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2006年11月02日

【期刊论文】RNA干扰技术抑制体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的初步研究

葛坚, 黄圣松, 王莉娜, 尹心宝, 魏雁涛, 马萍

中华眼科杂志,2005,41(12):1076~1081,-0001,():

摘要

目的探讨RNA干扰技术对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法采用化学合成的靶向IKK2β的siRNA,转染体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞,同时以对任何基因均无作用的siRNA作为阴性对照。以逆转录聚合酶链反应(RT2PCR)技术检测IKK2βmRNA表达水平,免疫印迹法检测IKK2β蛋白表达水平。将siRNA的转染浓度分别设为5、10、25、50、100、200nmol/L,进行转染,于转染后48h采用四甲基偶氮唑盐法检测其转染后对成纤维细胞的抑制作用。结果 经转染了靶向IKK2β的siRNA,其成纤维细胞IKK2β的mRNA和蛋白表达水平均受到抑制。各个转染浓度(5、10、25、50、100、200nmol/L)均可抑制成纤维细胞的增殖(P<0.05),抑制率分别为10.72%、23.35%、30.84%、51.25%、50.06%、49.63%,50nmol/L时已达最大抑制率。结论靶向IKK2β的siRNA转染可以降低IKK2β的表达水平,同时对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖具有抑制作用。抗IKK2β的RNA干扰技术可能是抑制抗青光眼术后滤过道瘢痕化的新手段。

关键词: RNA干扰,  蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶,  筋膜,  成纤维细胞,  细胞分裂  青光眼

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2006年01月11日

【期刊论文】人间充质干细胞体外扩增及生物学特征的研究

黄绍良, ZHOU Dun-hua, HUANG Shao-liang, WU Yan-feng, WEI Jing, CHEN Ge-yu, LI Yang, Bao Rong

中华儿科杂志,2003,41(8):607-610,-0001,():

摘要

目的 探讨成人骨髓,胎儿骨髓和人脐血3种不同的人类间充质干细胞(MSC)体外扩增及其生物学特性。方法 观察3种来源的MSC的生长、增殖和表面标志的表达,从面评价MSC的纯化、增殖能力及其免役学特性。结果 (1)3种不同来源的人MSC的细胞形态、集落数、集落大小均无关差异;但成人骨髓MSC在集落形成及集落交错融合时间上均早于胎儿骨髓和脐血MSC;(2)3种来源的人MSC传代培养增殖速度无差异,但脐血和胎儿MSC融合后无接触抑制,而成人骨髓MSC存在接触抑制;(3)来源于骨髓单个核细胞(MSC)8×10 6或脐血MSC25×10 6的MSC,经体外扩增3代5代或10代后,细胞数分别为10 7,10 8和010个;(4)MSC易纯化,P2代细胞均为一性为90%,P3代细胞均一性为95%,P5代细胞均一性达到99%;(5)不同来源的MSC表面重要志:CD29、CD44、CD59、CD90、CD105、CD166表达均为阳性,其造血细胞表面标志:CD11a、CD14、CD33、CD34、CD28、CD45、CD117表达均为阴性,与移植免疫排斥发生密切相关的表面标志:HLA-DR、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)CD40和CK40L均为阴性。3种不同来源的人MSC表面标志,差异无显著性。(6)两种不同培养体系对人MSC的纯化扩增及生物学特性无影响。结论 (1)不同来源的人MSC生物学特性无明显差异;(2)人MSC在体外易扩增纯化,增殖能力强,符合临床组织工程的需要;(3)人MSC不表达造血细胞及其与移植免疫排斥发生密切相关的表面标志,有可以突破HLA屏障,广泛应用于临床。

关键词: 干细胞, 细胞分裂 细胞分化, 免疫表型分型, 组织工程

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2005年05月25日

【期刊论文】两个大豆类受体蛋白激酶基因的克隆及其结构和功能的初步分析

王宁宁, 宋爽, 赵宏巍, 曹俊然, 方琳, 王勇, 朱亮基, 张韧

植物生理与分子生物学学报,2002, 28(3):241-246,-0001,():

摘要

利用高等植物类受体蛋白激酶基因的保守域设计简并引物,通过RT2PCR方法,从大豆叶片中克隆到两个新的、可能的类受体蛋白激酶基因的部分cD2NA片段。对其基因结构的分析表明:在RL PK2的激酶保守域Vib与IX之间有一个407bp长的内含子。利用RT2PCR方法对它们的表达特性进行初步研究,发现这两个基因可能参与了对大豆叶片衰老和/或细胞分裂素延缓衰老过程的调节机制

关键词: 叶片衰老,, 类受体蛋白激酶,, 内含子,, 细胞分裂

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2007年05月08日

【期刊论文】丹酚酸A对培养的大鼠肝星状细胞增殖与胶原生成的作用

刘成海, LIU Cheng-Hai, LIU Ping, HU Yi-Yang, XU Lie-Ming, WANG Zhen-Nan, LIU Cheng

中国药理学报2000Aug, 21 (8): 721-726,-0001,():

摘要

目的:研究丹酚酸A对培养的大鼠肝星状细胞增殖与胶原生成的影响。方法:用链酶蛋白酶与胶原酶对肝脏进行原位灌流消化,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,传一代培养。MTT法与[3H]TdR掺入法测定细胞增殖。丽春红染色、图象分析法半定量细胞胶原沉积量,ELISA法测定细胞培养上清中I型胶原分泌量,检测细胞层总蛋白量校正细胞数。RT-PCR法分析前胶原α2(I)基因的表达。结果:丹酚酸A 100μmol/L引起部分细胞脱壁与死亡,有一定毒性反应。丹酚酸A 0.1-10μmol/L对细胞形态无明显影响。丹酚酸A1-100μmol/L浓度依赖性抑制细胞增殖,降低胶原沉积量与I型胶原分泌量。丹酚酸A1-10μmol/L对前胶原α2(I)mRNA表达均有明显抑制作用。结论:丹酚酸A抑制肝星状细胞增殖与胶原表达,是丹参抗肝纤维化的主要有效成分之一,抑制肝星状细胞活化是其抗肝纤维化的主要作用机制。

关键词: 丹参, 丹酚酸A, 肝硬化, 细胞分裂 胶原, 培养的细胞, 基因表达, 大鼠, 肝星状细胞

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