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2010年12月16日

【期刊论文】重组B因子小干扰RNA对激光诱导大鼠脉络膜新生血管的抑制作用

马景学, 全欢, 尚庆丽, 高建, 郑海洲, 魏素琴, 杨爱琴

,-0001,():

摘要

目的 探讨重组B因子(CFB)小干扰RNA(SIRNA)抑制激光诱导的大鼠脉络膜新生血管(CNV)的效果。方法 采用基因重组的方法获得重组CF&siRNA,取棕色挪威(BN)大鼠42只84只眼,用激光光凝方式建立CNV模型,随机分为尾静脉注射组、玻璃体腔注射组.视网膜下腔注射组、对照组。3种不同的注射方式组分别设有相应的空质粒注射组。除对照组外,其余各组于激光光凝后第1、3、5夭分别进行注射CFBsiRNA,尾静脉、玻璃体腔、视网膜下腔注射组的注射剂量分别为50、20、10 pg;对照组激光光凝后不给于任何干预。激光光凝前和光凝后14d分别行荧光素眼底血管造影(FFA)。根据荧光渗漏程度对各激光光斑评分来检测CNV的牛成情况;免疫组织化学法检测各组大鼠脉络膜内血管内皮生长因子(VEGF)、第Ⅷ因子的表达情况。结果 各组激光光斑荧光渗漏程度评分结果显示,CF隆siRNA尾静脉注射组与对照组相比荧光渗漏程度明显减轻(F-15.1620,P<0.05)。免疫组织化学结果显示,cF&siRNA尾静脉注射组VEGF、第Ⅷ因子的阳性表达强度在激光光凝后不同时间点之间差异无统计学意义(F-20.35,18.33;P>0.05),而与同时间点其他各组相比,明显降低(F-77.96,55.68;P<0.05)。其他各组VEGF、第Ⅷ因子的阳性表达强度在激光光凝后14 d均显著强于激光光凝后7 d(F=60.89, 61.12;P<0.05)。结论 通过下调VEGF及第Ⅷ凶子的表达水平,重组CF&siRNA能有效的抑制CNV的生成。

关键词: 脉络膜新生血管化/治疗; 基因疗法; RNA, 小分子干扰; 疾病模型, 动物

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2009年11月03日

【期刊论文】应用RNA干扰治疗小鼠急性乙型肝炎病毒感染

黄爱龙, 吴莹, 唐霓, 张秉强, 卢年芳

中华医学杂志,2005,85(9):630~634,-0001,():

摘要

目的建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染的动物模型,在此基础上观察小干扰RNA(siRNA)对HBV复制和表达的影响。方法通过尾静脉注射1.3倍的HBV真核表达质粒pHBVl.3建立小鼠急性乙型肝炎感染模型,再将其与针对乙型肝炎病毒核心区的siRNA表达载体(pSI-C)共注射,于注射后第6天取血测血清HBsAg(ELISA),做肝组织HBcAg免疫组化,通过RT-PCR检测肝组织HBV C区mRNA转录子的水平。同时设立PBS对照组、无关干扰组与突变干扰组。结果转染后第6天血清HBSAg在pHBVl.3感染组中高表达(A值为4.08~9.04,平均值为5.07±1.07,A值≥2.1为阳性),肝内HBcAg阳性率为5%~10%:pSI-C干扰组HBSAg,HBcAg的表达均受到抑制,血清HBsAg阴性,A值为0.04~1.5,平均值为0.62±0.59,与感染组相比有显著性差异(P<0.01),肝内HBcAg几乎无表达,RT-PCR示肝内HBV C mRNA水平明显降低。而无关干扰pGFP及突变的干扰序列pSI-C mut则无此作用。结论RNAi技术能特异,高效地抑制小鼠体内HBV的复制和表达,提示siRNA作为一种新型抗病毒药物的巨大潜能,而通过水动力法建立的小鼠急性乙型肝炎病毒感染的动物模型,一定程度上解决了长期以来缺乏合适的HBV感染动物模型的问题,为今后进行药物筛选及抗病毒治疗的研究拓展了新的思路。

关键词: 肝炎病毒,, 乙型, 模型,, 动物, 基因疗法 RNA干扰

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2009年11月03日

【期刊论文】肿瘤特异性Survivin启动子与甲胎蛋白启动子的活性评价与比较

黄爱龙, 况舸, 唐霓

中华肝脏病杂志,2005,13(6):440~442,-0001,():

摘要

目的研究并比较肿瘤特异性Survivin和甲胎蛋白(AFP)基因启动子在不同肝细胞癌细胞系中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法采用聚合酶链反应法扩增获得Survivin和AFP基因的启动子片段,并克隆入表达虫荧光素酶基因的报告质粒中,通过测定荧光素酶报告基因的表达情况,测定Survivin与AFP基因启动子的转录活性,同时采用巨细胞病毒启动子为对照,评价其转录活性水平。结果Survivin启动子在肝癌细胞中具有相当强的活性,其活性水平在高表达AFP的肝癌细胞中为AFP启动子的54~100倍,达到巨细胞病毒启动子活性的16%~21%。结论Survivin启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性,可望开发成为新的肝癌靶向性基因治疗工具。

关键词: 癌,, 肝细胞, 启动区(, 遗传学), 基因疗法 Survivin基因

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2009年04月27日

【期刊论文】胸苷激酶基因系统联合大蒜素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

丘少鹏, 毛晓鹏, 曹开源, 陈贤景, 袁广卿, 徐霖, 黄小荣

中华外科杂志,2005,43(6):382~386,-0001,():

摘要

目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/更昔洛韦(GCV)系统联合大蒜素对膀胱癌细胞的协同杀伤效应及对细胞凋亡的影响。方法 通过脂质体将胸苷激酶(TK)基因转入膀胱癌BIU87细胞构建BIU87TK细胞,观察GCV(1mg/L)、大蒜素(5mg/L)及GCV+大蒜素(浓度同前)共同作用对BIU87TK细胞形态学、细胞凋亡率及细胞周期变化的影响,检测bcl-2、bax、半胱天冬蛋白酶(caspase-3)表达变化及caspase-3活性变化。结果 药物作用72h,GCV+大蒜素对BIU87TK细胞的抑制率为72.50%,高于GCV作用后的35.00%和大蒜素作用后的37.00%,二者可发挥协同抑瘤作用;(F=6.46,P<0.05)GCV+大蒜素联合作用前期凋亡率高于单独作用细胞,细胞周期阻滞在S和C2期,与单独作用比较阻滞时效提前;二者可抑制bcl-2表达并可促进caspase-3表达及活化。结论 HSV-TK/GCV系统联合大蒜素可通过共同诱导凋亡发挥协同作用,抑制膀胱癌细胞生长。细胞周期阻滞,相关凋亡基因表达及活性的变化可能发挥了重要的作用。

关键词: 膀胱肿瘤, 基因疗法 大蒜辣素, 脱噬作用

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2009年03月18日

【期刊论文】高生物安全性人内皮抑素载体抑瘤作用的研究

马春红, 张艳, 孙汶生, 王晓燕, 高立芬, 刘素侠, 刘华, 曹英林, 张利宁, 郭春

中国现代普通外科进展,2004,7(2):350~355,-0001,():

摘要

目的:探索利用内皮抑素(Endostatin)进行肿瘤抗血管基因治疗的效果与安全性。方法:以pVAX1为载体,构建含IgGγ链信号肽序列和Endostatin基因的重组载体pVAX2sEN。重组子经KpnI、EcoRI双酶切及测序鉴定。建立小鼠肝癌细胞H22动物模型,分别瘤内注射重组载体pVAX-sEN、空载体、生理盐水(NS),每周2次,测量肿瘤体积,ELISA检测肿瘤局部Endosatin的表达量,流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡。同时,100μg高剂量pVAX-sEN 裸DNA注射实验动物,观察动物的一般状况,20d后处死动物取其内脏病理切片H2E染色。结果:测序结果表明正确构建了含有信号肽及Endostatin的真核表达载体。瘤内注射pVAX-sEN后,ELISA检测到实验组肿瘤局部Endostatin表达量为(201±311)ng/ml,而空载体及NS对照组瘤内未见Endostatin特异性表达;瘤体测量证明pVAX-sEN可以抑制肿瘤的生长,重组载体组肿瘤的平均体积为(0.4±0.3)cm3,显著低于对照组[空载体和NS对照组分别为(1.6±0.4)cm3、(1.9±0.6)cm3,P<0.05。pVAX-sEN可以增加肿瘤细胞的凋亡,实验组、空载体和NS对照组肿瘤细胞的凋亡率分别为(51.9±3.16)%、(24.6±4.43)%、(18.8±1.2)%,实验组与两组差异均有统计学意义(P<0.01)。高剂量pVAX-sEN注射小鼠后,一般状况良好,病理切片H-E染色未见炎症及其他损伤表现。结论:pVAX-sEN载体体内应用可显著抑制小鼠种植性H22肝癌的生长,促进肿瘤细胞凋亡,高剂量应用无可见毒副作用,是一种具有开发潜力的安全有效基因治疗载体。

关键词: 血管内皮抑素•癌,, 肝细胞•基因疗法

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2006年07月07日

【期刊论文】胶质瘤起源细胞与分子病因研究

黄强, 王爱东, 张全斌, 董军, 兰青

中华神经医学杂志,2005,4(3):217-220,-0001,():

摘要

神经干细胞和胶质瘤干细胞的研究成功,对早有定论的胶质瘤起源细胞学说发出了挑战在胶质瘤细胞中,为数不多的千细胞是生成肿瘤的细胞已经证实,但肿瘤干细胞是否起源于神经干细胞仅仅只是推测、两者间的分子关系是研究的切入点,推测调控分子就是胶质瘤发生的分子病因。

关键词: 神经胶质瘤, 分子病因, RNA干扰, 基因疗法

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2004年12月29日

【期刊论文】双自杀基因CD、HS V-tk共表达对肝门部胆管癌细胞杀伤作用实验研究

王占民, 李志伟, 吴小鹏, 刘春生, 马道新, 刘博

中国现代普通外科进展,2004,7(1):19~22,-0001,():

摘要

目的:观察逆转录病毒介导的双自杀基因CD、HS V-tk共表达对肝门部胆管癌细胞FRH的杀伤作用,探讨肝门部胆管癌的基因治疗方法。方法:在脂质体Lipofectamine的介导下将含有双自杀基因的逆转录病毒载体PwzlneoCDglytk转导入包装细胞PA317,经G418筛选后培养产病毒的阳性克隆PA317/CD+tk细胞株,收集其病毒上清,转染FRH细胞,再次经G418筛选,获得稳定表达双自杀基因的FRH/CD+tk细胞株,用RT-PCR检测双自杀基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-flourocytosine, 5-Fc)和/或无环鸟苷(Ganciciovir, GCV)后,用MTT法测定转基因组及未转基因组FRH细胞的存活率。结果:双自杀基因在FRH细胞中可稳定表达,联合使用5-Fc和GCV对靶细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应高于单独使用5-Fc或GVC。结论:逆转录病毒介导自杀基因可有效杀死肝门部胆管癌细胞,双自杀基因共表达较单一自杀基因有更强的抗肿瘤作用。

关键词: 逆转录病毒科·自杀基因·胆管肿瘤·基因疗法

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2005年07月19日

【期刊论文】bcl2XL抗视网膜光感受器细胞凋亡作用的实验研究

唐仕波, 罗燕, 杨斌, 林少芬, 林健贤

中华眼科杂志2003,8(39):490~494,-0001,():

摘要

目的评价抗凋亡基因bcl2XL对视网膜光感受器细胞的抗凋亡作用。方法首先建立谷氨酸损伤的SD大鼠视网膜光感受器细胞凋亡模型。将体外培养的光感受器细胞分为A组(正常对照组)、B组(谷氨酸组)及C组(rAd2gfp2bcl2XL转染+谷氨酸组);其中C组在加入谷氨酸前48h用滴度为615×l012pfu/mL的重组腺病毒rAd2gfp2bcl2XL转染光感受器细胞;荧光显微镜下观察光感受器细胞中的绿色荧光蛋白表达情况;用免疫组化法分析rAd2gfp2bcl2XL转染细胞和未转染细胞Bcl2XL蛋白水平;DNA琼脂糖凝胶电泳以评判3个组神经元凋亡发生与否及凋亡程度;采用Hoechst33258染色做正常核和凋亡核的形态学检测。结果免疫组化检测结果表明转染细胞与未转染细胞的Bcl2XL蛋白表达水平有差异,DNA电泳分析发现B组呈典型的DNA“梯度”条带,而A组和C组几乎无DNA“梯度”条带,核形态学检测结果亦证实转染组较未转染组的核有明显差异。结论重组腺病毒介导转染的bcl2XL对体外培养的视网膜光感受器细胞有抗凋亡作用,提高视网膜光感受器细胞bcl2XL的表达水平可能为视网膜变性疾病提供潜在有效的治疗方法。

关键词: 视网膜, 光感受器, 细胞凋亡, 原癌基因蛋白质c2bcl22, 腺病毒科, 基因疗法

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2005年01月21日

【期刊论文】腺病毒介导的TIMP-4基因转染抑制血管损伤后新生内膜形成

高炜, 郭艳红, 李黔, 陈光慧, 汤健, 高炜△

北京大学学报(医学版),2003,35(4):434~437,-0001,():

摘要

目的:应用腺病毒介导的转基因方式转染人组织型金属蛋白酶抑制剂24(TIMP24)基因,以观察TIMP24对球囊损伤后新生内膜形成的影响。方法:体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)并转染含有TIMP24基因的重组复制缺陷型腺病毒载体(AdTIMP24),采用单层培养细胞刮片法,观察TIMP24对细胞迁移的影响;以大鼠颈总动脉球囊损伤模型为研究对象,损伤后即刻经血管外膜分别转入盐水、空载腺病毒载体和含有TIMP24基因的腺病毒载体,观察细胞迁移和新生内膜形成情况。结果:培养的VSMC转染AdTIMP24后,细胞迁移明显受到抑制,与对照组相比抑制率为63.9%(P <0.01);在大鼠颈总动脉球囊损伤模型中,转基因后4d时生理盐水组、空载腺病毒组和转染AdTIMP24组内弹力板内的细胞数依次为(32.5±4.8)个细胞、(33.8±7.0)个细胞和(8.2±2.4)个细胞,转染TIMP24可以显著抑制血管损伤后细胞向内膜的迁移;血管损伤后28d时,转染TIMP24组新生内膜面积与中膜面积比值与对照组相比降低了66.5%(P<0.01),空载腺病毒组与生理盐水组之间差异无显著性。结论:TIMP24可以抑制培养的VSMC的迁移,局部干预可以明显抑制大鼠颈总动脉球囊损伤后细胞的迁移和血管新生内膜的形成。

关键词: 金属蛋白酶类组织抑制剂, 新生血管化,, 病理性, 基因疗法

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