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2011年05月13日

【期刊论文】PSA启动子介导的TAT-P21WAF1/CIP1融合蛋白在前列腺癌细胞中的特异表达及活性初探*

苑辉卿, 蔡捷, 孔峰, 任凯, 王小玲, 吉恺, 胡晓燕, 张建业

中国病理生理杂志,2008,24(3):498~503,-0001,():

摘要

目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白TAT-p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p2l对前列腺癌的抑制作用。方法:利用PCR技术构建含有PSA启动子、TAT蛋白转导序列和p2l读码框架的真核表达载体pPSA-TAT-p2l,并进行酶切、测序鉴定。脂质体法在前列腺癌LNCaP细胞和大肠癌HT-29细胞中转染上述表达载体及对照质粒后进行反转录pCR(RT-PCR),检测p21的mRNA以及蛋白在不同细胞中的表达情况。MTr法检测转染pPSA-TAT-p2l后LNCaP细胞的增殖情况。结果:成功构建pPSA-TAT-p2l真核表达载体。RT-PCR和Western hotting结果显示PSA-TAT-p2l在前列腺癌细胞中有明显表达,在大肠癌细胞中基本不表达,呈现特异性的表达,而由CMV启动子介导的p2l(pCMV-21)对照组在两个细胞株中均有表达。细胞增殖实验结果显示,含有TAT蛋白转导结构域的PSA-TAT-p21的融合蛋白对前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显高于不含TAT的PSA-p2l蛋白。结论:pPSA-TAT-p21能够在前列腺癌细胞中特异性地高效表达,为前列腺癌基因的靶向治疗提供了实验依据。

关键词: 前列腺特异抗原, FAT-p21WAF1/, CIP1融合蛋白 前列腺肿瘤, LNCaP细胞, HT-29细胞

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2010年12月15日

【期刊论文】沙眼衣原体CT-249 基因编码蛋白为一包涵体膜蛋白

刘殿武, 贾天军, 刘殿武*, 罗建华, 钟光明

微生物学报,2007,47(4):645~658,-0001,():

摘要

使用融合蛋白GST-CT249的抗体对假想蛋白CT249的特性进行研究。使用RCR方法从L2型沙眼衣原体的基因组中扩增编码CT249蛋白的开放读码区基因,限制性内切酶BamHI和NotI消化、T4连接酶连接导入pGEX-6p2载体,进一步把重组质粒pGEX-6p2-CT249转化到XLI-hlue细菌,并诱导表达融合蛋白GSF-CT249。在融合蛋白GST-CT249免疫小鼠制各抗体后,应用直接免疫荧光技术对衣原体感染细胞内的CT249基因表达的内源性蛋白进行初步定位。成功克隆出沙眼衣原体基因CT249,全长为35lbp,并表达了融合蛋白GSF-CT249,分子量为38.2kDa。制各了融合蛋白GSFCT249的抗体并初步定位假想蛋白CT249于沙眼衣原体包涵体膜蛋白上。总之。使用融合蛋白GSF-CT249的抗体,鉴定假想蛋白CT249为一种新的沙眼衣原体包涵体膜蛋白。该发现将为进一步深入研究衣原体与宿主细胞间某些机制提供了有用的途径。

关键词: 沙眼衣原体, 融合蛋白 克隆, 表达, 包涵体膜蛋白

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2010年06月02日

【期刊论文】桑蚕丝素RGD融合蛋白的固态结构及其细胞粘附性分析

顾建民, 姚菊明*, a祝永强b, 李媛a, 励丽a

化学学报,2006,64(12):1273~1278,-0001,():

摘要

利用基因工程方法把含有短肽RGD的氨基酸序列连接到桑蚕丝素蛋白的结晶序列GAGAGS上,通过调节DNA的聚合度,合成了具有[TGRGDSPA(GVPGV)2GG(GAGAGS)3AS]n一级结构、不同分子量大小的桑蚕丝素rRGD融合蛋白,并且通过在M9培养基中添加[3一13C]Ala的方法进行融合蛋白的稳定同位素标记。13c CP/MAS NMR结果显示,融合蛋白中的GAGAGS部分具有与天然桑蚕丝素结晶部分相同的分子结构,即Silk I处理后为均一的分子结构,而SilkⅡ处理后为不均一的分子结构,它包含了三种不同的结构成分。另一方面,通过对小鼠成纤维细胞BALB/3T3在不同蛋白材料载体上的粘附和增殖性能的测定结果显示,融合蛋白对细胞的增殖性能与天然胶原蛋白相近,但表现出了比胶原蛋白更好的细胞粘附性能。该研究结果显示,如果对该桑蚕丝素一:RGD融合蛋白进行适当加工,可能适合于组织工程。

关键词: 桑蚕丝素蛋白:RGD, 融合蛋白 核磁共振, 细胞粘附性

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2009年11月08日

【期刊论文】人Cubilin基因融合蛋白表达及其抗体的制备*

何娅妮, 杨聚荣, 蒋建新, 向德兵, 朱妙珍

JNephrolDialyTransplant,2005,14(2)194~196,-0001,():

摘要

暂无

关键词: hCubilin 融合蛋白表达 融合抗体制备

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2006年07月27日

【期刊论文】免疫PCR技术在肿瘤学中的应用及融合蛋白的基因表达

任军, 樊代明

中国科学基金,1999(6):328-330,-0001,():

摘要

本研究建立了免疫PCR技术。并以此为基础检测了血清中的肿瘤抗厚,肿瘤病人血清检测结果表明免疫PCR技术对肿瘤有较大诊断价值。将构建的单链抗体和链素和素融合蛋白基因pET21-scFvCEA-STA在大肠杆菌HMSl74(DE3)(plysS)中进行表达,免疫组化及蛋白印迹均提示获得了具备结合生物素和抗原分子活性的双特异融合蛋白。

关键词: 融合蛋白 免疫PCR, 基因表达

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2006年10月27日

【期刊论文】人颗粒酶B基因的克隆、蛋白纯化及表达分析

朱振宇, 李秀英, 赖延东, 夏良平, 曾宗渊, 张海涛, 冯哲玲, 李民友

《现代免疫学》,2004,24(6):486~489,-0001,():

摘要

TIL具有抗肿瘤的活性,其中颗粒酶B在杀伤肿瘤细胞的过程中起了最重要的作用。本实验拟扩增GrB全序列,构建GrB的原核表达载体,从而建立其原核表达体系,获得高效表达的重组GrB,纯化蛋白。用淋巴细胞分离液分离肿瘤组织中的淋巴细胞,并抽提RNA,RT2PCR方法获得GrB的全长,并重组到pGEX24T21中,用限制性内切酶酶切和DNA测序法进行鉴定,IPTG诱导pGEX2GrB转化的BL21菌,大量纯化表达产物,并通过SDS2PAGE、Western blot分析表达产物,用MTT法体外检测GrB对Hep2细胞的作用。结果:限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得GrB基因片段,GrB准确克隆入pGEX24T21,成功的构建pGEX2GrB,经诱导表达出与GST融合的蛋白,经凝血酶酶切后获得与GrB相符的条带,并能与GrB特异性抗体结合。体外实验表明,GrB能抑制Hep2细胞的增殖。成功构建了pGEX2GrB,并成功表达、大量纯化GrB蛋白,其能够抑制Hep2细胞的增殖。

关键词: 颗粒酶B, 淋巴细胞, 原核表达, GST融合蛋白

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2005年10月12日

【期刊论文】副粘病毒融合蛋白分子上特异性细胞融合作用位点的初步确定

王志玉

中华微生物学和免疫学杂志,2000,20(4):289~292,-0001,():

摘要

目的 找到副牯病毒融合蛋白(F)分子上与血凝素-神经氪酸酶(HN)相互作用的特异性区域,弄清F融合细胞的分子机理。方法 采用基因定点突变法,创造一个酶切位点,得副突变株,然后用基因重组的方法得到各种重组株。并于真棱细胞内进行表达。Gimsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测表达效率情况。结果 在将各有关F基因片段进行交换之前,创造一个酶切位点时所得突变株的细胞融合功能与野毒株相同;将新城疰病毒(NDV)F和副流感病毒(PIV)F在膜穿人部分和躯干部分交接处交换时。不影响细胞融合功能;进一步将F2进行交换时,也不影响细胞融台功能;而将F的头部进行交换时。则检测不到细胞融合作用,FACS分析表明,F没有达到细胞表面,结论 F分子上与HN相互作用的特异性区域位于膜穿大部分和躯干部分交接处与F1和F2交接处之间,即F1除去膜穿人部分和足部的剩余部分。

关键词: 副牯病毒, 融合蛋白 细胞融台, 基因

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2009年05月31日

【期刊论文】融合蛋白CAC免疫的小鼠血清可抑制β-淀粉样肽的纤维形成

胡海涛, 冯改丰, 靳辉, 王全颖, 杨广笑

中国老年学杂志,2005,10(10):1187-1189,-0001,():

摘要

目的 观察融合蛋白CAC(HBcAg与β-淀粉样肽基因重组的原核表达产物)免疫的小鼠血清对β-淀粉样肽(Aβ)纤维形成的抑制作用。方法 用融合蛋白CAC免疫BALB/C小鼠,通过ELISA方法检测其血清中抗-Aβ抗体的滴度。当滴度大于1:10000时,经小鼠眼球采血分离血清。以不同稀释度的血清与终浓度为0.5mg/ml的Aβ混合,37℃孵育(老化)5d后,透射电镜观察Aβ的聚集和纤维形成。结果 融合蛋白免疫3次后,小鼠血清中抗-Aβ抗体的滴度达到了1:16000。电镜观察可见,加未免疫的对照鼠血清时,经过5d的老化,Aβ聚集成空心管状纤维,纤维密集,呈网状,几乎充斥于整个视野。当加入稀释度为1:2000的高滴度免疫血清时,开始出现明显的抑制作用,随着血清浓度的增加,形成的Aβ纤维逐渐减少;到1:500时,镜下见不到Aβ纤维的存在。结论 CAC免疫的小鼠血清可抑制Aβ的纤维形成。

关键词: β-淀粉样肽(, Aβ), 融合蛋白 血清, 抗体

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2005年03月08日

【期刊论文】旋毛虫Ts87基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化*

诸欣平, 杨静, 诸欣平**, 杨雅平, 詹斌, 冯建军, Hotez Peter

中国人兽共患病杂志,2003,19(3):25~40,-0001,():

摘要

目的 为进一步研究和应用旋毛虫Ts87基因,本文原核表达了PET-28a(+)/Ts87重组质粒,并纯化鉴定了该蛋白。方法 将Ts87基因片段克隆入原核表达载体PET-28a(+),形成重组质粒PET-28a(+)/Ts87,转化后经IPTG诱导得到表达蛋白(约40kDa),利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析纯化目的蛋白,进行复性,并用兔人工感染旋毛虫血清鉴定表达产物。结果 与结论成功构建了PET-28a(+)/Ts87,SDS-PAGE显示融合蛋白主要以包涵体形式存在,经过亲和层析得到纯化的目的蛋白,经鉴定可被人工感染旋毛虫兔血清识别。

关键词: 旋毛虫, 融合蛋白 纯化, 表达, 亲和层析

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2010年02月19日

【期刊论文】白介素13与白喉毒素融合蛋白靶向治疗活性的研究

侯玲玲, 杜娟郑妍鹏孙维敏胡红刚侯玲玲洪涛

医学研究杂志,2008,37(10):31~36,-0001,():

摘要

目的研究白介素13与白喉毒素融合蛋白DT389-gULl3-13E13K对神经胶质瘤的靶向杀伤作用,为神经胶质瘤的无创性治疗和常规化疗的替代或补充治疗提供新的途径。方法通过诱导已构建的融合蛋白表达质粒,原核表达并获得IL-13与白喉毒素融合蛋白DT389-hILl3-13E13K。分别通过两种不同方法提纯后,用体内外实验研究不同浓度融合蛋白对神经胶质瘤的靶向杀伤活性。结果所得融合蛋白浓度纯度均达到95%以上。在体外活性实验中。两种复性纯化方法获得的融合蛋白DTm—hILl3一13E13K对神经胶质瘤均有很好的杀伤效果,半数抑制浓度(Ic50)分别达到6×l0-10moL/L和l×l0-8moL/L,杀伤效果达到了国际水平。体内活性测定结果显示,融合蛋白DT389-hILl3-13E13K对神经胶质瘤有一定的抑制作用,但效果并未达到使肿瘤完全消退的水平。结论得到了在体内外都对神经胶质瘤有抑制杀伤作用的特异的靶向治疗融合蛋白。

关键词: 神经胶质瘤肿瘤治疗 白介素13 白喉毒素融合蛋白

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2008年03月26日

【期刊论文】Ⅱ类囊膜病毒膜融合的分子机制

王晓佳, 汪明

生物化学与生物物理进展Prog. Biochem. Biophys. 2007; 34 (7),-0001,():

摘要

病毒囊膜与宿主细胞膜的膜融合是囊膜病毒入侵的重要过程、病毒囊膜融合糖蛋白的一系列结构变化引发此过程。综述了Ⅱ类囊膜病毒、弹状病毒及疱疹病毒融合蛋白结构与功能研究的最新进展、介绍了软件分析并定位融合蛋白功能区域的方法。Ⅱ类病毒与Ⅰ类病毒融合蛋白的融合前结构不同、但融合后结构(发夹三聚体结构)相似。弹状病毒与疱疹病毒的融合蛋白集合了Ⅰ/Ⅱ类融合蛋白的某些特征、但其结构变化及融合过程各不相同、被归为新型融合蛋白。上述研究为基础设计的以病毒融合过程为靶标的抑制子、可为抗病毒新药的研制提供新思路。

关键词: 囊膜病毒, 融合蛋白 发夹结构, 抗病毒抑制子

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