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2009年03月17日

【期刊论文】丙肝病毒全基因组cDNA克隆侵染细胞培养体系的建立

郑从义, 姚相杰①, 郭佳①, 郑从义①*, 方呈祥①, 屈三甫①, 陈震球②, 李中红②, 李信墙②*, 李卫云②

科学通报,2004,49(10):965~970,-0001,():

摘要

以含有丙肝病毒全基因组 cDNA的重组质粒(pHCV)为材料, 通过基因转染、重组痘病毒辅助使之在HeLa细胞中表达HCV病毒体,建立了一种新的HCV体外细胞培养系统。采用RT-PCR,荧光定量RT-PCR,链特异性RT-PCR,免疫印迹,免疫电子显微镜和电子显微镜负染技术跟踪检测HCV的增殖效率,结果显示,该培养体系中有HCV正链RNA的合成和HCV结构蛋白、非结构蛋白的表达,并组装成直径约47nm的HCV病毒体,病毒体可被偶联有胶体金的抗HCV结构蛋白E2的单抗标记;该体系产生的HCV病毒体滴度达107基因拷贝/mL,远远高于病人血清中的HCV基因拷贝数,也高于迄今报道的任何一种HCV细胞培养体系的病毒滴度,检测结果证明,转染细胞裂解上清中的HCV病毒体可以感染肝癌细胞系Huh7,并在感染细胞中增殖和合成负链RNA中间体,病毒滴度达106基因拷贝/mL。

关键词: 丙型肝炎病毒(, HCV), 全基因组, 侵染性cDNA, 克隆, 重组痘病毒, 细胞培养体系

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