有轻微变化外,其生长能力、克隆形成率及细胞周期等无明显变化。24h细胞培养上清TNF-a的分泌量为20pg/ml细胞。体内实验表明注射rAd-LacZ,rAd-hTNF-a的小鼠肿瘤生长缓慢,体积明显小于对照组(P<0.05),生存期显著延长。结论:腺病毒介导的细胞因子基因hTNF-a转染的Anip973肿瘤细胞未见明显变化,而体内实验则有明显的抗肿瘤作用。

关键词: 重组腺病毒, 肿瘤, 基因治疗 细胞因子

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2009年08月07日

【期刊论文】转基因人胃腺癌细胞(MKN45/IL-2)的体外生物学特性及体内抗肿瘤作用研究

李殿俊, 李莹, 王志华, 张春艳, 马占好, 扬悦

2004,18(1):22~24,-0001,():

摘要

目的 研究转hIL-2基因的人胃腺癌细胞(MKN45/IL-2)的体外生物学特性及小鼠体内抗肿瘤作用。方法 以逆转录病毒PLXSN为载体,人白细胞介索2基因(hIL-2)为目的基因转染人胃腺癌细胞系,利用PCR按术对转染后的胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL-2的分泌量;利用MFT法绘制生长曲线;然后建立人胃腺癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,以肿瘤体积、抑瘤率、生存期等指标观察MKN45/IL-2对移植癌的抑制作用。结果 转染后的MKIV45肿瘤细胞体外生长能力无明显变化。24小时细胞培养上清IL-2的分泌量为l00-20Ou/lO5细胞,体内实验表明MKN45/IL-2治疗组的移植瘤生长速度缓慢,体积明显小于生理盐水对照组(P<0.05),生存期显著延长(P<0-05)。结论 逆转录病毒介导的hIL-2转染的MKN45肿瘤细胞体外生物学特性未见明显变化,而体内实验显示具有明显的抗肿瘤作用。

关键词: 基因治疗 胃腺癌, IL-2

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2009年05月11日

【期刊论文】脊柱融合的基因治疗

宋跃明, 肖睿

生物医学工程学杂志,2002,19(4):703~707,-0001,():

摘要

稳定的脊柱融合与相邻椎骨的融合有关,经典的脊柱融合手术采用剥离椎骨、自体髂骨植骨融合术。虽然应用自体髂骨植骨被认为是植骨融合的金标准,但是它常伴有并发症出现。基因治疗被认为是促进脊柱关节固定融合的新途径,研究表明在动物模型中应用腺病毒、脂质体搭载人骨形成蛋白(hBMP)基因族能促进脊柱融合。有关在动物模型中通过基因转染促进脊柱融合的研究,本文对此作简要介绍。弄清楚骨形成中基因的表达和开发出新的基因转染载体是目前研究的重点,相信在不远的将来,基因治疗脊柱融合能在临床中得到应用。

关键词: 基因治疗 脊柱 融合

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2009年05月11日

【期刊论文】nm23-h1基因导入对腺样囊性癌分化的影响*

温玉明, 李文, 王昌美, 李龙江, 杨湛, 陈亚多

临床口腔医学杂志,2001,8(3):163-164,-0001,():

摘要

目的 探讨nm23-h1基因对腺样囊性癌细胞分化的影响。方法 体外用阳离子脂质体介导nm23-h1质粒转染人口腔涎腺腺样囊性癌(ACC)细胞株,筛选出转染阳性细胞克隆,并植入4只裸鼠颌面部,3w后获取标本,石蜡包埋后进行常规组织学及免疫组织化学检查,实验以未转染的阴性细胞克隆植入4只裸鼠作对照。结果 nm23-h1阳性ACC植入裸鼠体内后肿瘤细胞有向原代细胞回归的倾向,即由实体型向筛状型或管状型转变,肿瘤细胞周围的肿瘤间质增多,巢状的肿瘤细胞外围有基底膜样结构形成;肿瘤细胞在体内增殖的过程中,表达nm23-h1的细胞数量有逐渐减少、表达强度减弱的趋势。结论 以nm23-h1为靶基因的基因治疗因同时具有抑制转移和促进分化的作用,具有较大的研究价值和临床应用前景。

关键词: 转移, 基因治疗 腺样囊性癌(, ACC), 分化

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2009年04月23日

【期刊论文】用重组表达体系pCKM-mPTH质粒治疗甲状旁腺功能低下症的实验研究

王深明, 朱易凡, 王劲松

中华医学杂志,2004,12(24):2107~2109,-0001,():

摘要

目的 研究重组pCKM-mPTH质粒在SD大鼠甲状旁腺功能低下症模型中的治疗作用。方法 将30只SD大鼠随机分为3组,A组为正常组,肌肉注射生理盐水,B组、C组制作甲状旁腺功能低下症模型后,分别肌肉注射pcDNA3.1(+)空质粒和pCKM-mPTH质粒。用放免法测定不同时间的血清甲状旁腺激素(PTH)浓度。结果 动物模型在注射pCKM-mPTH质粒后,其血清PTH浓度在近1个月内显著高于注射前及空质粒对照组,未观察到有甲状旁腺功能低下症的表现。结论 应用pCKM-mPTH质粒治疗SD大鼠的甲状旁腺功能低下症是有效的,对未来的临床应用研究有一定的指导意义。

关键词: 甲状旁腺功能减退症, DNA,, 重组, 基因治疗

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2009年04月20日

【期刊论文】人间质胶原酶基因高效表达对体外肝纤维化的影响

汪谦, 彭慧, 梁力, 黄洁夫

中华实验外科杂志,2003,8(8):747~748,-0001,():

摘要

目的 观察人间质胶原酶(MMPl)基因高效表达对体外肝纤维化的影响。方法 利用DNA重组技术构建了pcDNA3-MMPl真核表达重组质粒。经脂质体包裹后,转染张氏传代人肝细胞,Westem blot检测MMPl蛋白表达量。在体外乙醇诱导纤维化培养条件下,抗生蛋白链菌素一生物索复合物标志(ISAB)免疫组织化学法检测肝细胞周围Ⅰ、Ⅲ型胶原生成状况,图象分析仪半定量分析胶原纤维的相对含量(RCC)。结果 成功构建真核表达质粒pcDNA3-MMPl,检测Rcc显示未转染组为132.6±5.7,转染组为118.8±4.8;统计学分析表明未转染组明显高于转染组(P<O.01)。结论 本研究证明重组质粒pcDNA3-MMPl能在体外致纤维化培养条件下拮抗肝细胞间质过多胶原产生。

关键词: 肝纤维化, 胶原酶, 基因治疗

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2009年03月30日

【期刊论文】含人纤溶酶原K5基因的腺病毒载体制备和功能研究

宋后燕, 杨健, 王跃祥, 官孝群, 马春姑, 王龙生

生物工程学报,2003,3(2):217-222,-0001,():

摘要

应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA基因,与真核表达载体pcDNA3重组,形成重组质粒pcDNA3K5,与穿梭质粒pShuttle重组得pShuttleK5,经与腺病毒DNA重组,PCR鉴定正确,即为pAd-K5。脂质体法将其转染293细胞后,制备细胞裂解液;噬斑分析法测定病毒滴度为5×10.8pfu/mL。将病毒以不同的感染系数(MOI)感染人脐静脉内皮细胞株ECV304和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法检测两者的增殖情况:ECV304细胞增殖受抑制,而MDA-MB-231细胞增殖未受明显影响。将感染病毒的ECV304细胞接种于ECMartixTM胶,显示内皮细胞分化和毛细血管管腔形成受抑制。表明所构建的含人纤溶酶原K5基因的重组复制缺陷型腺病毒具有抑制ECV304细胞增殖、分化和管腔形成的作用而对MDA-MB-231细胞的生长则无影响。

关键词: 新生血管生成抑制因子K5, 腺病毒, 基因治疗

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2007年05月13日

【期刊论文】转铁蛋白-转铁蛋白受体系统在药物运输和定向给药中的应用

常彦忠, 袁其朋, 钱忠明

科学通报2003年2月第48卷第3期,-0001,():

摘要

近年来,药物的定向运输和定点给药系统的研究已取得了可喜的进展。转铁蛋白-转铁蛋白受体系统在抗癌药物和蛋白质的定向运输以及作为基因载体在扩散的恶性肿瘤细胞基因治疗中的应用研究已接近临床使用阶段。药物经转铁蛋白-转铁蛋白受体介导通过血脑屏障进入脑内发挥药效的给药途径的研究也给脑疾病的治疗带来了巨大希望。

关键词: 转铁蛋白, 转铁蛋白受体, 药物定向运输, 基因治疗

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2007年05月29日

【期刊论文】脂质荷大体介导IFN-γ基因治疗肠癌小鼠的实验研究

吴文溪, 丁强, 沈历宗, 范萍, 许德华, 刘新垣

中华普通外科杂志2004年8月第19卷第8期/Chin J Gen Surg, August 2004, Vol. 19, No. 8,-0001,():

摘要

目的:探讨利用γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)基因对大肠癌的治疗作用及其作用机制。方法:构建携带IFN-γ基因的真核表达质粒pcDNA3-IFN-γ,以脂质体作载体,对荷大肠癌小鼠行瘤体内注射IFN-γ基因,检测经基因治疗后小鼠体内IFN-γ基因的表达、脾脏的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphoctye,CTL)活性、肿瘤的大小、肿瘤局部的淋巴细胞浸润情况及荷瘤小鼠的生存期。结果经IFN-y基因治疗后,治疗组小鼠血清中IFN-γ表达量和脾脏的CTL活性明显增强(P<0.01),肿瘤局部淋巴细胞浸润明显,肿瘤生长受到抑制,荷瘤小鼠的存活期明显延长。结论:利用IFN-γ基因治疗大肠癌具有明显的疗效。

关键词: 结肠肿瘤, 干扰素Ⅱ型, 基因治疗 脂质体

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2007年05月29日

【期刊论文】IFN-γ转基因治疗与重组IFN-γ注射对肝转移癌小鼠的治疗作用

吴文溪, 严鹏霄, 丁强, 沈历中, 范萍

中国肿瘤生物治疗杂志2004 Jun; 11(2),-0001,():

摘要

暂无

关键词: IFN-γ, 质粒, 基因治疗 结肠癌, 肝转移

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2006年05月26日

【期刊论文】血管内皮生长因子促进预构皮瓣成活的实验研究

李青峰, LI Qingfeng, PlNG Plng, ZHANG Disheng

中华整形外科杂志,2002,18(2):69~72,-0001,():

摘要

目的 研究使用重组人类血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)对预构成皮瓣存活的作用,探讨VEGF能否促进正常血供组织的血管化。方法 取大鼠自体尾动脉8cm移植,两端分别与股动、静脉吻合、成环状植人下腹部皮下组织,对照组局部应用0.9%NaCI和16%聚乙烯乙醇,实验组将VEGF分别溶于0。9%NaCI和16%聚乙烯乙醇局部应用。分别于术后3、4、5周以植人的尾动脉为血管蒂于下腹部形成3cm×4cm大小皮瓣。游离掀起皮瓣后缝回原处,7d后运用面积仪测出存活皮瓣面积的百分比。结果 第5周后的皮瓣存活率VEGF组(75.00%,58.41%)明显优于实验组(10%,25%)。结论:VEGF有利于预构皮瓣的存活。

关键词: 血管内皮生长因子, 聚乙烯乙醇, 基因治疗

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2006年07月11日

【期刊论文】原位CD基因转导配合全身应用52FC对于前列腺癌原位移植瘤模型肿瘤和转移的抑制作用

殷莲华, 张正望, 张永康, 赵凤娣

Chinese Medical Journal 2002; 115 (2): 227-231,-0001,():

摘要

目的:探讨原位CD基因转导配合全身应用5-FC对于前列腺癌原位移植瘤模型肿瘤和转移的抑制作用。方法:通过向C57BL/6小鼠的前列腺包膜下原位接种前列腺癌RM21细胞建立前列腺癌原位移植瘤模型。两天后进行原位CD基因注射,腹腔注射300mg/kg/天的5-FC溶液共14天。结果:与应用Adβ-gal/52FC,52FC和PBS的三组比较,接受原位CD基因转导配合全身应用52FC治疗的荷瘤鼠存活时间明显延长,局部肿瘤的生长受到明显抑制。更重要的是,病理学观察发现原位模型中的PBS、52FC和Adβ-gal三组小鼠全部发生肿瘤转移,包括髂淋巴结的转移(10/10,10/10,10/10)和肺转移(8/10,7/10,7/10),而AdCD/52FC治疗组中肿瘤转移的发生机率仅为2/10,且均为髂淋巴结的转移,而各主要脏器及腹主动脉旁淋巴结均无转移发生,结果提示这一治疗方法具有很强的抗肿瘤转移作用。结论:原位CD基因转导配合全身应用5-FC对于前列腺癌原位移植瘤模型的肿瘤和转移具有抑制作用。未来对于各种复发性或转移性的前列腺癌通过局部注射法作基因转导可能是一种新型的治疗方法。

关键词: 胞嘧啶脱胺酶, 氟胞嘧啶, 基因治疗 前列腺肿瘤, 动物

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2006年07月11日

【期刊论文】腺病毒载体介导胞嘧啶脱氨酶基因转染的前列腺癌细胞株对52氟胞嘧啶作用敏感性的研究

殷莲华, 王新红, 付四清, T. Nanakorn, Jongho Won, A. Deisseroth

Chinese Medical Journal 2001; 114 (9): 972-975,-0001,():

摘要

目的:研究胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶系统对前列腺癌细胞株的作用。方法:细胞培养,细胞转染,药物敏感性实验,观察旁观者效应,动物实验。结果:腺病毒载体可以转染所有已建立的前列腺癌细胞株,但是每种细胞株转染所要求的载体浓度以及暴露时间不同。转染的胞嘧啶脱氨酶基因在细胞内的表达高峰出现在不同的时间,但一直持续到11天以后。腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶基因转染可以使前列腺癌细胞株提高对5-氟胞嘧啶的敏感性。在LNCap和RM-1细胞株中,只有5%的细胞转染了胞嘧啶脱氨酶基因就可以引起100%的细胞杀伤效应。在动物实验中,用400MOI转染过的肿瘤细胞建立小鼠皮下肿瘤并同时腹腔注射5-氟胞嘧啶,可以有效的抑制肿瘤生长。结论:腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶基因转染可以提高前列腺癌细胞株对5-氟胞嘧啶的敏感性,胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶的联合应用能显著抑制小鼠肿瘤生长。

关键词: 胞嘧啶脱氨酶, 5-氟胞嘧啶, 基因治疗 前列腺癌

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2006年08月16日

【期刊论文】反义端粒酶催化亚单位抑制喉癌细胞生长的离体实验研究*

陶泽璋, 陈始明, 肖伯奎, 刘剑锋, 侯炜, 杨占秋

J Clin Otorhinolaryngol (China), Apr 2003, Vol 17, No4,-0001,():

摘要

目的:探讨人端粒酶催化亚单位(hTERT)反义寡核苷酸对人喉癌细胞株Hep-2的生长抑制作用。方法:用脂质体包裹hTERT反义寡核苷酸转染体外培养的Hep-2细胞,分别于转染后24、48、72h用MTT法检测细胞增殖活性、转染后72 h行HE染色及端粒酶活性测定。结果:转染后细胞增殖活性降低;细胞生长密度下降;端粒酶活性受到抑制。结论:hTERT反义寡核苷酸短期内可以降低端粒酶活性、抑制喉癌细胞的生长。

关键词: 端粒酶催化亚单位, 反义寡核苷酸, 喉肿瘤, 基因治疗

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2006年08月16日

【期刊论文】RNA干扰hTERT基因治疗喉鳞状细胞癌的实验研究*

陶泽璋, 刘丹, 陈始明, 肖伯奎

中国肿瘤临床,2005,32(20):1182-1186,-0001,():

摘要

目的:探讨RNA干扰hTERT(人端粒酶逆转录酶)基因对人喉鳞状细胞癌的治疗作用。方法:根据hTERT cDNA序列构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1、pshRNA2。将shRNA质粒分别转染人喉癌Hep-2细胞株及荷瘤裸鼠瘤体内。以激光共聚焦显微镜观察质粒在Hep-2细胞及瘤体内的表达;以MTT法观察质粒对Hep-2细胞增殖的抑制作用;以蛋白印迹法(Western blot法)检测Hep-2细胞中hTERT蛋白的表达;以免疫组化SP 法检测裸鼠瘤体内hTERT蛋白的表达。结果:pshRNA1、pshRNA2转染Hep-2细胞及pshRNA1转染瘤体后,共聚焦显微镜下见大量的癌细胞表达绿色荧光,hTERT蛋白表达明显下降。细胞受pshRNA1、pshRNA2转染后, 其生长活性受到明显抑制。体内抑瘤实验表明,与空质粒载体组(pshRNA4)和生理盐水组相比,pshRNA1 组移植瘤生长明显受到抑制。结论:表达shRNA的、hTERT基因特异的真核表达质粒能有效转染体内、外喉鳞癌细胞,并可有效抑制人喉鳞癌细胞的生长,为今后应用RNA干扰基因治疗喉癌提供重要的实验参考。

关键词: hTERT RNAi, 头颈部肿瘤, 癌, 鳞状细胞, 基因治疗

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