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2006年11月02日

【期刊论文】蛋白激酶Cα 在小鼠胚胎干细胞定向分化中对发育基因表达的调控作用

葛坚, 高前应, 王智崇, 陈慧怡, 黄丹平, 袁钊辉

中华眼科杂志,2005,41(2):123~127,-0001,():

摘要

目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对小鼠胚胎干细胞(ESCs)定向诱导分化中发育基因(pax26、slit22、netrin21)表达的影响。方法ES2BALB/c细胞株用无白血病抑制因子(mLIF)的ESCs培养液培养4d,形成胚胎体(EBs),再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100mm的培养皿,经5×10-7mol/L视黄酸(RA)诱导后,用神经细胞特异性抗原NSE和NF2200来鉴定分化细胞的类型,在诱导后1、3、5、7及14d用逆转录聚合酶链反应(RT2PCR)方法测定细胞的PKCα和发育基因的mRNA表达情况,并观察了PKC激活剂佛波酯(PMA)和PKC抑制剂D2鞘氨醇对它们表达的影响。结果 免疫组化发现在诱导后第3d大多数细胞NSE和NF2200染色阳性,RT2PCR证实诱导后1dPKCα、pax26和netrin21的mRNA表达急剧下降,3~7d逐渐升高,至14d恢复至正常水平,而slit22在诱导前后均无明显表达。PMA可使PKCα、pax26、netrin21的mRNA水平在诱导后细胞中的表达明显增强,而D2鞘氨醇的作用相反,使它们的表达显著降低,而对slit22无明显影响。结论发育基因pax26和netrin21在ESCs定向分化为神经样细胞中有重要的调控作用,可能是通过PKCα信号通路起作用。

关键词: 胚胎;  干细胞;  蛋白激酶C;  细胞分化;  基因表达调控, 发育期;  小鼠

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2006年11月02日

【期刊论文】SD 大鼠视网膜神经细胞培养上清液对胚胎干细胞体外分化的诱导作用

葛坚, 杨智宽, 郭彦, 王智崇, 刘海泉

中华眼底病杂志,2002,18(2):134~136,-0001,():

摘要

目的探讨视网膜神经细胞培养的上清液对胚胎干细胞(embryonicstemcells,ES)体外分化的诱导作用。方法收集SD大鼠视网膜神经细胞培养上清液,抽滤后按2:3比例与DMEM培养液混合,用该混合液进行ES细胞的诱导分化,每天倒置相差显微镜观察ES细胞的生长及分化情况,对诱导分化后的细胞进行神经丝蛋白(nellcofilamentprotein,NFP)免疫组织化学检查。结果加入了视网膜神经细胞培养上清液的ES细胞生长出类似神经细胞突起样结构,NFP免疫组织化学染色阳性。结论SD大鼠视网膜神经细胞培养的上清液具有诱导ES细胞向神经细胞分化的作用。

关键词: 胚胎诱导,  细胞分化,  神经元,  干细胞  动物实验替代试验

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