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2011年05月11日

【期刊论文】应力松弛接骨板对骨折愈合胶原基因表达及细胞超微结构的影响

张先龙, 戴戎, 汤亭亭

中华骨科杂志,2000,20(6):362~365,-0001,():

摘要

目的 观察采用应力松弛接骨板固定对骨折愈合的影响及机制。方法 对24只新西兰兔两侧胫骨干截骨,分别采用应力松弛接骨板和坚硬接骨板固定,术后2、4及8周采用核酸原位杂交技术和透射电镜观察骨折愈合过程中骨痂胶原mRNA的表达及细胞超微结构变化。结果 骨折后2周,应力松弛接骨板组骨痂内见较多功能活跃的成骨细胞和成软骨细胞,分别表达Ⅰ型和Ⅱ型胶原mRNA;4周时成骨细胞数量明显增加,功能更加活跃,Ⅰ型胶原表达水平也达到高峰。此时活跃的破骨细胞开始出现;8周时仍可见到较多功能活跃的成骨细胞、破骨细胞及Ⅰ型胶原mRNA表达。而坚硬接骨板组2、4周时,成骨细胞数量及功能均不及应力松弛接骨板组;8周时破骨细胞功能活跃,伴有相邻骨细胞骨溶解现象。结论 应力松弛接骨板的应力松弛作用,促进了局部间充质细胞向成骨细胞和成软骨细胞分化,并且高水平表达Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA,有利于骨痂改建的顺利进行。

关键词: 骨折愈合, 基因表达, 成骨细胞

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2011年02月14日

【期刊论文】胰蛋白酶预消化后植块法分离境况人胚成骨细胞***

李玉谷, 马勇江, 窦忠英, 张媛

中国临床康复,2006,70(37):36~38,-0001,():

摘要

目的:改良成骨细胞分离培养方法,为骨形成、骨代谢以及骨组织工程等基础研究提供种子细胞。方法:实验于2002-09/2005-09在陕西省干细胞工程技术研究中心完成。①无菌条件下取五六个月龄流产胎儿颅盖骨(家属知情同意),去除骨膜及周围结缔组织,然后用2.5g/L胰蛋白酶消化20min,终止消化后,去除骨缝组织,剪碎,将碎骨块接种于培养瓶中分离培养成骨细胞。②细胞纯化采用差速贴壁法。通过相差显微镜观察人胚成骨细胞原代和传代培养的生长特征。用碱性磷酸酶染色、钙结节茜素红染色等方法对所获得的成骨细胞进行鉴定。结果:①人胚成骨细胞原代和传代培养的生长特征:原代培养至第5天,骨块边缘出现零散的细胞,这些细胞的形态主要为梭形、三角形或多边形。原代培养第14天后,形成融合层,细胞呈圆形、卵圆形或方形紧密排列,叠层生长。传代细胞主要呈三角形或方形细胞,细胞排列无方向性,出现集落样生长趋势。②人胚成骨细胞的鉴定结果:90%以上分离获得细胞碱性磷酸酶染色和钙结节染色均呈阳性。结论:采用酶消化后植块的改良植块培养法可在较短时间内获得大量成骨细胞,这些细胞具有典型的成骨细胞形态和功能,是一种较好的分离培养人胚成骨细胞的方法。

关键词: 成骨细胞 细胞培养技术, 组织工程

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2009年10月21日

【期刊论文】中药复方补肾活血液对成骨细胞影响的实验研究*

张荣华, 舒晓春

中国病理生理杂志,2003,19(6):769~772,-0001,():

摘要

目的:观察中药复方补肾活血液对体外培养新生sD大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化的影响。方法:采用二次酶消化法从新生SD大鼠颅骨获取成骨细胞进行培养,取第3代成骨细胞为实验模型,将其分为4组,在各组中分别加入双蒸馏水(对照组),低(20 mg/L)、中(4O mg/L)、高(80 mCL)浓度的补肾活血中药提取液。用M'IT法(波长570 nrn处 值表示)测定细胞增殖功能;用对硝基苯基磷酸二钠(PNPP)法测定碱性磷酸酶( )活性;用放免分析方法测定细胞培养液中的骨钙素(BGP)含量;用茜素红染色法,在40倍光镜下作矿化结节计数。结果:中药中、高浓度组的A值在24 h、48 h、72 h时明显高于对照组(P<0.01),且与药物浓度呈剂量依赖性;低浓度组的A值在72 h时点明显高于对照组(P<0.05),在24 h、48 h时点与对照组相比无显著差异(P>0.05)。不同浓度给药组培养48 h、72 h、96 h后,ALP(除低浓度组培养48 h外)、BGP均呈不同程度增加(P<0.01)。在中、高浓度组矿化结节数量/视野,显著多于对照组(P<0.01),低浓度组与对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论:补肾活血液具有促进体外培养的新生SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化作用,这种作用呈剂量相关性。

关键词: 中草药, 大鼠, 细胞培养, 成骨细胞

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2009年10月21日

【期刊论文】益骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞分泌NO、NOS的影响

张荣华, 王廷春, 朱晓峰, 蔡宇, 彭柯萍, 郑仕富

中药材,2004,27(8):593~596,-0001,():

摘要

目的:观察益骨胶囊含药血清对体外培养的大鼠成骨细胞(OB)表达NO、NOS的影响。方法:(1)将40只l2月龄sD大鼠分为益骨胶囊组(高、中、低剂量组)和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清;确定最佳灌胃剂量组和最佳血清添加浓度。(2)分离、培养新生sD大鼠的颅骨成骨细胞,传至第3代后分为2组(含药血清组和空白血清对照组),分别在培养24 K9h、48 h和72 h后用RT-PCR和试剂盒检测0B表达NOSmRNA的量及其活性变化和0B分泌NO的量。结果:益骨胶囊含药血清组在24 h、48 h和72 h时0B表达NOSmRNA的量及其活性和分泌NO的量均明显高于空白血清对照组(P<0.0l或P<0.05)。结论:益骨胶囊含药血清能促进0B NO的分泌和NOS的表达,提示这可能是该方防治骨质疏松的机理之-。

关键词: 益骨胶囊骨质疏松成骨细胞一氧化氮

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2009年10月21日

【期刊论文】骨胶囊对成骨细胞增殖影响的时效及量效关系研究

张荣华, 舒晓春, 彭柯萍, 朱晓峰, 蔡宇

中药材,2003,26(9):644~647,-0001,():

摘要

目的:运用中药血清药理学方法,观察益骨胶囊含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞(OB)体外增殖的影响,并探讨用于OB药效观察的益骨胶囊含药血清制备条件。方法:雌性12月龄SD大鼠80只,随机分为生理盐水组、益骨胶囊低剂量(11.6 g/kg)、中剂量(34.8 g/kg)、高剂量(104.4 g/kg)组,每日灌胃-次,连续12天,分别在灌胃后的0.5 h、th、1.5 h、2h采血,分离血清,用含不同浓度益骨胶囊的血清培养SD新生大鼠颅骨OB,MTI'法检测细胞增殖情况。结果:末次灌胃后1.5-h采血组的吸收度(A)值明显高于各组其它时间(P<0.05);不同剂量各浓度的益骨胶囊含药血清对体外培养的OB增殖均有显著的促进作用,其中以高剂量组的稀释比为25%的血清浓度最佳。结论:益骨胶囊含药血清对OB增殖具有明显的促进作用;益骨胶囊用于OB药效观察的大鼠含药血清制备条件以人等效剂量9倍连续12天灌胃、末次灌胃后1.5 h采血,血清添加浓度以25%为宜。

关键词: 益骨胶囊, 血清药理学, 成骨细胞增殖, 时效, 量效

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2009年10月21日

【期刊论文】益骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞IL-6mRNA其蛋白表达的影响*

张荣华, 彭柯萍, 朱晓, 蔡宇, 黄丰

中国病理生理杂志,2005,21(3):584-587,-0001,():

摘要

目的:从mRNA及蛋白水平探讨益骨胶囊含药血清对成骨细胞表达IL-6的影响。方法:分离、培养新生SD大鼠成骨细胞,传代后分为3组即含药血清组;空白血清组;DMEM组。采用RT-PCR法检测IL-6 mRNA相对表达量。用放射免疫法检测成骨细胞培养上清中的IL-6含量。结果:益骨胶囊含药血清组IL-6 mRNA相对表达量显著低于对照组(P<0.05);益骨胶囊含药血清组IL-6蛋白表达量也低于对照组(P<0.05)。结论:益骨胶囊含药血清能下调成骨细胞IL-6 mRNA表达;亦能在蛋白水平降低成骨细胞分泌骨吸收因子IL-6,这可能是益骨胶囊防治骨质疏松症的机制之-。

关键词: 骨胶囊, 成骨细胞 白细胞介素6, 大鼠

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2009年10月21日

【期刊论文】益骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞IGF-ImRNA及其蛋白表达的影响*

张荣华, 荣华, 朱晓峰, 蔡宇, 黄丰, 彭柯萍

中国病理生理杂志,20O4,20(7):1222-1225,-0001,():

摘要

目的:观察益骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖和胰岛素样生长因子I(IGF-I)mRNA及其蛋白表达的影响。方法:(1)将40只12月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组(高、中、低剂量)和蒸馏水对照组,制备含药血清和对照血清,并确定最佳灌胃剂量和最佳血清添加浓度;(2)分离、培养新生大鼠成骨细胞,传代后分为两组(含药血清组和对照组),分别在培养48、72和96 h时做相关指标的测定,采用M'IT法测定OB增殖,RT-PCR法检测IGF-ImRNA的相对表达量,EHSA法检测培养上清中IGF-I的浓度。结果:在48、72和96 h时,益骨胶囊含药血清组OB增殖明显高于对照组(P<0.01),OB表达IGF-I mRNA和蛋白的量明显高于对照组(P<0.01或P<0.05)。结论:益骨胶囊含药血清具有促进成骨细胞增殖、表达IGF-I mRNA和蛋白的作用,可能是该方防治骨质疏松的机理之-。

关键词: 骨胶囊, 成骨细胞 胰岛素样生长因子I, 大鼠

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2009年05月12日

【期刊论文】血管内皮生长因子(VEGF)基因转染促进成骨细胞成骨活性的实验研究

裴福兴, 钟刚, 李胜富

中华创伤骨科杂志,2004,6(10):1147~1150,-0001,():

摘要

目的 了解外源性血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对成骨细胞成骨活性的影响。方法 利用阳离子脂质体Lipofectamine转染将pBLAST49-mVEGF基因导入体外培养的成骨细胞,与对照组比较,观察外源性VEGF在成骨细胞内的表达,及其对成骨细胞合成分泌骨钙素、Ⅰ型胶原的影响。结果 pBLAST49-mVEGF基因转染组第1~5代细胞合成分泌骨钙素浓度和Ⅰ型胶原的表达均明显高于对照组,二者间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论 pBLAST49-mVEGF基因转染能促进成骨细胞生成骨钙素和合成Ⅰ型胶原的能力。

关键词: 血管内皮生长因子, 基因转染, 成骨细胞 骨钙素, Ⅰ型胶原

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2009年05月11日

【期刊论文】改良法制备富血小板血浆促进体外原代培养成骨细胞增殖的实验研究

巢永烈, 宋扬, 宫苹

中国修复重建外科杂志,2005,19(3):178~182,-0001,():

摘要

目的 探讨富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)来源的富生长因子血清(serum rich in growthfactors,SRGF)对体外原代培养的大鼠和人成骨细胞增殖的影响。方法改良法分别制备大鼠和人SRGF和贫生长因子血清(serum poor in growth factors,SPGF),ELISA法测定人SRGF和sPGF中转化生长因子B1(transforminggrowthfactor B1, TGF B1)和血小板源性生长因子AB(platelet derived growthfactor AB,PDGF AB)浓度;原代培养并传代大鼠和人成骨细胞,取第3代大鼠成骨细胞和第4代人成骨细胞各自分为3组,分别加入5%相应种属的SRGF、SPGF和无血清细胞培养基,24、48、72和96h用MTT法检测成骨细胞的增殖。 结果ELISA法测定人SRGF中TGF岛浓度为307.67±35.57ng/ml,PDGF AB浓度为52.76±7.89ng/ml;大鼠和人成骨细胞在相应种属的SRGF作用下,细胞增殖迅速,细胞数量维持在较高水平,其吸光度P)值在各时间点与sPGF组相应数值比较,发现大鼠成骨细胞在48和96h细胞增殖差异有统计学意义P<0.05),而人成骨细胞增殖差异在48、72和96h均有统计学意义P<0.05);两种成骨细胞在无血清培养基中增殖基本停滞,与同时间点SRGF组比较,差异均有统计学意义P<0.05)。结论 改良法可获得高质量的PRP,PRP来源的SRGF具有促大鼠成骨细胞和人成骨细胞增殖的作用。

关键词: 富血小板血浆 成骨细胞 转化生长因子 血小板源性生长因子

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2006年11月17日

【期刊论文】张应力对骨髓间充质干细胞骨向分化来源成骨细胞ICAM-1基因表达的影响*

赵志河, 江凌勇, 王军Δ, 樊瑜波

四川大学学报(医学报)2006,37(3):438~441,-0001,():

摘要

目的探讨正畸牙移动骨改建过程中成骨细胞调控破骨细胞分化成熟的机制。方法分离培养大鼠股骨骨髓间充质干细胞来源的成骨细胞,采用膜式动态张应力加载体系进行体外细胞加力,RT-PCR技术检测不同强度、不同性质、不同作用时间张应力对成骨细胞ICAM-1mRNA表达的影响。结果张应力刺激对成骨细胞ICAM-1mRNA的表达有明显抑制作用,强度越大抑制作用越强,(依次为静、动态5kPa组,静、动态3kPa组,静态1kPa组,对照组);静态张应力抑制效应明显弱于动态张应力(静态3kPa、5kPa组分别弱于动态3kPa、5kPa组);ICAM-1mRNA的表达在动态张应力作用后3h即显著降低,12h最低(降至未加力时的23%),后有所回升但仍维持在一较低水平,具有时效性。结论机械张应力刺激通过抑制成骨细胞ICAM-1mRNA的表达限制破骨细胞的分化成熟。

关键词: 张应力, 骨髓间质干细胞, 成骨细胞 ICAM-1 RT-PCR

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2006年11月17日

【期刊论文】骨髓间充质干细胞骨向诱导分化过程中破骨细胞分化因子和细胞间粘附分子-1的表达变化

赵志河, 王军, 罗颂椒, 樊瑜波

华西口腔医学杂志,2005,23(6):240~243,-0001,():

摘要

目的观察破骨细胞分化因子(ODF)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在不同分化状态成骨细胞的表达变化,探讨正畸牙移动过程中成骨细胞对破骨细胞分化成熟的诱导机制。方法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,成骨定向诱导后获得不同分化状态的成骨细胞,RT-PCR检测不同分化状态下的成骨细胞ODF和ICAM-1的表达变化。结果成骨细胞在分化成熟过程中,ICAM-1mRNA表达水平逐渐升高;ODFmRNA则在诱导后6d开始表达,并维持在一较稳定的水平。结论不同分化状态的成骨细胞对破骨细胞诱导分化的能力有所差异,相对成熟的成骨细胞的诱导能力可能更强。

关键词: 骨髓间充质干细胞, 成骨细胞 破骨细胞分化因子, 细胞间粘附分子-1

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2006年07月10日

【期刊论文】脱氢表雄酮对鼠成骨细胞及CD4+T细胞协同刺激分子表达的影响

李大金, 王凌, 王玉东, 王文君, 朱影

中华微生物学和免疫学杂民,2006,26(2):110-114,-0001,():

摘要

目的探讨脱氢表雄酮(DHEA)对成骨细胞(oste0blasts,OB)及CD4+T细胞表达协同刺激分子的调控作用。方法颅骨酶解法培养鼠oB,体外模拟雌激素撤退;免疫磁珠细胞分选(rnag-c cell 9ort,MAC. S)法分离CD4+T细胞;将oB或CD4 T细胞分为对照组、E2及DHEA处理组,并以LPS刺激;以流式细胞术分析OB表面CDS0、CD86以及CD4+T细胞表面CD28、CⅡA4的表达。结果经E2及DHEA处理后,OB表达CDS0、CD86显著增加(P<0.05,P<0.01);CsA可降低对照组及DHEA处理组OB CD80、CD86的表达(P<0.01)。除DHEA组CD28 T细胞百分比增加外(P<0.05),其余各组CD4 T细胞CD28和CIIA4的表达无显著改变(P>0.05)。结论DHEA可上调鼠OB协同刺激分子CDS0、O386表达,该作用可被CsA阻滞;DHEA还上调CD4 T细胞cD28的表达,提示可改善骨。免疫调节网络。

关键词: 协同刺激分子, DHEA, 成骨细胞 CD4-T细胞

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2005年03月29日

【期刊论文】Cbfα基因及其调控研究进展*

肖洲生, 周宏灏

中国药理学通报,2001,17(4):365~368,-0001,():

摘要

Cbrαl基因编码一个成骨细胞特异性转录因子,调控成骨细胞发育、分化和骨的形成。Cbrαl基因含9个外显子,但它的多个外显子存在选择性剪接,产生多样Cbrαl的异构体,具有不同的转录激活潜能。多条信号传导通路如RasMAPK、cAMP、Smads DPC4通路等涉及到Cbrαl的活性或表达的调控。这些研究为药物调控成骨细胞分化和骨的形成及基因治疗骨质疏松症开拓新的思路。

关键词: Cbrαl基因, 成骨细胞分化, 信号传导通路, 表达调控

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2005年01月19日

【期刊论文】成骨细胞对周期性拉伸刺激的生理响应和胞内Ca2+浓度变化

蔡绍皙, 唐丽灵, 王远亮, 谷俐, 苏爱华

科学通报,2003,48(2):149~153,-0001,():

摘要

骨组织的生长发育受到力学因素的调控. 对大鼠颅盖骨中分离出的成骨细胞施加周期性拉伸刺激, 结果表明500 微应变的加载明显促进了细胞的增殖, 而1000 和1500 微应变的拉伸抑制了细胞的增殖. 各应变水平的拉伸增加了细胞与基底间的黏附力和细胞的铺展面积. 用荧光探针Fluo-3/AM 测定拉伸对成骨细胞胞内Ca2+浓度的影响, 发现在500 微应变下拉伸5 min 后成骨细胞胞内Ca2+浓度比对照组有明显增加. 用三七总皂苷阻断胞内Ca2+通道后, 成骨细胞对应变的响应仍表现出胞内Ca2+浓度的升高; 但与未加三七总皂苷的加载组相比, 胞内Ca2+浓度响应应变后的升高由原来的92.9%的增加降低到28.6%的增加. 说明在成骨细胞响应周期性拉伸应变的过程中胞内Ca2+ 浓度的升高既有胞外钙内流的参与, 也有胞内钙库的释放作用, 其中胞外钙通过跨膜通道的内流起主要作用.

关键词: 拉伸, 成骨细胞 增殖, 黏附, 胞内钙

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2005年01月19日

【期刊论文】成骨细胞对梯度拉伸应变的响应

蔡绍皙, 唐丽灵, 王远亮, 谷俐, 苏爱华

生物物理学报,2003,19(1):88~91,-0001,():

摘要

采用四点是弯曲加载装置对原代培养的大鼠颅盖骨细胞施加周期性的拉伸刺激,并设计了应变呈梯度增加的加载方式,使成骨细胞受到的拉伸应变为500~1500μδ,每隔2h增加500μδ,以考察成骨细胞对变化的力学环境的响应。结果表明,在500μδ下拉伸2~6h促进了成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活力增强和胞外钙基质沉积。对细胞施加应变呈梯度增加的拉伸刺激,则发现当应变从有利于细胞的生长分化水平(500μδ)变化为不利于细胞生长分化的水平(1000μδ,1500μδ)后,细胞的增殖指数、碱性磷酸酶活力和胞外钙基质分泌量都迅速降低,以适应新的力学环境。说明成骨细胞能够分辨不同的应变水平,并相应地调节自身的生理功能,从而表现出对变化的力学环境的适应。

关键词: 成骨细胞 拉伸应变, 梯度拉伸, 增殖, 分化

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2008年04月24日

【期刊论文】补肾宁心方药物血清对鼠成骨细胞的增殖周期与凋亡的影响

王凌, 王玉东, 李大金, 王文君, 朱影

中华中医药杂志(原中国医药学报)2006年第21卷第1期,-0001,():

摘要

目的:探讨补肾宁心方药物血清对成骨细胞(osteoblast,OB)增殖周期与凋亡的调控作用。方法:颅骨酶解法培养OB,体外模拟雌激素撤退现象,分别予以5%~30%系列浓度的对照鼠血清或中药血清培养,流式细胞仪分析DNA含量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡,透射电镜观察OB超微结构。结果:DNA含量分析显示与相应对照组相比,10%~20%药物血清组的S期和G2/M期细胞百分比明显增加,G0/G1期细胞百分比明显下降,细胞增殖指数(PI)显著增加(分别为P<0.05和P<0.01);10%~20%的药物血清还具有显著的抗凋亡作用(分别为P<0.05和P<0.01);透射电镜可见经20%药物血清诱导后的OB细胞出现典型的细胞器明显增多,内质网扩张,线粒体丰富等形态学改变。结论:补肾宁心方药物血清在体外可有效地促进鼠OB的增殖周期,从而促进OB增殖并抑制其凋亡。

关键词: 细胞周期, 增殖, 凋亡, 补肾宁心方, 成骨细胞

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2008年04月24日

【期刊论文】补肾宁心方对鼠成骨细胞协同刺激分子表达的升调节作用

王凌, 王玉东, 朱晓勇, 李大金, 王文君, 朱影

中国免疫学杂志 2006年第 22卷第6期,-0001,():

摘要

目的:探讨补肾宁心方药物血清对成骨细胞(OB)及CD4+T细胞协同刺激分子表达的调控作用。方法:颅骨酶解法培养OB,体外模拟雌激素撤退;MACS法分离CD4+T;将OB或CD4+T分别予以20%对照鼠血清、E2及20%中药血清培养并以LPS刺激,流式细胞术分析OB表面CD80、CD86以及CD4+T细胞表面CD28、CTLA-4的表达。结果:E2及中药血清组OB表面CD80、CD86的表达显著增加(P<0101);CsA可降低对照鼠血清组及中药血清组OB表面CD80、CD86的表达(P<0.01);各组CD4+T细胞CD28和CTLA-4的表达无显著改变(P>0.05)。结论:补肾宁心方可上调OB协同刺激分子CD80、CD86表达;该作用可被CsA阻滞;而对T细胞CD28/CTLA-4表达无显著影响,其免疫学意义有待进一步研究。

关键词: 协同刺激分子, 补肾宁心方, 成骨细胞 CD4+T细胞

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2008年04月24日

【期刊论文】脱氢表雄酮经不依赖于雌、雄激素受体的MAPK信号途径抑制成骨细胞凋亡

王凌, 李大金, 王文君, 朱影

分子细胞生物学报2006年8月第39卷第4期/Journal of Molecular Cell Biology Vol.39, No.4, August 2006,-0001,():

摘要

脱氢表雄酮(DHEA)已成为防治绝经后骨质疏松症(PMO)的新策略,但其调控成骨细胞(OB)凋亡的具体分子机制和信号转导途径尚不清楚。我们通过颅骨酶解法原代培养OB,体外模拟雌激素撤退现象。10-7mol/LDHEA分别作用0h、24h、48h、72h后,RT-PCR分析OB中ERα、ERβ和AR mRNA表达;原代OB去血清进一步培养24h,细胞以雌激素受体(ER)拮抗剂ICI 182,780(1μmol/L)、雄激素受体(AR)拮抗剂Flutamide(10μmol/L)或U0126(100μmol/L)预处理后给予系列浓度DHEA(10-10-10-5-smol/L)孵育72h,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡;原代OB以1μmol/L ICI 182,780或10μmol/L Flutamide预处理25min后给予不同浓度DHEA孵育10min,Western blotting分析ERK1/2的磷酸化状态。结果表明OBs经10-7 mol/LDHEA体外处理24h、48h、72h后。ERβ和AR mRNA水平升高(分别为P<0.05和P<0.01);而ERα mRNA水平无明显变化10-9-10-6mol/L DHEA可显著抑制血清饥饿诱导的OBs早期凋亡(分别为P<0.05及P<0.01)。该抑制效应可被U0126阻滞,ICI 182,780或Flutamide则不能阻滞DHEA对OB的抗凋亡效应;Western blot也显示ICI 182,780或Flutamide都不能有效地阻滞DHEA对OB中ERKs磷酸化的诱导作用。因此可认为DHEA经ER或AR非依赖途径抑制OB凋亡;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径,磷酸化ERK1/2参与介导这一作用。

关键词: 脱氢表雄酮, 成骨细胞 MAPK信号途径, 雄激素受体, 雌激素受体, 凋亡

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2008年04月24日

【期刊论文】脱氢表雄酮增强去势鼠Th1型偏移及成骨细胞增殖能力

王凌, 王玉东, 李大金, 王文君, 朱影

中国免疫学杂志2007年第23卷第6期,-0001,():

摘要

目的:探讨脱氢表雄酮(DHEA)对去势鼠CD4+T细胞Th1/Th2型细胞因子表达和成骨细胞(OB)增殖的影响。方法:建立小鼠绝经后骨质疏松(PMO)模型,分为OVX组、OVX+DHEA组、OVX+E2组。另设Sham组为假手术对照。取腰椎和股骨行骨组织形态计量分析;流式细胞术(FCM)检测各组鼠脾脏CD4+T细胞内IL-2、IFN-γ(Th1型)和IL-4、IL-10(Th2型)的表达;并取椎骨植块法培养OB,FCM分析增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果:OVX组与Sham组相比,椎骨和股骨骨小梁面积显著下降(P<0.01),说明PMO模型成功建立;与OVX组相比,OVX+DHEA组腰椎、股骨及OVX+E2组腰椎、股骨骨小梁面积都明显增加(P<0.01)。OVX组IL-2及IFN-γ表达显著低于Sham组(P<0.05);而OVX+DHEA组和OVX+E2组显著高于OVX组(分别为P<0.01和P<0.05)。OVX+DHEA组IL-4及IL-10表达显著低于OVX组(P<0.01)。OVX组IFN-γ/IL-4比值明显低于Sham组(P<0.05);OVX+DHEA组和OVX+E2组IFN-γ/IL-4比值均显著高于OVX组(P<0.01)。OVX组OB的PCNA表达与Sham组相比显著增高(P<0.05);与OVX组相比,OVX+DHEA组OB核内PCNA的平均表达强度和阳性细胞百分率皆显著增高(分别为P<0.05和P<0.01)。OVX+DHEA组OBPCNA表达与CD4+T细胞IFN-γ水平呈明显正相关(r=0.931,P<0.05);与IL-4水平呈负相关(r=-0.815,P<0.05)。结论:DHEA可通过细胞免疫调节作用形成Th1型免疫偏移,从而显著改善PMO的免疫状态;并有效促进OB增殖,显著改善骨形态。

关键词: 脱氢表雄酮, CD4+T细胞, Th1/Th2型细胞因子, 成骨细胞 增殖

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2008年04月24日

【期刊论文】脱氢表雄酮对小鼠成骨细胞增殖周期与凋亡的影响

王凌, 李大金, 王文君, 朱影

中华内分泌代谢杂志2006年6月第22卷第3期/Chin J Endocrinol Metab June 2006, Vol.22, No.3,-0001,():

摘要

目的:探讨脱氢表雄酮(DHEA)对小鼠成骨细胞(OB)增殖周期与凋亡的调控作用。方法:颅骨酶解法分离OB和体外培养OB,体外模拟雌激素撤退现象,分为对照组、10-10mol/L E2组、10-7mol/LDHEA组共3组,流式细胞仪分析DNA含量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡,透射电镜观察OB超微结构。结果:DNA含量分析显示,DHEA组的S期和G2/M期细胞百分率比对照组明显增加,细胞增殖指数显著增加(P<0.01);DHEA和E2对OB还具有显著的抗凋亡作用(P<0.01或P<0.05);透射电镜可见经10-7 mol/L DHEA诱导后的OB细胞器明显增多,内质网扩张,线粒体丰富等形态学改变。结论:DHEA在体外可直接促进小鼠OB的增殖并抑制其凋亡。

关键词: 脱氢表雄酮, 成骨细胞 细胞周期, 细胞增殖, 细胞凋亡

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