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2009年11月03日

【期刊论文】RNA干扰技术对肝癌细胞内源survlvln基因表达的影响*

黄爱龙, 闫歌), 蒲丹), 唐霓), 高小玲), 宋文鑫), 卢年芳), 吴刚), TONG-CHUAN HE)黄爱龙)**

生物化学与生物物理进展,2004,31(9):829~832,-0001,():

摘要

应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对凋亡抑制因子survlvln的siRNA抑制肝癌细胞株内源survlvln基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin至肝癌细胞株SMMC-7721,通过免疫荧光、蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测survlvln蛋白表达及mRNA转录水平的变化。结果表明:构建的三种重组质粒pshRNA-survivinl/2/3均能明显抑制survlvln基因的表达;应用免疫荧光检测survlvln基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin的实验组survlvln荧光强度明显低于转染载体pTZU6+1和pshRNA-GFP对照组;蛋白质印迹结果表明,重组质粒pshRNA-survivin明显抑制survlvln蛋白韵表达,抑制率为62%~78%,通过半定量RT-PCR检测到su rvivln基因mRNA转录明显减少,抑制率为57%~64%。由上述结果可以得出结论:重组质粒pshRNAsurvivlri可明显抑制SMMC-7721细胞内源survivin的表达和mRNA的转录,为survlvln介导的肿瘤基因沉寂疗法提供实验基础。

关键词: RNA干扰,, 肝癌细胞株,, survIvin基因

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2009年11月03日

【期刊论文】肿瘤特异性Survivin启动子与甲胎蛋白启动子的活性评价与比较

黄爱龙, 况舸, 唐霓

中华肝脏病杂志,2005,13(6):440~442,-0001,():

摘要

目的研究并比较肿瘤特异性Survivin和甲胎蛋白(AFP)基因启动子在不同肝细胞癌细胞系中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法采用聚合酶链反应法扩增获得Survivin和AFP基因的启动子片段,并克隆入表达虫荧光素酶基因的报告质粒中,通过测定荧光素酶报告基因的表达情况,测定Survivin与AFP基因启动子的转录活性,同时采用巨细胞病毒启动子为对照,评价其转录活性水平。结果Survivin启动子在肝癌细胞中具有相当强的活性,其活性水平在高表达AFP的肝癌细胞中为AFP启动子的54~100倍,达到巨细胞病毒启动子活性的16%~21%。结论Survivin启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性,可望开发成为新的肝癌靶向性基因治疗工具。

关键词: 癌,, 肝细胞, 启动区(, 遗传学), 基因疗法, Survivin基因

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