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2011年06月27日

【期刊论文】高产铁载体荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens sp2f的筛选鉴定及其铁载体特性研究

谢志雄, ZHAO Xiang, CHEN Shaoxing, XIE Zhixiong, SHEN Ping

微生物学报:2006,46 (5):691~695,-0001,():

摘要

采用改进的CAS 检测平板从东湖中筛选得到了一株高产铁载体细菌sp2f,并用CAS检测液定量检测其分泌铁载体量,发现其AsPAr仅0109(OD680),Su(Siderophore Unit)为90%,达到产铁载体菌最高级。用BIOLOG检测板,结合细菌生理生化反应、形态观察和16S rDNA 序列比对分析等分类鉴定方法,确定sp2f为一株荧光假单胞菌。P. fluorescens sp2f生长过程中胞外铁载体的量在对数生长前期累积达到最高后有所减少,至稳定期时菌液中铁载体量达到稳定。在已知铁载体特异吸收峰波长下,用反向高效液相色谱检测无铁环境和高铁环境下培养液上清,比较发现sp2f 上清含有3种含儿茶酚胺类基团铁载体,其中包括荧光和非荧光性的脓菌素,200μmolPL Fe2+可完全抑制荧光性质脓菌素的分泌,但非荧光脓菌素的分泌不受抑制,并且对非脓菌素的儿茶酚胺类铁载体的合成分泌反而具有一定的诱导作用。

关键词: 高产铁载体 荧光假单胞菌, 细菌鉴定, 脓菌素

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2011年02月17日

【期刊论文】柴油机尾气净化装置的微波加热催化再生技术

韩炜, 徐鹏, 龚依民, 许静, 崔海峰, 李刚, 陈岳, 黄光寰, 徐玉书, 王魁香, 吴通好

吉林大学学报(理学版):2004,42(2):311~315,-0001,():

摘要

分析了柴油机微粒过滤器及其再生技术的现状与发展趋势,论述了现有后处理技术的优缺点,着重介绍了微波加热技术与催化再生技术相结合应用到柴油机尾气净化装置的再生技术。台架试验结果表明,使用微波加热技术与催化再生技术与原机相比,柴油机排气微粒下降9812%,为最有发展前景的后处理技术之一。

关键词: 柴油机, 壁流式蜂窝陶瓷载体 微波, 催化剂, 再生

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2011年01月04日

【期刊论文】金属螯合载体定向固定化木瓜蛋白酶的研究

邓乐, 刘琳琳, 曾力希, 刘婷, 邓乐*

生物工程学报:2005,21(5):789~793,-0001,():

摘要

以磁性金属螯合琼脂糖微球为载体,利用金属螯合配体(IDACu2+)与蛋白质表面供电子氨基酸相互作用的原理,定 向固定了木瓜蛋白酶。固定化最适条件为Cu2+1.5×10-2mo/g载体、固定化时间4h、固定化pH7.0、给酶量30mg/g载体。固定化酶的最适反应温度70、最适反应pH8.0,固定化酶的热稳定性明显高于溶液酶,固定化酶活力回收为68.4%,且有较好的操作稳定性,载体重复使用5次后固定化酶酶活为首次固定化酶79.71%。

关键词: 金属整合载体,, 定向固定化,, 固定化酶,, 木瓜蛋白酶

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2010年12月31日

【期刊论文】适用于疫苗株筛选的痘苗病毒载体的构建

饶力群, 周小云, 刘颖, 王芙, 戴凯凡, 段丹丽, 邵一鸣

病毒学报,2004,20(4):315~321,-0001,():

摘要

为构建适用于疫苗株筛选的痘苗病毒载体,利用标记瞬时稳定的原理,在痘苗病毒单选择标记载体psc65 的基础上,构建成带有neo 和L acZ 双选择标记的痘苗病毒载体pVI75。为检验载体pVI75的有效性,将HIV-1合成基因syngpnef 插入到载体pVI75 上,构建成转移质粒pVI75-syngpnef,并与天坛株752-1痘苗病毒共转染CEF细胞。筛选得到的重组病毒经PCR 和Dot blot 检验表明,标记基因已被删除,而目的基因被整合到痘苗病毒基因组上。Westem blot 检测结果表明,目的基因的表达正确。痘苗病毒载体pVI75的构建使得疫苗株筛选的工作量大为降低,时间大大缩短,为利用痘苗病毒载体构建重组病毒疫苗株的研究提供了参考。

关键词: 痘苗病毒, 载体 重组痘苗病毒, 选择标记

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2010年12月07日

【期刊论文】红巴梨f3h基因的克隆及植物表达载体的构建*

吴少华, 张大生, 崔丽洁, 王景明, 吴少华*

南京林业大学学报(自然科学版),2005,29(2):65~68,-0001,():

摘要

以成熟红巴梨果皮的总RNA为模板,根据仁果类果树的f3h基因的保守序列设计引物,利用RT-RCR方法从果皮中克隆出花青素生成相关基因f3h基因的全长cDNA并将该片段连接到pGEM-Teasy载体中,核苷酸序列测定表明,该基因全长1095bp,与苹果的f3h基因同源性高达92%,与矮牵牛相似系数达83%与拟南芥相似系数达到82%。利用EcoRV和BglII对重组质粒进行酶切,回收1095bp条带,并将其连接到pBIl21载体上,通过抗性筛选和PCR检测,证实了f3h基因已经构建到植物表达载体pBIl21上。

关键词: 花青素, f3h基因, 克隆, 载体

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2010年11月29日

【期刊论文】稀疏化递昆Cholesky分解预条件技术加速PO-MoM迭代求解

徐金平, 牛臻弋

应用科学学报,2006,24(5):479~484,-0001,():

摘要

提出了一种新的稀收化递归Cholesky分解预条件技术,并应用于加速物理学和矩量法(PO-MoM)混合方法分析大型复杂载体上线天线的辐射问题,基于积分方程积分核的物理意义,忽略MoM区与PO区的耦合,构造出一个PO-MoM混合方法系数矩阵的稀收近似阵。然后采用Cholesky分解方法将该稀疏阵的逆阵进行递归分解,得到一个矩阵连乘形式的预条件阵。将该预条件阵用于预条件广义最小留数(GMRES)法迭代求解线性方程组,诮用该技术对卫星和舰船两个电大尺寸复杂载体模型上天线辐射问题进行了求解。结果表明,采用这种新的预条件技术可以大加快方程组迭代求解的收敛速度,明显提高计算效率。

关键词: Cholesky 分解, 预条件, 物理光学和矩量法, 线天线, 复杂载体

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2010年11月29日

【期刊论文】求解复杂载体天线辐射问题的近场预条件技术*

徐金平, 牛臻弋

电波科学学报,2006,21(4):541~547,-0001,():

摘要

提出了一种近场预条件技术与LDU分解法相结合的新技术,用于加速矩量法(MoM)分析复杂载体上线天线辐射问题中线性方程组的迭代求解。通过LDU分解可将系数矩阵中表示载体上单元相互作用的具有对角占优特性的子阵分离出来,构造一个矩阵分解形式的预条件阵。结合广义最小留数(GMRES)法,分别对装载在两个简单形体和一架大型飞机模型上的线天线的辐射问题进行了求解。数值结果表明,该方法可大大加快线性方程组迭代求解的收敛速度,提高分析计算效率。

关键词: 预条件器, 矩量法, 快速多极子方法, 线天线, 复杂载体 GMRES

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2010年11月29日

【期刊论文】FAFFA加速的PO-MM研究复杂金属载体上线天线电磁特性

徐金平, 华夷和, 牛臻弋

电子学报,2003,31(12A):2045~2049,-0001,():

摘要

本文提出了一种快速远场近似(FAFFA)加速的混保物理光学业-矩量法(PO-MM),利用FAFFA加速计算矩阵方程中的矩阵矢量积,明显提高了计算效率,对物体表面上的远场组之间的耦合作用推导出一组简洁的计算公式,并分析了计算复杂度。复杂金属组合体上线天线输入导纳、互导纳和方向性图的计算结果与文献结果一致。利用该方法分析计算了一个舰模型上线天线的电磁特性。数值结果表明了这种方法的正确性和工程应用中的有效性。

关键词: 快速远场近似, 混合物理光学-矩量法, 复杂载体 线天线, 电磁特性

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2010年08月31日

【期刊论文】基于疏水化修饰水溶性多糖的纳米粒制备及应用研究进展*

刘晨光, 董学猛, 金晓明, 刘成圣, 陈西广

动能材科,2007,38:1941~1946,-0001,():

摘要

疏水化修饰的水溶性聚合物,尤其是多糖,可以通过分子间和分子内的疏水部分之间得交联形成核一壳结构的自聚集纳米粒。纳米粒的制备方法分为超声法与乳化法两种。这类纳米粒是水凝胶基质含有大量水分,在液相中具有静态和动态的稳定性。相对于表面活性剂形成的胶束,多糖自聚集纳米粒在形成过程中具有很低的临界聚集浓度,其疏水微区由多条聚合物链构成并可形成多核结构。综述了以疏水化多糖为基质纳米粒的制备及应用研究状况。疏水化多糖纳米粒能够广泛的结合疏水性药物,有效的将药物靶向运输到病变组织,并保持较长时间的持续释放,提高了疏水药物的生物利用度;它可以通过疏水作用结合蛋白质,提高其抵御变性的能力并提高其热稳性,还可以像“分子伴侣”一样可以预防蛋白质不可逆的变性聚集:同时它也可以通过离子相互作用与DNA结合,保护其不被机体内的各种酶降解,并能以有活性的形式将其释放出来,提高DNA的转染效率。这些结果显示出这类纳米粒在制药及生物技术领域良好的应用前景。

关键词: 疏水性, 多糖, 纳米粒, 药物运载体

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2010年07月26日

【期刊论文】载鱼精蛋白-pDNA复合物固体脂质纳米粒的初步研究

张娜, 叶杰胜, 马春红, 黄桂华, 栾芳

中国药学杂志,2007,42(21):1644~1648,-0001,():

摘要

目的 制备非病毒基因栽体我鱼精蛋白-pDNA复合物的固体脂质纳米粒(PD-SLN),PD-SLN由多聚阳离子缩合DNA内 核与一个脂质外壳组成,从而构成多功能信封式纳米载体(muldfunclional envelope-type nano device,MEND)结构,研究其特征,对DNA的保护作用以及DNA的体外释放性质。方法 分别采用溶剂扩散法和复乳法制备纳米粒;用透射电镜观察形态;用Zeta电位测定仅测定粒径、多分散指数和Zeta电位;用荧光分光光度法测定基因包封率;分别用琼脂搪凝胶电泳观察复合物及PD-SLN保护pDNA抵抗剧烈外力和核酸酶的降解情况;采用双室扩散法对PD-SLN进行体外释放研究。结果用2种方法制备的SLN呈球形和类球形,平均粒径分别为(231±13.7)和(627±22.9)nm,Zeta电位分别为(-17.8±3.2)和(-25.2±2.7)mV,包封率分别为(41.5±3.62)%和(56.5±5.28)%。pDNA保护性试验表明,PD-SLN时pDNA有保护作用。体外释放妾验结果表明PD-SLN缓释能力强。结论PD-SLN是一种制备工艺简单。体外缓释能力好。对pDNA保护性强。具有一定应用前景的非病毒基因栽体。

关键词: 鱼精蛋白-pDNA复合物, 固体脂质纳米粒, 多功能信封式纳米栽体, 非病毒基因载体

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2006年07月06日

【期刊论文】人胰岛素样生长因子-1真核表达质粒的构建及其在成肌细胞中的表达

陈世益, 张鹏, 陈疾忤, 卫宏图

中国运动医学杂志,2005,24(1):1~13,-0001,():

摘要

目的:构建人胰岛素样生长因子-1(hlGF-1)真核表达质粒DcDNA3,1(一)/hlGF-1并通过转染成肌细胞来验证其生物活性。方法:应用DNA重组方法将编码hlGF-1cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(一)中,构建peDNA31(一)/hlGF-1真核表达质粒;应用阳性脂质体介导的基因转染技术,将真核表达质粒DcDNA3.1(一)/hlGF-1瞬时转染C2C12成肌细胞中;采用RT-PCR及免疫组化染色等方法检测hlGF-1基因在成肌细胞中的表达情况;应用MTT法检测转染后细胞上清液中hlGF-1的生物活性。结果:将构建好的真核表达质粒DeDNA3.1(一)/hlGF一1转染成肌细胞后,hlGF-1mRNA及蛋白表达水平明显增高;转染后的成肌细胞培养上清液具有促使成纤维细胞增殖的生物活性。结论:成功构建了真核表达质粒oeDNA3.1(一)/hlGF-1,其转染成肌细胞后可获得较高水平hlGF-1蛋白的表达,所表达出hlGF-1蛋白具有生物学活性。

关键词: 人胰岛素样生长因子-1, 真核表达载体 成肌细胞

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2009年10月24日

【期刊论文】家蝇抗菌肽Cecropin-His6融合基因的克隆、序列分析及其表达载体构建

朱家勇, 徐建华, 朱家勇*, 金小宝, 许琴英

生物技术,2005,15(1):3~7,-0001,():

摘要

克隆家蝇幼虫抗菌肽Cecropin-His_6融合基因,构建其真核表达载体,为更深入的抗菌肽活性研究及制备新型肽类抗生素创造条件。该文从家蝇幼虫组织中提取总RNA,RT-PCR扩增编码Cecropin开放阅读框cDNA序列,将其克隆至pUCm-T载体进行序列测定;然后用含6×His标签序列的下游引物克隆Cecropin-His_6融合基因,并将其构建于真核表达载体pcDNA3.1(+)中;同时应用生物信息学对融合基因的理化性质和二级结构进行预测分析。结果表明,RT-PCR扩增得到约230bp的目的cDNA片段,与Genebank中报道的家蝇Cecropin cDNA序列存在一个无义变异差异(Lys:AAG→AAA);6×His标签成功融合到Cecrapin的C端。Cecropin-His_6融合基因的克隆和真核表达载体的成功构建,为进一步制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定了基础。

关键词: 家蝇, 抗菌肽, 基因克隆, 生物信息学分析, 真核表达载体

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2009年10月21日

【期刊论文】pET15b-EGFP原核表达载体的构建及其表达和纯化

王一飞, 董晓, 王家宁黄永章郭凌郧

郧阳医学院学报,2005,24(6):321~325,-0001,():

摘要

目的:利用中间载体pGEM-T easy vector构建表达型载体pET15b-EGFP,在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白EGFP并将其纯化。方法:以质粒pLEGFP-C1为模板采用聚合酶链反应(PCR)的方法特异性扩增EGFP cD-NA序列,利用Taq DNA聚合酶的非模板依赖性末端转移酶活性催化PCR扩增的EGFP序列和三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,在EGFP序列两3’端加“ ,将纯化后的EGFP序列与中间载体pGEM-T easy vector连接后转化感受态大肠杆菌DH5ct,经蓝白筛选,挑取白色单菌落进行扩增、酶切鉴定,正确重组的质粒命名为pGEM-T-EGFP用XhoI和BamH1分别双酶切pGEM-T-EGFP和pET15b,低熔点琼脂糖回收EGFP eDNA和线性化的pET15b片段后将两片段相连,转化感受态大肠杆菌DH5ct并对重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序,获取正确重组的表达型质粒并命名为pET15b-EGFP。将正确重组的质粒pET15b-EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基p-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。利用表达蛋白N端的组氨酸“标签”(His-tag)进行N一树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化蛋白质。结杲:经测序证实重组质粒pET15b-EGFP中的EGFP eDNA序列与从Clontech公司购买的质粒pLEGFP-C1中的EGFP eDNA序列完全一致,从而成功构建了表达型重组质粒pET15b-EGFP。pET15b-EGFP转化感受态大肠杆菌BI21(DE )并经诱导后得到高效表达,表达量可达66me,/100ml菌液,SDS-PAGE和Western blotting显示纯化蛋白为目的蛋白EGFP。结论:表达型重组质粒pET15b-EGFP的成功构建和表达、纯化为细胞穿透肽-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。

关键词: TA克隆载体 增强型绿色荧光蛋白(, EGFP), 重组质粒, 蛋白表达, 蛋白纯化

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2009年10月21日

【期刊论文】用载体介导的RNAi技术抑制HCMV的UL49基因表达*

周天鸿, 曾志锋, 李月琴, 唐冬生, 张欣, 王莹, 郭芬, 周天鸿**

中国生物工程杂志,2005,25 (1):39~43,-0001,():

摘要

为了研究RNA干涉抑制HCMV UU9基因的作用,以pIXSN(U6启动子)为模板通过两步PCR的方法扩增含U6启动子的siRNA表达片段,并通过TA克隆将siRNA表达片段克隆到pMD18-T载体构建成siRNA表达质粒,同时以人巨细胞病毒AD169病毒株基因组为模板PCR扩增UIA9基因,将其克隆到pEGFP-N1构建融合质粒pEGFP-UIA9。通过脂质体介导将siRNA表达质粒和pEGFP-UU9质粒共转染人宫颈癌细胞系HeLa,在荧光显微镜下观察RNA干涉结果。通过这种方法得到具有介导RNA干涉的siRNA片段,为UM9基因沉默研究提供技术基础。

关键词: 载体介导 RNA干涉 人巨细胞病毒 UL49基因

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2009年09月13日

【期刊论文】乳酸菌食品级载体选择标记

曹郁生, 徐波, 李海星

《生命的化学》2004,24(5):391~393,-0001,():

摘要

食品级载体不依靠抗生素抗性基因作为选择标记,因而更为安全。近年来,人们已构建了多种乳酸菌的食品级克隆载体。这些食品级克隆载体是在显性选择标记和互补选择标记的基础上建立的。最近提出了第三种新的方法。该文就这三种食品级载体选择标记的功能、分子机制及应用前景作了简明的介绍。

关键词: 食品级载体 选择标记, 乳酸菌

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2009年09月13日

【期刊论文】蜂窝状堇青石载体Al2O3涂层的原位合成

郑起, 华金铭, 蔡英灵, 林性贻, 魏可镁

催化学报,2003,24(7):513~519,-0001,():

摘要

采用改进的原位合成法(原位-浸涂法)在蜂窝状堇青石载体表面制备了多孔氧化铝涂层。着重研究了制备条件对涂层负载、晶相及其孔结构性质的影响,并与其他方法制备的涂层进行了比较。结果表明,采用多次原位合成法制备能提高氧化铝涂层的牢固度,但每次负载量偏低;原位2浸涂法适宜的制备参数为:水解温度83℃,水/异丙醇铝摩尔比60,pH值3.5~4.0,焙烧温度500℃.原位-浸涂法有利于制备Al2O3涂层,具有较好的牢固度,而且涂层的孔径分布窄,具有较大的比表面积、比孔体积和平均孔径。

关键词: 原位合成法, 氧化铝, 涂层, 孔结构, 蜂窝结构, 堇青石, 载体

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2009年08月31日

【期刊论文】含HIV-1Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测

卢春, 黄丽, 曾怡

中华微生物学和免疫学杂志,2003,23(9):691~695,-0001,():

摘要

目的 构建含HIV-1Tat基因重组反转录病毒表达载体及评价表达Tat蛋白的功能。方法 使用HindⅢ将HIV-1Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,插入到表达质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101。采用磷酸钙转染法将重组质粒LZRS-Tat101转染进含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细phoenix(ΦNX)中,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。免疫组化(IHC)染色检查Tat在临时转染和稳定转染ΦNX细胞中的表达水平。收集临时转染和稳定转染包装细胞分泌的病毒上清,并分别感染293细胞,Westernblot检测Tat在293中表达。与此同时,收集感染293细胞培养上清,加入到HL3T1细胞(HeLa-HIV-1-LTR/CAT报告基因)中,共培养72h后收集细胞,提取蛋白作CAT活性检测。结果 ①含Tat101基因重组反转录病毒表达质粒转染包装细胞后,Tat在临时转染ΦNX中表达水平显著高于在稳定转染中的水平;②临时转染病毒感染293细胞,Tat在感染细胞中得到了表达,且分泌至上清中的Tat蛋白能够激活靶细胞HL3T1中HIV-1的LTR启动子,使得其下游的CAT基因得到表达。结论 重组LZRS-Tat101反转录病毒能够在其感染靶细胞中表达Tat蛋白,且表达蛋白具有转录激活功能。

关键词: HIV-1 Tat, 反转录病毒表达载体 转录激活

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2009年08月30日

【期刊论文】用高效廉价载体培养CHO细胞生产rHuEPO的研究

沈树宝, 陈英文, 黄任远, 高坤, 胡云龙

高校化学工程学报,2005,12(19):855~858,-0001,():

摘要

研究了以自制胶原蛋白载体及C-DISK载体培养CHO细胞生产rHuEPO蛋白的过程,并以进口A-DISK载体作为对照培养。对培养过程中细胞贴壁过程、葡萄糖代谢速率、rHuEPO浓度及葡萄糖代谢速率与rHuEPO的浓度变化关系进行了实验研究分析和对比。结果表明:自制胶原蛋白载体培养细胞具有良好的生物代谢活力和蛋白表达能力,葡萄糖代谢速率高达14.2mmol⋅mL−1⋅h−1,比自制CDISK载体高16.4%,比进口ADISK载体高12.7%;在自制胶原蛋白载体上培养CHO细胞时EPO表达量也最高,培养10天后EPO浓度达到282U⋅mL−1,比自制C-DISK载体高30%,也比进口ADISK载体高18%。自制胶原蛋白载体具有较佳的性价比,是一种高效、廉价的动物细胞培养载体。细胞的葡萄糖代谢水平对蛋白表达有着重要的影响,但两者又不同步,因此可用葡萄糖代谢速率变化对该培养过程和目的蛋白表达进行适当监测和调控。

关键词: 细胞培, 载体 CHO 动物细胞, rHuEPO (, 重组人红细胞生长素),

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2009年08月30日

【期刊论文】生物催化剂固定化技术的研究进展

沈树宝, 沈宏宇, 胡永红, 欧阳平凯

化工进展,2003,22(1):18~21,-0001,():

摘要

综述了近年来在生物催化剂固定化技术研究中的一些最新方法,在此基础上提出了新的用于评价固定化技术优劣性的标准,并对所阐述各种固定化方法进行了比较,为研究和发展出更有效、更具有普适性的生物催化剂固定化技术提供必要的参考。

关键词: 固定化, 载体材料, 生物催化剂

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2009年08月30日

【期刊论文】人乳头瘤病毒11型E7蛋白基因重组腺病毒载体的构建及表达

毕志刚, 王飞, 李光富, 吴海玮, 王群, 刘丰, 王新军, 张兆松

中华皮肤科杂志,2005,38(5):276~278,-0001,():

摘要

目的 构建人乳头瘤病毒11型(HPV 11)E7蛋白基因腺病毒载体,并在真核细胞表达。方法 用PCR法,扩增出HPV11 E7基因,定向克隆至pENTR-TOPO载体形成重组质粒TOPO -E7。TOPO-E7与腺病毒载体pAD/CMV/V5-DEST™重组反应,E7基因被重组到腺病毒载体上。该载体经Pacl酶切,脂质体法转染人胚肾293A细胞,获得重组腺病毒载体pAD-E7。pAD-E7转染人HaCaT细胞,激光共聚焦显微镜分析E7蛋白表达情况。结果 经酶切及序列分析鉴定,重组质粒TOPO -E7成功构建。重组子pAD-E7转染293A细胞后,获得滴度为1.4×107 pfu/mL的重组腺病毒载体。该载体转染HaCaT细胞,48 h后激光共聚焦显微镜下可见细胞内E7蛋白表达。结论 重组腺病毒载体能有效介导HPV11 E7基因在真核细胞的表达。

关键词: 尖锐湿疣, 乳头状瘤病毒, 人, 基因病毒, 遗传载体 基因表达

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