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2009年07月23日

【期刊论文】家蚕滞育生物钟蛋白质Ea se A4 的纯化及其分子结构分析*

徐世清, 徐世清), 甲斐英则), 徐俊良), 东健一郎), 谷直纪), 郑必平)

中国生物化学与分子生物学报,1999,15(2):242~246,-0001,():

摘要

Ease A4 是家蚕卵的一种滞育生物钟蛋白质. 产下后2d 的家蚕C108 品种滞育性卵,经过丙酮脱脂、85℃热处理、硫酸铵沉淀和Sephadex G225 凝胶过滤层析初步分离,进一步经过Sep 2Pak C18 脱盐浓缩,HPLC (柱为YMC-Pack Protein-RP) 分离,通过SDS2PA GE 和MALD IMS方法鉴定,纯化得到Ease A4 蛋白质。从10g蚕卵最终得到了11.8μg Ease A4。Ease A4由从His 到Tyr 的155个氨基酸残基构成,蛋白质部分的分子量为16 601。其22 位氨基酸残基A sn 处有一个Asn-X-Thr 糖基化场所,并有糖基结合在该部位,糖基的分子量约为760。Ease A4 的61 位和150位的两个Cys 氨基酸残基之间存在二硫键. 糖基和二硫键的存在不仅有利于酶蛋白的分离,还可能与酶活性有关。

关键词: 家蚕 滞育性卵, Eaterase A4, 纯化, 分子结构

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2009年07月23日

【期刊论文】重离子射线照射后的家蚕胚胎造血器官的修复再生

徐世清, 木口憲爾, 凌尔军, 白井孝治, 深本花菜, 屠振力

辐射研究与辐射工艺学报,2003,21(2):143~147,-0001,():

摘要

为了研究重离子射线照射后家蚕造血器官的修复再生作用,用碳离子射线局部照射家蚕接近孵化时紧贴翅原基内侧的胚胎造血器官,局部细微手术损伤造血器官,观察了对幼虫造血功能的影响,了解了造血器官的修复程度。100Gy 以上剂量照射,家蚕出现变态困难,幼虫和蛹的生存率下降,眠中、化蛹或羽化时期出现死亡个体等缺血生理障碍,其影响程度随射线剂量增加而加重。200Gy 照射组5龄存活幼虫血细胞含量下降,但其中部分个体的血细胞含量接近对照未照射处理,其体内出现了再生的造血器官。家蚕幼虫有很强的修复再生造血器官功能。

关键词: 重离子射线, 家蚕 胚胎, 造血器官, 修复再生

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2005年10月14日

【期刊论文】转基因Bt水稻花粉在桑叶上的自然飘落浓度

樊龙江, 吴月友, 庞洪泉, 吴建国, 舒庆尧, 徐孟奎, 陆剑飞

生态学报,2003,23(4):826~833,-0001,():

摘要

实地(杭州)调查了桑稻混种地区水稻花粉飘落到桑叶上的浓度,同时对转Bt基因水稻花粉向桑叶上飘飞程度进行了田间试验。20个采样点的调查结果显示,超过一半(54.5%)的桑叶检测到了水稻花粉,其浓度变化范围为13.3~199.0粒/cm2,平均浓度为92.9粒/cm2,与109.1粒/cm2(该浓度影响家蚕生长发育)持平(1=0.10,P>0.5)。不同桑稻距离(0~10m)的桑叶花粉浓度总体上是距离越近花粉浓度越高。将处于开花期的转基因Bt水稻和非转基因水稻植株(各3株)同时放入桑园中,然后观察水稻植株周边桑叶飘落上水稻花粉的浓度。两次试验采集的桑叶自然飘落的水稻花粉平均为3.8粒/cm2,这一结果证明水稻花粉可飘落到桑叶上,从而支持上述调查结果;试验同时证实转基因Bt水稻和非转基因水稻植株的花粉飘飞能力没有差异。以上研究结果表明,BT水稻在我国南方养蚕地区推广将可能对家蚕的生长发育造成负面影响。

关键词: Bt水稻, 桑叶, 家蚕 转基因作物安全性, 花粉浓度

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2005年05月28日

【期刊论文】家蚕卵黄原蛋白及其受体基因*

夏庆友, LIN Ying, ZHAO Ping, HOU Yong, LI Juan, GONG Da-Ping, SUN Quan, XIA Qing-You *, *, XIANG Zhong-Huai

动物学报,51(1):117~125,-0001,():

摘要

家蚕小卵突变体(Small egg mutant,sm),其卵体积仅及正常卵的2/3,不能受精而致死。因其卵母细胞不能正常吸收卵黄原蛋白(Vg),人们认为其原因可能是卵黄原蛋白受体基因(VgR)突变所致。本研究首先通过克隆筛选和基因组序列分析,获得了2564 bp含有pbvA的家蚕卵黄原蛋白受体基因(BmVgR)片段。将该基因片段的预测蛋白与其它物种的VgR/YPR和低密度脂蛋白受体(LDLR)家族比较,发现该基因具有LDLR家族的基本结构特征。其次,经RT-ECR检测,结果表明BmVgR在sm的不同时期的卵母细胞中都能正常转录。最后,分别对sm不同发育时期的体液和卵的总蛋白进行SDSPAGE分析,发现该突变体的卵母细胞不能正常摄取体液蛋白(包括Vg)。综合分析,sm不能正常摄取Vg,可能并不是VgR的功能异常导致,而是与滤泡细胞异常有关

关键词: 家蚕 小卵突变体, 卵黄原蛋白受体, 卵黄原蛋白, 低密度脂蛋白受体

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2005年05月28日

【期刊论文】家蚕胚胎发育时期的RNA干涉研究*

夏庆友, 刘春, 帅小蓉, 程廷才, 徐汉福, 李春峰, 代方银, 夏庆友*, *, 向仲怀

生物化学与生物物理进展,2004,31(4):322~327,-0001,():

摘要

通过导入特定基因的dsRNA特异性地关闭该基因的功能,由此产生的现象为RNA干涉。为在家蚕胚胎发育时期建立有效的RNAi技术体系,在前人的基础上以家蚕第三白卵基因Bmuh3为材料,建立了有效的RNAi技术体系,结果表明,成功诱导第三白卵突变表型的有效注射时间为产卵后8h内,wh3dsRNA的有效浓度须大于2.0g/L。在发育胚胎的第三天注射wh3dsRNA,同样可诱导第三白卵突变的另一表型——半透明蚁蚕,根据实验结果初步推测,Bmwh3不仅参与眼色素和卵浆液膜色素前体的转运,还可能参与胚胎体壁色素前体的转运。

关键词: RNA干涉,, 家蚕,, Bmwh3基因,, 第三白卵突变

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2005年05月28日

【期刊论文】家蚕母性基因的表达序列标签分析

夏庆友, 邱咏梅, 夏庆友*, 程道军, 沈以红, 刘春, 林英, 查幸福, 向仲怀

昆虫学报,2004,47(2):159-165,-0001,():

摘要

为了研究家蚕Bombyx mori卵中储存的母性遗传信息,以未受精的肾脏型和正常型蚕卵为材料构建了cDNA文库,并对其随机测序,共获得391条表达序列标签(EST)序列,经拼接后得到374条非重复序列。生物信息学分析发现,172个非重复序列与国际数据库GenBank和silkbase中的已知基因具有较高的相似性。除3个已知母性基因外,其余主要与DNA复制、能量代谢、信号转导、转录、蛋白质结构以及胚胎发育中个体形成等相关:该结果可为进一步研究家蚕胚胎早期发育的调控提供基础数据。

关键词: 家蚕 表达序列标签, 未受精卵, 胚胎发育, 母性基因

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2005年05月28日

【期刊论文】家蚕不同品种与个体的血液胰凝乳蛋白酶抑制剂差异研究

夏庆友, 赵萍, 藤井博, 伴野丰

蚕业科学,2003,29(4):349~354,-0001,():

摘要

胰凝乳蛋白酶抑制剂(Chymotrypsin inhibitor,CI)是家蚕血液中主要的蛋白酶抑制因子,为其正常生长发育所不可缺少,研究a对阐明家蚕正常生理以及害虫防治等都具有重要意义。采用pH8.3、4.0聚丙烯酰胺凝胶电泳和CI活性染色法,对6个家蚕品种血液中的蛋白质含量和CI活性进行了测定,并对各品种CI活性的个体差异性进行了分析。结果表明:结合pH 8.3和pH4.O的电泳条件,可检测出Ict-D,Ict-E,Ict-A,Ict-B,Ict-H基因所支配的15种CI;6个品种中有3个具有CI个体差异性,而且Ict-E和Ict-B在有的品种或个体无活性,为非必需种类。

关键词: 家蚕 血液, 胰凝乳蛋白酶抑制剂, 比活性, 个体差异

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2006年06月30日

【期刊论文】His-猪生长激素融合基因在Bm-N细胞和蚕体内的表达与纯化*

朱江, 姜秀英, 朱艳, 彭建明, 曹广力, 朱江*

苏州大学学报(自然科学版),2004,21(2):81~85,-0001,():

摘要

用构建的带有His-Tag pgh融合基因的重组杆状病毒Bm-BacPAK6-pgh研究了Bm-BacPAK6-pgh在家蚕细胞(Bm-N)和蚕体内的表达,并对蚕体表达产物进行了纯化。SDS-PAGE电泳分析显示,重组病毒Bm-BacPAK6-pgh在Bm-N细胞、蚕体中得到了融合表达,western blot分析表明,Bm-N细胞、蚕体中表达的融合蛋白与大肠杆菌表达的猪生长激素具有相同的抗原性。BmBacPAK6-pgh在Bm-N细胞内的表达始于24h,而蚕体中的表达始于72h,二者的表达峰分别在96h和120h。经40%饱和度硫酸铵盐析和Ni-NTA Agargse亲和柱二步纯化可获得SDS-PAGE电泳纯的具有抗原性的重组猪生长激素融合蛋白。

关键词: 猪生长激素, 融合基因, BmN细胞, 家蚕 表达, 纯化

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2006年06月30日

【期刊论文】6×His-猪生长激素融合基因在家蚕生物反应器中的表达

朱江, 姜秀英, 曹广力, 朱艳, 彭建明, 李新平, 沈颂东, 贡成良

蚕业科学,2004,30(4):376~381,-0001,():

摘要

将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA基因克隆入转移载体pBacPAK2His1,构建了重组转移载体pPGH030,进而将pPGH030与线性化病毒Bm-BacPAK6共转染BmN细胞,成功获得了猪生长激素重组杆状病毒Bm-BacPAK6-pgh。感染重组病毒的细胞可溶性蛋白SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,感染细胞蛋白电泳带的25kD处有1条猪生长激素特异带。Bm-BacPAK6-pgh的BmN细胞培养液接种家蚕5龄幼虫和蛹,感病幼虫与蛹血淋巴的SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,6×His-猪生长激素融合基因在家蚕体内得到了表达,特异性条带大小约为25kD。

关键词: 猪生长激素, 融合基因, 家蚕生物反应器, 表达

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2005年01月19日

【期刊论文】人促红细胞生成素基因在家蚕体中的高效表达

张传溪, 姜育蕾, 胡萃, 吴祥甫

生物工程学报,2000,(1):46~50,-0001,():

摘要

人促红细胞生成素(EPO)是一种调控红系干细胞增殖、分化和成熟的糖蛋白激素。将合成的EPO cDNA插入杆状病毒转移载体pBlueBac Ⅲ,使其置于Ph 基因强启动子控制之下,获得了转移载体pBlueBacEPO。将pBlueBacEPO DNA 与野生型BmNPV DNA 共转染BmN 细胞,经空斑纯化,获插入EPO cDNA 的重组病毒rBmN-PVEPO。经Sonthern 杂交和PCR 扩增鉴定证明人EPO 基因已正确组建于BmNPV 的预定位置。将重组病毒rBmNPVEPO 穿刺接种5 龄幼虫和蛹,收集感染第3~5d 的幼虫血淋巴和3~615d 蛹血淋巴。用EL ISA 检测幼虫血淋巴中EPO 表达量高达62800u/mL,蛹血淋巴中表达量达74000u/mL。Western blot 结果显示幼虫血淋巴和蛹血淋巴均有一条明显的免疫杂交带,分子量均约为26kD。用TF21 细胞对幼虫表达产物进行了生物活性测定,每毫升血淋巴中EPO 活性约为63000u。

关键词: 人促红细胞生长素基因,, 家蚕核型多角体病毒,, 昆虫细胞,, 蚕体,, 基因表达

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2005年02月24日

【期刊论文】不冷藏或短期冷藏家蚕滞育卵的随时孵化技术研究

林健荣, 邵金丽, 廖富, 倪惠波, 霍永康

蚕业科学,2004,30(3):308~311,-0001,():

摘要

研究了家蚕卵产后经过l~7 d,10~20d解除滞育的孵化条件。蚕卵产下后在25℃保护l~7d的未完滞育卵用,l.075 kg/L盐酸,46℃液温分别浸渍5,10.20.25 40 45 50 20min,实用孵化率可以达到90%左右。当蚕卵产下后在25℃保护经过l0-20d时,用高温冲击加浸酸的方法可以解除其滞育,实用孵化率可达90%左右。

关键词: 家蚕 滞育卵, 随时孵化, 冷藏时间, 浸酸时间

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2005年02月24日

【期刊论文】高温干燥催青条件对温敏性蚕品种胚胎发育生理生化影响的探讨*

林健荣, 陈建勋, 邓小娟, 黄卓烈, 黄自然

蚕业科学,2001,27(1):16~19,-0001,():

摘要

将温敏性蚕品种在高温干燥的条件下催青,结果水分的散失较常温常湿催青大,卵内糖元、氨基酸含量较常温常湿低SOD、CAT酶活性前期高于常温常湿,而转青时则相反。认为高温干燥条件催青对蚕卵呼吸强度有抑制的影响。

关键词: 家蚕 温敏性品种, 催青条件胚, 胎生理生化

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2005年02月24日

【期刊论文】家蚕胚胎温敏性基因的RAPD标记筛选*

林健荣, 梅曼彤, 黄自然, 庄楚雄, 邓小娟, 黄亚东

农业生物技术学报,2001,9(2):171~174,-0001,():

摘要

用家蚕华1、S伴品种及其杂交后代F2分离群体为材料进行胚胎温敏性基因为RAPD分子标记筛选,经287小随机引物的PCR扩增产物电泳分析,筛选到2个特异性DNA多态片段。一个只出现在温敏性赤蚁蚕品种中。另一个出现在非温敏黑蚁蚕品种中,扩增条带的分子量约1350bp,命名为OPA-021350,经共分离的检测分析,与黑蚁非温敏性状有效紧密连锁关系,并以Pgemr-T Vector为载体,大肠杆菌DH5a为宿主进行了克隆。

关键词: 家蚕 胚胎温敏性, 基因, RAPD标记

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2005年02月24日

【期刊论文】利用基因与环境互作控制家蚕性别

林健荣, 廖富蘋, 严会超

遗传,2002,24(1):27~30,-0001,():

摘要

S伴、K05、伴1、Sl、D01 5个蚕品种,有胚胎期对高温干燥的催青条件表现敏感性,农4、新九、限杭对高温干燥催青条件有较高的耐受能力,当用新九的雌与S伴、K05、伴1、Sl、D01 的雄蛾杂交时,其杂种一代的蚕卵,在高温干燥条件下催青,雌蚕因在胚胎发育过程中对环境条件表现敏感而不能孵化,雄蚕则能正常孵化,因而利用基因与环境的相互作用可以控制家蚕的性别。雌蚕高温干燥条件敏感性,主要发生在胚胎发育至后期阶段。对S伴等5个温度性品种的亲缘关系进行RAPD分析,经统计计算,相似率在63.04%-76.47%之间。

关键词: 家蚕 基因, 环境, 控制性别

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2005年02月24日

【期刊论文】家蚕遗腹卵率的遗传参数分析

林健荣, 司马杨虎, 史奕山, 农朝志, 黄星光

华南农业大学学报,1995,16(4):87~90,-0001,():

摘要

用6个原种按完全双列杂交法安排试验,对组配的36个杂交组合的试验结果,用数量遗传学及统计学方法进行了分析,家蚕遗腹卵的发生,在原种间、杂种间均有一定的差异性,以日系杂交原种有偏市制倾向。造卵数与遗腹卵率的相关分析表明,蚕的遗腹卵的遗传表现为超显性,显性效应大于加性效应,亲本以显性基因频率大于隐性基因的频率,推测其基因数目至少有3对。

关键词: 家蚕 遗腹卵, 遗传分析

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2005年02月24日

【期刊论文】家蚕胚胎伴性温敏性的遗传研究*

林健荣, 黄自然, 黄君霆

蚕业科学,1998,24(2):100~103,-0001,():

摘要

试验用新九与伴1等4个温敏性的品种杂交,将其F1代蚕种用高温干燥条件催青,结果雄蚕正常孵化,雌蚕几乎不孵化,表明伴l等品种具有控制催青温敏性表达的基因存在。用华1与伴l组配的F1、F2及F1与亲本回交的14个组合作遗传分析,认为催青敏感性状由位于z性染色体上的一个主基因控制,呈隐性的伴性遗传。

关键词: 家蚕 胚胎期, 温敏性, 遗传

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2005年02月24日

【期刊论文】家蚕新品种5·芙×7·湘的选育

林健荣, 林健荣), 钟生泉), 严会超), 黄星光), 农朝志), 邓小娟)

湖北农业科学,2001(3):52~54,-0001,():

摘要

用杂交育种方法育成经济性状良的斑纹限性品种57限,通过杂交组配合力测定,育成5·芙×7·湘西元杂种,经全省品比鉴定,幼虫生命力、发育经过、茧丝质各项经济性状指标优良,符合新品种审定标准,是一个适于广东秋词养的家蚕新品种。

关键词: 家蚕 新品种, 5·芙×7·湘, 选育

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2005年02月24日

【期刊论文】氟素对家蚕幼虫血淋巴中酶活性及钙镁离子含量的影响*

林健荣, 史奕山, 卢日成林, 琳钟生泉

蚕业科学,1994,20(2):115~118,-0001,():

摘要

家蚕食下氟素后,引起血淋巴中钙、镁离子含量的下降;对谷一丙转氨酶、蛋白酶的活性均有影响,尤其是抗氟性较弱的品种,酶活性下降的幅度较大;但脂肪酶的活性却增大,增幅在品种间有明显差异;氟素添食区的原种或一代杂交种血淋巴中的蛋白质含量明显低于正常蚕。

关键词: 家蚕 氟素, 酶活性, 钙、镁离子

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2005年02月24日

【期刊论文】家蚕幼虫添食蔗粮的效果和机理研究*

吕顺霖, 徐俊良, 臧荣春

蚕业科学,1989,15(1):23~30,-0001,():

摘要

为了研究养蚕时添食蔗粮的效果和机理,采用高效液相色谱分析技术和二硝基水杨酸比色定糖法,测定了桑叶中核糖。水糖、葡萄糖、果糖、蔗糖 麦芽糖、可溶性还原糖和总糖的含量以及蚕体对它们的消化吸收率。亚用桑园搭棚遮萌的方法人为造成日照不足叶,研究了养蚕时在光照叶和遮荫叶上添食蔗糖的效果。结果,在光照叶或遮荫叶上添食蔗糖,对蚕茧种的产质量都没有影响。

关键词: 家蚕 营养添食, 蔗糖, 效果

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2005年02月24日

【期刊论文】家蚕幼虫体内一些组织器官表面结构的电镜观察

吕顺霖, 顾国达

浙江农业大学学报,1996,22(5):508~510,-0001,():

摘要

用扫描电镜观察了家蚕幼虫体内脑、额神经节,咽下神经节、食道、贲门瓣、肌肉,围食膜和马氏管的表面构造。

关键词: 家蚕 幼虫, 组织, 器官, 表面结构

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