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2011年02月14日

【期刊论文】胚胎干细胞分离培养研究进展

李玉谷, 刘健红, 周俊强

动物医学进展,2007,28(11):95~99,-0001,():

摘要

胚胎干细胞(ESCs)是一种高度未分化,能自我复制、自我更新,在体外连续传代井保持未分化状态和具有发育全能性的细胞。文章从研究概况,体外分离培养、生物学特性、鉴定方法,影响ESCs分离培养的因素、存在问题以及应用前景等方面对胚胎干细胞进行了概速。

关键词: 胚胎干细胞 士物学特性, 分离培养

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2010年12月07日

【期刊论文】猪胚胎干细胞培养和建系的影响因素及对策

余四九, 况玲, 冯书堂, 牟玉莲

中国兽医科技,2004,34(10):76~78,-0001,():

摘要

为解决胚胎干细胞的培养和建系受血清、饲养层、细胞因子、传代时机以及其他一些不明因素影响而很不稳定的问题,在总结猪胚胎干细胞(EG)培养和建系的经验教训的基础上,对一些常规的实验方法进行了改进,提出了消除上述影响因素的对策。

关键词: 胚胎干细胞 饲养层, 传代, 血清, 培养基

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2010年12月07日

【期刊论文】猪胚胎多能性干细胞的分离培养

余四九, 况玲, 冯书堂, 牟玉莲, 张勇

中国兽医科技,2004,34(7):55~59,-0001,():

摘要

收集妊娠26.0~29.0d的猪胚胎,分离培养原始生殖细胞(PGCs),在STO细胞饲养层上生长,形成了多能性干细胞(EG)。发现其具有干细胞的显著特性,并能在体外定向分化为神经细胞、上皮细胞和胚泡细胞。试验使用A、B、c3种不同的培养基培养PGCs,结果在形成EG细胞集落的数量和EG细胞分化上有着明显的差距,说明血清的质量和浓度以及细胞因子对干细胞的生成和增殖有着重要的影响。

关键词: 胚胎干细胞 原始生殖细胞, 胎牛血清, 细胞因子

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2006年11月01日

【期刊论文】C57BL/6J×129/J杂交小鼠ES细胞系的建株

余新炳, ZHANG Jia-qing, YU Wei-hua, ZHANG Xiu-ming, PENG Yan-wen, LI Wei-qiang, CHEN Rui, YU Xin-bing, LI Shu-nong, XIANG Peng△

chinese Journal of Pathophysiology 2006, 22(1): 7-11,-0001,():

摘要

目的:建立C57BL/6J×129/J杂交小鼠ES细胞系。方法:收集3.5d.P.c.的囊胚,培养在预先铺有小鼠成纤维细胞(MEFs)的高糖DMEM培养液中。3-4d后,挑出内细胞团(ICM),消化后重新种到新鲜的有MEFS培养液中。等到有典型的ES样集落长出,即传代以得到永久ES细胞系。通过分析碱性磷酸酶活性,SSEA-1,Oct-4的表达和形成畸胎瘤的能力来鉴定ES细胞的多向分化能力。结果:获得的两个C57BL/6J×129/J杂交小鼠ES细胞系绝大多数细胞具有正常的核型(40,XY),碱性磷酸酶染色阳性,SSEA-l,Oct-4表达阳性,ES细胞注入SCID鼠后可获得来自3个胚层的组织。结论:建立了两株具有长期自我更新能力和多向分化潜能的C57BL/6J×129/J杂交小鼠ES细胞系。

关键词: 小鼠, 胚胎干细胞 杂交

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2006年11月03日

【期刊论文】体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经干细胞的实验研究*

葛坚, 陶靖, 葛坚△, 黄冰, 王智崇, 郭彦, 余克明, 陈慧怡, 陈系古

中国病理生理杂志,2003,19 (3): 289-292,-0001,():

摘要

目的:探讨体外诱导小鼠胚胎干细胞(ESCs)分化为神经干细胞(NSCs)的可能性。方法:ESCs经胚胎体阶段,以视黄酸及视网膜müller细胞诱导,在NSCs选择性培养基中筛选培养扩增7d,观察形态变化,采用RT-PCR法检测nestin、glutaminase、Brn-3基因表达及免疫细胞化学法检测nestin等NSCs特异性标志物,并对其扩增及分化能力进行观察。结果:ESCs经初级诱导,NSCs选择性培养基筛选培养7d后,形成大量神经球样结构,可扩增传代。绝大部分神经球样结构呈nestin抗原阳性,整合BrdU,表达nestin、glutaminase、Brn-3基因,且可分化为神经元及神经胶质样细胞。结论:视黄酸及müller细胞诱导的ESCs,经选择性培养基筛选培养可获得NSCs,有望为青光眼等神经变性疾病提供新的治疗途径。

关键词: 胚胎干细胞 神经再生, 小鼠

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2006年01月11日

【期刊论文】体外定向诱导人胚胎干细胞分化为表皮样干细胞的研究

黄绍良, SA Ya-lian, LI Hai-biao, HUANG Shao-liang

[J SUN Yan-sen Univ (Med sci). 2003, 24 (2): 97-99, 103],-0001,():

摘要

[目的]探索体外定向诱导人胚胎干细胞(hEs细胞)分化为表皮样干细胞的条件。为研究其定向分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础。[方法]将人胚胎干细胞单独(对照组)或与人羊膜上皮面向上全铺或半铺布半孔底共培养4~5d。观察其形态变化井分别用β1整合素,CKl5及CKl9免疫组化检测人胚胎干细胞向表皮样干细胞的分化。[结果]人胚胎干细胞与人羊膜共培养4~5d后,在人羊膜上皮面形成表皮样干细胞集落,表达高水平的表皮干细胞特异标记物β1整合素、CKl5和CKl9。在无羊膜覆盖处。细胞贴壁生长,形成单层表皮样细胞,细胞呈多边形。排列紧密。大部分细胞表达β1整合素。对照组大量细胞死亡,未见β1整合素阳性细胞。[结论]在体外人羊膜可定向诱导人胚胎干细胞分化为表皮样干细胞,并提示在羊膜上皮面的细胞克隆可能是表皮样干细胞,而贴壁生长的细胞可能大部分是表皮样瞬间放大细胞。

关键词: 人, 胚胎干细胞 表皮干细胞, 分化, 羊膜, 免疫组织化学

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2006年01月11日

【期刊论文】 定向诱导小鼠ES细胞为肝脏细胞及其凝血因子Ⅷ, Ⅸ的表达*

黄绍良

中国科学C辑生命科学,2005,35(3):269-274,-0001,():

摘要

凝血因子vⅢIX缺陷导致血友病A和B的发生、肝细胞是产生凝血因子的器官,利用肝细胞进行替代治疗是纠正凝血因子缺陷的根本办法,但是其来源及利用存在难以克服的问题Es细胞具有体外培养时保持未分化状态和无限的增殖能力,具有在一定条件下可以分化发育成各个胚层细胞的潜能,利用Es细胞源性肝细胞作为供体细胞,解决了肝细胞来源困难、增殖能力差的难题体外分阶段定向诱导E14小鼠Es细胞分化为肝细胞,ICG摄取及PAs反应结果证实Es源性细胞具备肝细胞功能,在此基础上,利用RT-PCR法对诱导细胞初步进行了凝血因子VⅢIX表达分析,为进一步开展利用Es细胞纠正凝血因子缺乏奠定了研究基础。

关键词: 胚胎干细胞 分化, 肝细胞, 凝血因子

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2006年01月11日

【期刊论文】体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为造血干/祖细胞方法的初步研究*

黄绍良, HE Zhi-xu, HUANG Shao-liang, ZHOU Qi-feng, LI Shu-nong

中国病理生理杂志,2003,19(4):443-447,-0001,():

摘要

目的:探讨体外定向诱导胚胎干细胞(ESC)发育为造血干细胞(HSC)的方法。方法:将小、鼠E14胚胎干细胞在含于细胞生长因子(SCF)和血管内皮生长因子(VEGF)的甲基纤维素培养基上首先诱导发育为胚胎体(EB),再将EB置于均含SCF、VEGF、IL-3、IL-6及促红细胞生成素(EPO)的3各不同培养体系中定向分化为HSC,并观察HSC表面标志性抗原、造血集落形成及瑞氏-姬姆萨染色的结果。结果:经两阶段诱导ESC分化为HSC,发现在甲基纤维半固体培养体系中HSC发育缓慢,分化14d后CD34+/Sca-1+细胞数量最高为(31.5+-4.7)%;而在骨髓基质细胞饲养层上HSC发育缓慢较快,细胞数量较多,分化第10dCD34+/Sca-1+细胞数即达到峰值,为(47.8+-6.3)%;骨髓基质细胞饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系中HSC发育同样迅速,所产生的CD34+/Sca-1+细胞数量在3个体系中最高,为(53.6+-7.2)%。经瑞氏-姬姆萨染色证实上述细胞为早期造血细胞,均有形成各系造血细胞集落的能力。结论:使用骨髓基质饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系及SCF、VEGF、IL-3、IL-6及EPO等细胞因子,通过阶段诱导分化,可从小鼠ESC获得较高比例的HSC。

关键词: 胚胎干细胞 造血干细胞, 骨髓细胞, 分化, 小鼠

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2005年07月22日

【期刊论文】角膜基质诱导胚胎干细胞定向分化的初步实验研究

王智崇, 陈家祺, 葛坚, 黄冰

,-0001,():

摘要

目的:探索角膜基质接触诱导ES细胞定向分化的可能性。方法:分别在去上皮的新西兰白兔表层角膜缘基质上、晶状体上皮细胞饲养层上培养ES-D3细胞,形成复层细胞后,行活体移植,用扫描电镜和光镜观察。结果:1.ES细胞在新鲜表层角膜缘基质上增殖缓慢,2~3周形成较大细胞集落,光镜下细胞形态单一,体积较正常ES细胞大,电镜下细胞核已演变为细长形,移植到裸鼠皮下2周形成细胞复层,电镜下可见微绒毛,而角膜基质非上皮面的ES细胞仍保持其小细胞状态不变。2.晶状体上皮细胞与ES细胞共培养只能延缓其分化时间,不能诱导其定向分化,复层细胞移植后的棉衣组化显示:AE5阳性表达。结论:表层角膜缘基质具有诱导ES细胞定向分化的潜能,体外培养条件下可能不发生晶状体诱导的第三级胚胎诱导。

关键词: 胚胎干细胞 角膜缘干细胞 胚胎诱导 基质 定向分化

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2012年01月05日

【期刊论文】基于 BAC 同源重组高效构建小鼠胚胎干细胞Nanog 基因报告体系

童攒

,-0001,():

摘要

Nanog是最新发现的一个在胚胎干细胞(ES细胞)中特异表达, 并在保持ES细胞多能性的机制中 有重要作用的转录因子. Nanog基因的表达能非常灵敏地随ES细胞的分化而下调, 使之成为指示ES细 胞多能性最理想的标志基因之一. 本研究基于细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome, BAC)同 源重组技术, 并改进了将报告基因敲入目的位点的重组方案, 高效构建了小鼠 ES 细胞(mES 细胞)的 Nanog/EGFP报告体系. 基因打靶后的mES细胞具有与其源mES细胞相同的特性, 并能稳定地将Nanog 与 EGFP (enhanced green fluorescence protein)的表达偶联. 此报告体系能通过 EGFP 的表达有效报告 Nanog 基因的表达水平, 从而对 mES 细胞分化或未分化状态作出明显指示. 本研究为 mES 细胞自我更 新和分化的研究提供了一个理想的实验体系, 不仅能用于进一步优化 mES 细胞的培养体系, 对研究 Nanog 的表达调控及其与其他维持 mES 细胞多能性的因子和途径之间的关系也有深远的意义.

关键词: 小鼠胚胎干细胞 自我更新 Nanog EGFP 细菌人工染色体 同源重组

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