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2009年07月29日

【期刊论文】骨髓基质细胞复合生物活性陶瓷修复兔颅骨缺损实验研究

秦书俭, 温昱, 李彬

中国临床解剖学杂志,2003,21(4):351~354,-0001,():

摘要

目的:探讨骨髓基质细胞( Bone marrow stromal cells, BMSC)、生物活性陶瓷(Bioactive glass ceramics,BGC)和胶原膜复合材料的成骨作用。方法:将培养的BMSC与BGC及胶原膜复合后植入兔颅骨缺损区,通过形态学、组织化学和立体计量学等方法观察新骨生成情况。结果:①形态学观察:倒置显微镜显示BMSC呈星形,12h部贴壁,对数增殖期为2~4 d。扫描电镜显示BMSC在BGC表面排列紧密,长入BGC孔隙中。实验组术后第12周,X线显示植入材料与外周骨质之间完全被高密度影充填;光镜显示骨小梁相连成片,骨髓再生。②组织化学结果:术后第4、8、12周实验组碱性磷酸酶值分别为(246.33±32.13)、(290.67±12.86)、(375.33±5.03) u/L,高于对照组(P<0.01);钙离子值分别为(1.930±0.070)、(2.130±0.235)、(2.867±0. 261)g/L,高于对照组(P<O.001)。③立体计量学测量结果:实验组第12周体密度值为(65.69±3.00)%,明显高于对照组(P<0.001)。结论:复合材料具有较强的成骨作用,能够有效促进骨愈合。

关键词: 骨髓基质细胞 生物活性陶瓷, 胶原膜

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2009年04月23日

【期刊论文】骨髓基质细胞的体外培养和成骨方向的诱导分化

凌均棨, 唐志英, 林家成, 李京平, 杨国平

中华老年口腔医学杂志,2005,3(1):4~7,-0001,():

摘要

目的:体外分离狗的骨髓基质细胞,诱导其成骨分化并鉴定成骨活性。方法:体外分离培养狗的骨髓基质细胞,传代培养中加入10—8mol/L地塞米松、50μg/ml维生素C和10mmol/Lβ-甘油磷酸钠进行诱导分化,进行细胞形态和增殖观察,矿化结节Von Kossa染色,细胞碱性磷酸酶染色和Ⅰ型胶原免疫组化染色检测其成骨活性。结果:骨髓基质细胞经诱导后表现出明显的成骨活性,体外矿化结节Von Kossa钙染色阳性;传代细胞碱性磷酸酶染色阳性,酶活性>80%,Ⅰ型胶原免疫组化染色强阳性。结论:体外分离培养的骨髓基质细胞中含有骨源性前体细胞,传代细胞具有较强的成骨潜能。

关键词: 骨髓基质细胞 碱性磷酸酶, 染色法

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2006年11月09日

【期刊论文】人体脂肪基质细胞分离培养及其成骨潜能

田卫东, 陈希哲, 林云锋, 乔鞠, 闫征斌, 李声伟

实用口腔医学杂志,2004,20(1):12~15,-0001,():

摘要

目的:分离人体脂肪基质细胞并诱导培养其成骨表型。方法:将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行机械分割,通过Ⅰ型胶原酶消化后得到脂肪基质细胞,在BGJb培养基中原代培养10d,消化传代后用含体积分数10%FBS及10-8mol/L地塞米松,50mg/L左旋抗坏血酸,10nmol/L维生素D3,10mmol/Lβ2磷酸甘油钠的DMEM/F12培养基中诱导培养14d,观察细胞形态,绘制细胞生长曲线并对其成骨表型进行鉴定。结果:脂肪基质细胞呈成纤维细胞样贴壁生长,其中的成体干细胞经诱导培养后体积明显增大,胞核大面圆,胞浆丰富,群体倍增时间为66h。Gomori萘酚磷酸酯法染色显示其胞浆内富含碱性磷酸酶颗粒,vonKossa染色表明聚集的细胞团能形成矿化结节。结论:脂肪基质细胞中的成体干细胞经过矿化诱导培养后可向成骨细胞分化,并具有明显的成骨表型。

关键词: 脂肪基质细胞 成体干细胞, 细胞培养, 成骨表型

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2006年11月09日

【期刊论文】人体脂肪基质细胞成肌潜能研究

田卫东, 陈希平, 陈希哲, 林云锋, 唐尤超, 李声伟

华西口腔医学杂志,2004,22(6):507~509,-0001,():

摘要

目的研究分离的人体脂肪基质细胞经过诱导培养后向骨骼肌细胞分化的潜能。方法通过脂肪抽吸术获取健康成人脂肪,机械分割后用Ⅰ型胶原酶消化,得到脂肪基质细胞。将脂肪基质细胞在BGJb培养基中原代培养10d,在DMEM/F12培养基中进行成肌诱导培养20d,获得细胞爬片。细胞爬片经4%多聚甲醛固定后,用甲苯胺蓝、Mallory磷钨酸苏木素染色观察细胞形态;Myosin单克隆抗体免疫细胞化学染色观察肌球蛋白表达情况。结果经过成肌诱导培养的细胞与常规培养的脂肪基质细胞在形态上有明显的差异,表现为细胞体积增大,单个核的细胞融合形成多核的肌管样结构,胞浆内细胞器发达,肌浆网扩张并形成肌原纤维骨骼肌特异性的Myosin表达阳性。未经诱导的脂肪基质细胞在相同时间点无此现象。结论人类脂肪基质细胞中存在着成体干细胞,在成肌诱导培养条件下具有向骨骼肌细胞分化的潜能。

关键词: 脂肪组织, 基质细胞 细胞培养, 成肌分化

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2006年11月09日

【期刊论文】绿色荧光蛋白标记人脂肪基质细胞成骨分化能力体外实验研究*

田卫东, 林云锋, 敬伟, 陈希哲, 乔鞠, 李志勇, 严征斌, 吴凌, 田卫东△

四川大学学报(医学版),2006,37(5): 700~703,-0001,():

摘要

目的研究绿色荧光蛋白(GFP)基因体外转染人脂肪基质细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能。方法体外分离培养人脂肪基质细胞,用重组腺病毒载体Ad-GFP及脂质体介导质粒pEGFP-C1两种方法转染GFP基因,通过流式细胞术观察比较GFP转染和表达的结果;倒置显微镜下观察细胞生长情况;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况。结果重组GFP基因的腺病毒Ad-GFP转染的脂肪基质细胞的感染率达(42.5±1.5)%,16h即有GFP表达,7d时表达趋于稳定,感染6周时仍可见有GFP表达,明显优于脂质体转染组(转染效率最高为11.4%)。感染Ad-GFP后的脂肪基质细胞与未感染的对照组脂肪基质细胞成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)表达均逐渐增高,两组间差异无统计学意义(P>0105);诱导21d后两组均见到茜素红钙盐染色阳性。结论重组GFP基因的腺病毒载体Ad-GFP可高效率感染脂肪基质细胞,基因转染后细胞的增殖分化能力未受到影响,可以作为一种高效可靠的人脂肪基质细胞标记方法。

关键词: 人脂肪基质细胞 绿色荧光蛋白, 基因转染, 分化

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2006年11月09日

【期刊论文】大鼠脂肪源性血管内皮细胞的培养及其形态特征*

田卫东, 林云锋, 陈希哲△, 阎征斌, 郑晓辉

生物医学工程学杂志,2006,23(4):836~838,-0001,():

摘要

切取4只雄性SD大鼠鼠蹊部皮下脂肪,通过机械分割和组织消化法获得脂肪基质细胞,用人内皮细胞培养基进行定向诱导,倒置显微镜下观察细胞生长状况,并以透射电镜及Ð因子免疫细胞化学方法对诱导后的细胞进行鉴定。SD大鼠脂肪基质细胞经过定向诱导后呈典型的铺路石样单层融合贴壁生长;细胞浆中Ð因子免疫细胞化学染色阳性;透射电镜显示细胞内具有内皮细胞特征性的Weibel-Palade氏小体,细胞边缘可见较多指状突起,胞浆内可见溶酶体等结构。结果证实从SD大鼠皮下脂肪获取得基质细胞经过定向诱导后,可以分化成为内皮细胞,该细胞具有与其它来源的血管内皮细胞相同的特征。皮下脂肪可以成为内源性血管内皮细胞的又一细胞来源。

关键词: 脂肪基质细胞 内皮细胞, 细胞培养

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2006年11月02日

【期刊论文】骨髓微环境对骨髓瘤细胞生物行为的影响①

李娟, 罗绍凯, 熊文杰, 黎军和, 彭爱华

中国免疫学杂志,2004,20(5):352~355,-0001,():

摘要

目的:观察骨髓瘤患者基质细胞(BMSC)及其对瘤细胞几种细胞因子及瘤细胞膜上粘附分子表达的影响。方法:用细胞培养、RT2PCR、流式细胞仪分别测定BMSC及与BMSC共同培养前后瘤细胞IL26mRNA、IL21βmRNA、TNF2αmRNA及瘤细胞膜上ICAM21、VCAM21的表达。结果:初治多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)患者BMSC与瘤细胞共同培养后,初治和复发、难治性MM患者瘤细胞ICAM21、VCAM21表达增加;复发、难治MM患者BMSC与瘤细胞共同培养后,初治和复发、难治MM患者瘤细胞的IL26mRNA、IL21βmRNA、TNF2αmRNA及ICAM21、VCAM21表达均增加;初治MM患者BMSC膜上ICAM21、VCAM21表达高于正常对照组;复发、难治MM患者BMSCIL26mRNA、IL21βmRNA、TNF2αmRNA及ICAM21、VCAM21的表达均高于正常对照组和初治MM患者。结论:初治MM患者BMSC表达粘附分子增加,复发、难治MM患者BMSC除粘附分子表达异常外,其IL26mRNA、IL21βmRNA、TNF2αmRNA亦表达异常;MM细胞与BMSC共同培养后,粘附分子和(或)IL26mRNA、IL21βmRNA、TNF2αmRNA表达增加,可能与MM细胞的存活、生长、耐药及疾病复发密切相关。

关键词: 多发性骨髓瘤, 骨髓基质细胞 细胞因子, 粘附分子

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2006年11月02日

【期刊论文】沙利度胺对难治、复发多发性骨髓瘤患者骨髓微环境的影响

李娟, 罗绍凯, 洪文德, 周振海, 邹外一

Chinese Journal of Cancer, 2003, 22 (4): 346-349,-0001,():

摘要

背景与目的:越来越多的研究表明,骨髓瘤细胞的生长、生存以及耐药的产生与骨髓微环境密切相关。沙利度胺(thalidomide,Thai)是作用于骨髓微环境的药物之一,我们通过观察沙利度胺对难治、复发多发眭骨髓瘤(mulnDleⅡⅣe10ma.MM)患者骨髓微环境的影响,进一步了解Thai的作用机制。方法:用流式细胞仪检测沙利度胺治疗前后难治、复发的MM患者骨髓基质细胞膜表面的细胞间粘附分子fcAM-1)和血管细胞粘附分子(vcAM-1)的表达强度,半定量RT-PCR法检测骨髓基质细胞IL-1BmRNA、IL-6mRNA、TNF-dmRNA的表达,采用酶联免疫吸附法ELISAj删定其血清VEGF、bFGF水平。结果:难治、复发MM患者骨髓基质细胞(BMSC)膜表面ICAM-1、VCAM-1平均荧光强度分别为13.28±4.26、10.35±2.47,用Thai治疗有效的难治、复发MM患者BMsc膜表面ICAM-1、VCAM-1平均荧光强度分别为4.29±0.98、3.54±0.62,明显受抑制妒<0.05)。难治、复发MM患者BMSCIL-1BmRNA、IL-6mRNA、TNF-dmRNA与B-actin的比值分别为1.83±0.64、24.52±11.46、3.42±1.83,用Thal后有效的难治、复发MM患者BMSCIL-1Bn,RNA、IL-6mRNA、TNF-dmRNA与13-actin的比值分别为0.58±0.11、13.47±14.31、1.25±0.76,明显受抑制。P<0.05。而治疗无效的难治、复发MM患者BMSC膜表面ICAM-1、VCAM-1平均荧光强度和IL-1BmRNA、IL-6mRNA、TNF-dmRNA与13-actin的比值同治疗前的比较,其差异无显著眭妒均>0.05)。难治、复发MM患者血清VEGF、bFGF水平分别为150.26±19.33)ng/L、Q3.78±13.63)ng/L,用Thai治疗后有效及无效者血清VEGF、bFGF水平均低于治疗前妒<0.005)。结论:沙利度胺能抑制新生血管的形成,并可阻断骨髓瘤细胞与骨髓基质细胞的结合。

关键词: 多发眭骨髓瘤, 沙利度胺, 骨髓基质细胞 细胞间粘附分子, 血管细胞粘附分子, 血管内皮生长因子, 碱眭成纤维细胞生长因子

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2006年01月11日

【期刊论文】人AGM区基质细胞系的建立及其生物学特性

黄绍良, CHEN Hui-qin, ZHANG Xu-chao, HUANG Shao-liang, WEI Jing, WU Bei-yan

中山大学学报(医学科学版),2005,26(1):20-23,28,-0001,():

摘要

[目的]建立人主动脉-性腺-中肾(AGM)区基质细胞系。研究其生长特性及表面标志的表达。[方法]取孕30~35d的人胚胎分离培养AGM区基质细胞,传代培养成系并检删其增埴能力,应用流式细胞术、免疫荧光方法检测其造血相关表面标志和细胞外其质蛋白成分。[结果]人AGM 区基质细胞呈成纤维样形态,指数生长期倍增时间约为16h。流式细胞仪检测结果显示CD31、CD34、CD45在人AGM区基质细胞表面为阴性表达,而CD29、CD44、CDl05、CDl66均为阳性表达。免疫荧光检测结果显示AGM区基质细胞表达细胞外基质蛋白Tennscin、Fibroneetin、Laminin及α-SMA。[结论]人AGM区基质细胞系呈现造血组织特异的相关分子表达特征,可以作为研究造血发生机理的模式细胞。

关键词: 主动脉-性腺-中肾区, 基质细胞 造血发生, 细胞黏合素

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2005年07月20日

【期刊论文】增龄对大鼠骨髓基质细胞分化的影响△

陈槐卿, 陈槐卿#, 药蓉, 韩君, 邓力*, 李良

中国医学科学院学报,2003,25(3),245~252,-0001,():

摘要

目的 对比研究3、6、9、12个月龄大鼠的骨髓基质细胞白细胞(marrow stromal cdls,Mscs)成骨与成脂肪能力的变化。方法 培养液中分别加入成骨、成脂肪诱导剂,在不同时间行细胞化学染色观察3和12个月龄两组大鼠MScs的成骨与成脂肪能力的变化;采用RT PcR法分别检测3、6、9、12个月龄大鼠的MScs的I型胶原mRNA和脂蛋白脂酶mRNA水平的变化。结果 成骨诱导1周后,12个月龄大鼠的MScs对照与诱导组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达阳性率均低于3个月龄大鼠的同组细胞。成骨诱导12 d后,3个月龄大鼠组的MScs先于12个月龄大鼠组形成钙化。成脂肪诱导第2天,12个月龄大鼠组的MScs先于3个月龄大鼠组MScs生成脂滴。RT PcR检测显示I型胶原mRNA水平随月龄增长表达降低,且随诱导时间延长降低幅度变大;脂蛋白脂酶的mRNA水平随月龄增长表达增加,随诱导时间延长增加幅度变大。结论大鼠的MScs随月龄增长成骨能力降低,成脂肪能力增强。

关键词: 大鼠骨髓基质细胞 月龄, 成骨分化, 成脂肪分化

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2005年10月13日

【期刊论文】骨骼基质细胞诱导分化与聚乳酸吸附培养细胞初步研究

娄思权, 刘延青, 张克, 刘岩

中华风湿病学杂志,2001,(5):11~13,-0001,():

摘要

目的 骨骼基质细胞体外培养条件下是否分化为骨细胞;探索多孔聚乳酸作为组织工程载体吸附培养骨髓基质细胞的可行性。方法 取兔骨髓细胞经培养得到骨髓基质细胞,以地塞米松、维生素C、β-磷酸甘油诱导细胞分化,以原位杂交检测骨桥素和骨连接素mRNA,Von Kossa钙染色检测矿化结节。以生物可降解材料——聚乳酸吸附培养骨髓基质细胞,扫描电镜和组织学苏木精-伊红染色观察细胞的生长情况,并对载体中培养第4~12天细胞计数。结果 骨髓基质细胞经诱导第2周表达骨桥素,第3周表达骨桥素、骨连接素和形成矿化结节。细胞可以进入多孔聚乳酸内部生长,12d细胞密度可以达2.6×107/cm3。结论 骨髓基质细胞含有成骨干细胞;多孔聚乳酸可以吸附骨髓基质细胞生长,因此可能作为骨组织工程材料。

关键词: 骨髓基质细胞 聚乳酸

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2005年10月13日

【期刊论文】骨髓基质细胞修复免关节软骨的实验研究

娄思权, 刘延青*, 娄思权*

骨与关节损伤杂志,2000,15(2):123~125,-0001,():

摘要

目的 研究骨髓基质细胞修复兔关节软骨的可能性。方法 取自体骨髓基质细胞体外培养扩增,聚乳酸吸附骨髓基质细胞值入兔膝关节软骨负重(内髁)和非负重区(外髁)缺损内,观察4、8、12周后软骨缺损的修复情况,并对组织切片评分。结果 8、12周后,骨髓基质细胞在负重区缺损内可以形成透明软骨,组织评分接近正常软骨优于对照,非负重区内没有形成透明软骨。结论 骨髓基质细胞可以修复关节软骨缺损,摩擦和压应力是成软骨的重要条件。

关键词: 骨髓基质细胞 软骨

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2005年03月08日

【期刊论文】骨髓基质细胞的分离、鉴定以及TH基因的转染与表达

杨慧, 鲁玲玲, 苏玉金, 赵春礼, 邹西峰, 侯少平, 徐群渊, 杨慧*

生物化学与生物物理学报,2003,35(4):536~541,-0001,():

摘要

目的 是探索骨髓基质细胞的分离培养、鉴定及其接受并表达TH基因的能力。实验中通过密度梯度离心法成功地从成年SD大鼠骨髓中分离获得了骨髓基质干细胞,并用流式细胞仪对其进行鉴定,纯度可达75%。进一步采用复制缺陷型腺相关病毒载体介导的基因转染方法, 将之改造成为携带lacZ与TH基因的工程细胞,经X-gal 染色和TH免疫组化检测,转染效率为(74.6±19.4)%。实验结果表明骨髓基质细胞易于接受并表达外源基因,有望作为运载细胞应用于帕金森病的基因治疗。

关键词: 骨髓基质细胞 帕金森病, 腺相关病毒载体, TH基因

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