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2011年05月23日

【期刊论文】天然棕色棉查尔酮合成酶基因(GbCHSl)的克隆和实时定量表达分析

孙杰, 杨会娜, 田新惠, 李艳军, 李明月, 冯鸿杰, 孙杰*

棉花学报,2010,22(1):42~48,-0001,():

摘要

根据植物查尔酮合成酶基因保守区序列设计引物,以发育18d的天然棕色棉纤维为材料,用RT-PCR结合RACE技术分离得到了一个查尔酮合成酶基因的全长cDNA(GenBank登录号:EU921263),将该基因命名为GbCHSl。实时荧光定量PCR检测显示。GhCHSl基因在棕色棉纤维细胞中优先表达,且在棕色棉纤维中的表达量远高于其近等基因系白色棉,但是该基因在绿色棉中几乎检测不到。这些试验结果暗示。该基因可能在棕色棉纤维色素形成中发挥重要作用。

关键词: 查尔酮合成酶, 天然彩色棉, 实时定量RT-PCR

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2009年11月01日

【期刊论文】RNA干扰抑制BUBI基因表达对染色体分离的影响

翁亚光, 施琼, 王箭, 朱旦, 翁亚光l, △, 王应雄, 蔡燕, 刘青松, 刘子杰

CHINESE JOURNAL OF ANATOMY Vol.29 No.1(2006)35-39,-0001,():

摘要

目的:研究BUBI基因表达调控对染色体分离的影响。方法:用定量RT-PCR比较RNA干扰前后的胚胎细胞内源性基因BUB1的mRNA水平,同时对染色体数目异常率进行比较分析。结果:干扰后BUBI基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值为干扰前的21.80%,染色体数目异常率均值由干扰前5.02%上升到29.61%。经统计分析,RNA干扰前后BUBI基因mRNA水平和染色体数目异常率有显著差异。结论:BUBI基因表达的降低会导致染色体分离的异常,本研究为染色体分离相关蛋白功能研究建立了新的研究手段和实验评价体系。

关键词: BUBI基因, RNA干扰, 定量RT-PCR 胚胎细胞

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2005年04月15日

【期刊论文】半定量RT-PCR法评定不同生长阶段猪抗菌肽pr-39基因表达差异

汪以真, 林文学, 许梓荣

农业生物技术学报,2004,12(1):52~55,-0001,():

摘要

根据已报道的猪抗菌肽pr-39基因和看家基因β-肌动蛋白(β-actin)基因序列,分别设计pr-j9和β-actiin的引物,探讨了PcR体系中适宜的Mgcl2浓度、循环次数,以及2对引物间竞争情况。实验揭示,要保证半定量RT-PcR的可行性与可靠性,适宜的Mgcl,浓度为25mmol/L,循环次数为29;由于2对引物之间的杂交配对,两对引物需分别进行扩增。根据以上信息构建一优化的半定量RT-PcR法,以β-actin为内标,研究不同生长阶段猪抗菌肽pr-39基因表达的差异。结果显示,不同生长阶段猪pr-39基因表达有差异,从出生到断奶前pr-39表达量呈增加趋势,断奶时表达量下降,断奶后随日龄增加pr-39表达量再逐渐增加。

关键词: 半定量RT-PcR, 猪, 抗菌肽, pr-39, 基因表达

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2005年04月15日

【期刊论文】小白鼠乳铁蛋白基因片段克隆及不同泌乳阶段乳铁蛋白基因表达的差异

汪以真, 韩菲菲, 黄海青

浙江大学学报(农业与生命科学版)30(1):83~88,2004,-0001,():

摘要

从泌乳期小白鼠乳腺组织中提取总RNA,用反转录酶反转录为cDNA后,根据已报道的小白鼠乳铁蛋白(LF)cDNA设计一对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)进行扩增,获得一条897bp的片段,克隆于pGEM2TVector后进行序列分析表明,该片段为LF基因cDNA的部分序列,编码299个氨基酸组成的多肽,是成熟肽的主体部分。本研究得到的基因片段与已报道的小白鼠子宫LFcDNA部分序列的同源性达到99%L以LF基因片断的成功克隆为基础,本实验室构建了一优化的半定量RT2PCR法,以B-actin为内标,研究不同泌乳阶段小白鼠乳腺组织LF基因表达的差异L结果显示,不同泌乳阶段小白鼠LF基因表达有差异,在泌乳第1日,LF基因的表达量较高,从泌乳第1日到泌乳第10日和第18日,LF基因表达量呈下降趋势,到乳腺组织退化的干乳期(泌乳第25日),LF基因表达量又明显升高。

关键词: 乳铁蛋白, 小白鼠, 乳腺, 基因克隆, 定量RT-PCR 基因表达

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2005年07月20日

【期刊论文】流体切应力强度对内皮细胞IL-8基因表达的影响*

陈槐卿, 张文胜, △, 李良, 陈友琴, 杨元

生物医学工程学杂志,13(2):181~211,-0001,():

摘要

内皮细胞位于血流与血管壁之间,内皮细胞调控的机械力相关反应已成为正常血管反应的一部分。切应力在调节内皮细胞功能上具有重要作用。流体切应力可以直接调节内皮细胞基因的表达,其中包括诱导内皮细胞表达IL28,而且IL-8的表达量与切应力作用时间有关。为阐明内皮细胞IL-8基因的表达除了与切应力的作用时间有关外还与切应力的强度有关,我们用不同强度的流体切应力(2.23、4.20、6.08、8.19、9.67、12.15、14.40、16、87、19.29 dyne/an2)处理培养的人脐静脉内皮细胞,然后采用定量RT-PCR 的方法检测内皮细胞IL-8基因的表达情况。结果显示:未用切应力处理的内皮细胞没有IL-8基因的表达;切应力处理内皮细胞后,低切应力(2. 23 dyne/an2)时IL-8mRNA表达量明显增加为高切应力(19.29dyne/an2)时IL-8mRNA表达量的约68(作用1h)或52倍(作用2h)。IL-8 mRNA的表达量与内皮细胞所施加的切应力强度呈反变关系;直线回归方程:1h时为y=7.57-0.11x,相关系数r=0.97;2h时为y=7.92-0.10x,相关系数r=0.96。式中:y为切应力作用下内皮细胞IL-8mRNA的表达量(拷贝数的对数值);x为施加于内皮细胞的切应力强度(dyne/am2)。不同的切应力作用时间(1h、2h)均表现出相同的IL-8mRNA随切应力强度的变化规律。提示流体切应力诱导内皮细胞表达IL-8,不仅与切应力的作用时间有关,而且IL-8 的表达量与切应力强度有关。流体低切应力诱导内皮细胞IL-8mRNA的表达急剧增高,可能在炎症和动脉粥样硬化的发生、发展过程中具有重要作用。

关键词: 白细胞介素-8, 定量RT-PCR 流体切应力, 内皮细胞

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2007年09月28日

【期刊论文】大豆异黄酮对胰岛素抵抗大鼠抵抗素基因表达的影响

陈世伟, 陈世伟., 张红敏, 张立实, 冯晓凡

四川大学学报(医学版)J Sichuan Univ (Med Sci Edi) 2006; 37 (5): 717-720,-0001,():

摘要

目的:探讨大豆异黄酮(SIF)改善高脂高蔗糖膳食诱导大鼠胰岛素抵抗(IR)状态的作用及可能机制。方法:选用高脂高蔗糖饮料诱导的IR雄性SD大鼠,根据胰岛素抵抗指数(IRI)随机分为模型对照组和3个SIF组(50 mg/kg·bw, 150 mg/kg·bw及450mg/kg·bw)。各组给予相应受试物1用后,酶法检测各组动物空腹血糖、放免法检测空腹血胰岛素、酶免法检测血抵抗素含量,实时定量RT-PCR法检测肾周脂肪组织抵抗素基因的mRNA水平。结果:与模型对照组比较,450mg/kg·bw SIF组能明显降低大鼠肾周组织抵抗素基因mRNA的表达及血清抵抗素的含量。150mg/kg·bw SIF和450mg/kg·bw SIF组能显著降低空腹血胰岛素水平及IRI。3个SIF组的血糖与对照组比较差异无统计学意义。IRI与血清抵抗素水平存在着明显的正相关(r=0.355, P<0.05)。结论:SIF可能具有通过下调抵抗素基因mRNA表达及降低血清含量而提高胰岛素敏感性的作用。

关键词: 大豆异黄黄酮, 胰岛素抵抗, 抵抗素, 实时定量RT-PCR

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2007年09月28日

【期刊论文】大豆异黄酮对膳食诱导胰岛素抵抗大鼠脂联素基因表达的影响

陈世伟, 张红敏, 张立实, 冯晓凡, 彭晓莉

卫生研究2006年1月第35卷第1期/JOURNA LOF HYGIENE RESEARCH Jan., 2006, Vol. 35, No. 1,-0001,():

摘要

目的:探讨大豆异黄酮(SIF)改善高脂高糖膳食诱导大鼠胰岛素抵抗(IR)状态的作用及可能机制。方法:选用高脂高糖饮料诱导的IR雄性SD大鼠,根据胰岛素抵抗指数(IRI)随机分为模型对照组和3个SIF剂量组(50, 150及450 mg/kg bw)。各组相应受试物1月后,试纸法检测各组大鼠血糖、放免法检测血胰岛素、酶免法检测血脂联素含量,实时定量RT-PCR法检测肾周脂肪组织脂联素基因的mRNA水平。结果:与模型对照组比较,450 mg/kg bw组明显降低大鼠体重及内脏脂肪含量、提高脂肪组织脂联素基因mRNA的表达、促进脂、联素的分泌。150 mg/kg bw和450 mg/kg bw组能显著降低胰岛素水平及IRI。3个SIF剂量组的血糖与模型对照组比较无明显差异。IRI与血清脂联素水平存在着明显的负相关。结论:SIF具有减少大鼠脂肪沉积、促进脂联素的分泌、提高胰岛素敏感性的作用。

关键词: 大豆异黄酮, 胰岛素抵抗, 批联素, 实时定量RT-PCR

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