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2010年12月15日

【期刊论文】决策树模型在慢性乙型肝炎临床诊断中的应用

刘殿武, 王剑, 孔繁增

中华流行病杂志,2008,29(3):309~310,-0001,():

摘要

暂无

关键词: 乙型肝炎, 决策树模型, 临床诊断

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2010年12月15日

【期刊论文】树模型在慢性乙肝与肝硬化和肝癌临床诊断中的应用

刘殿武, 王剑, 曹国玉, 李伟勇, 李金奎

第四军医大学学报,2008,29(12):1135~1137,-0001,():

摘要

目的:利用决策树模型挖掘常见的临床检验资料信息,进一步提高慢性乙型肝炎及相关疾病的确诊率。方法:将临床收集的102例慢性乙肝患者和80例肝癌及肝硬化患者常见的17种信息和临床检测结果综合分析,利用决策树卡方自动交互探测(CHAID)和分类与回归树(CRT)两种算法构建预测模型,并采用正确预测率和交互印证对其进行风险评估。结果:进入CHAID和CRT两种算法模型的主要变量是年龄和胆红素指标及职业等,两模型预测慢性乙型和肝炎肝硬化及肝癌的总体准确率分别为71.4%和74.2%。结论:决策树模型在数据挖掘,资料再利用方面效果良好。

关键词: 肝炎,, 乙型 决策树, 诊断

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2010年12月08日

【期刊论文】乙型肝炎病毒聚合酶在重组腺病毒系统中的表达

钟江

,-0001,():

摘要

乙型肝炎是一个世蚧范围的传染病,在我国为害尤其严重。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)作为引起人类急性、慢性肝炎的主要病原体之一,属嗜肝DNA病毒科。虽然其基因组仅有3.2kb,但基复制和致病机理过程复杂,突变众多,目前还没有根治的方法。因此,发展抗乙肝药物的研究显得尤为必要。乙肝病毒聚合酶(HBV polymerase)是病毒复制的关键酶,具有TP(蛋白引物)、间隔区(删除大部分后不影响功能)、RT(逆转录酶)、RnaseH等多个功能区域,是抗乙肝药物作用的理想位点。乙肝聚合酶很难在感染细胞中分离纯化,也一直很难在哺乳动物细胞中大量重组表达,严重阻碍了抗乙肝药物和乙肝疫苗的研究。本研究选取高复制型的临床分离株HBV-56,克隆拼接了全长的多聚酶基因,并将基插入穿梭质粒,通过重组穿梭质粒在细菌细胞内与带有腺病毒基因组的质粒发生同源重组,得到带有HBV多聚酶的重组腺病毒质粒。该质粒线性化后转染人胚肾细胞转化细胞系293,成功地得了重组病毒。用该重组病毒感染293细胞系,SDS-PAGE检测,发现了新的蛋白的合成,该蛋白质的分子量与文献报道的乙肝聚合酶的分子量一致,用PCR的方法,初步证明了所表达的乙肝聚合酶具有逆转录酶的活性,合成了对应于HBV聚合酶基因的DNA分子。这一结果将促进对于抗乙肝药物研究和对乙肝病毒复制机制的认识。

关键词: 乙型肝炎病毒聚合酶, 重组腺病毒, 半定量PCR, 逆转录酶

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2009年11月03日

【期刊论文】RNA干扰介导对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

黄爱龙, 唐霓①, 张秉强①, 闰歌①, 蒲丹①, 高小玲①, Tong-Chuan He②, 黄爱龙①*

科学通报,2004,49(12):1145~1150,-0001,():

摘要

构建针对乙型肝炎病毒(HBV)核心区或表面抗原编码区的siRNA表达载体pSI-C和pSI-S,在体外HBV复制细胞模型中观察对HBV复制和表达的影响。将pSI-C,pSI-S与1.3倍HBV真核表达质粒pHBV共转染HepG2细胞,分别在转染后24,48和72 h,观察pSI-C和pSI-S对细胞上清和胞内病毒抗原表达的影响,并用分子杂交方法从病毒复制、转录和翻译水平检测目的基因的表达情况,实验结果表明,pSI-C及pSI-S能明显抑制细胞内HBsAg和HBcAg的合成,呈序列特异性和剂量依赖性的特点,而对照组siRNA无抑制作用。pSI-C比pSI-S抑制作用更强,转染后第2天对HBsAg和HBeAg押制率达高峰,分别为92%和85%。Southern和Northern杂交结果表明,HBV siRNA能降低目的基因转录和病毒复制中间体的表达水平,提示针对乙型肝炎病毒核心区和表面抗原编码区的siRNA能有效抑制HBVRNA分子转录和病毒复制,最终降低病毒抗原表达,这为运用RNAi技术进行HBV基因治疗提供了新的思路。

关键词: 抗病毒治疗 乙型肝炎病毒 RNA干扰 病毒复制 基因治疗

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2009年11月03日

【期刊论文】应用RNA干扰治疗小鼠急性乙型肝炎病毒感染

黄爱龙, 吴莹, 唐霓, 张秉强, 卢年芳

中华医学杂志,2005,85(9):630~634,-0001,():

摘要

目的建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染的动物模型,在此基础上观察小干扰RNA(siRNA)对HBV复制和表达的影响。方法通过尾静脉注射1.3倍的HBV真核表达质粒pHBVl.3建立小鼠急性乙型肝炎感染模型,再将其与针对乙型肝炎病毒核心区的siRNA表达载体(pSI-C)共注射,于注射后第6天取血测血清HBsAg(ELISA),做肝组织HBcAg免疫组化,通过RT-PCR检测肝组织HBV C区mRNA转录子的水平。同时设立PBS对照组、无关干扰组与突变干扰组。结果转染后第6天血清HBSAg在pHBVl.3感染组中高表达(A值为4.08~9.04,平均值为5.07±1.07,A值≥2.1为阳性),肝内HBcAg阳性率为5%~10%:pSI-C干扰组HBSAg,HBcAg的表达均受到抑制,血清HBsAg阴性,A值为0.04~1.5,平均值为0.62±0.59,与感染组相比有显著性差异(P<0.01),肝内HBcAg几乎无表达,RT-PCR示肝内HBV C mRNA水平明显降低。而无关干扰pGFP及突变的干扰序列pSI-C mut则无此作用。结论RNAi技术能特异,高效地抑制小鼠体内HBV的复制和表达,提示siRNA作为一种新型抗病毒药物的巨大潜能,而通过水动力法建立的小鼠急性乙型肝炎病毒感染的动物模型,一定程度上解决了长期以来缺乏合适的HBV感染动物模型的问题,为今后进行药物筛选及抗病毒治疗的研究拓展了新的思路。

关键词: 肝炎病毒,, 乙型 模型,, 动物, 基因疗法, RNA干扰

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2009年11月01日

【期刊论文】乙型肝炎病毒表面抗原免疫逃逸突变基在人肝癌细胞的表达

任红, T. Harrison A. J. Zuckerman

中华医学杂志,1995,75(7):396~398,-0001,():

摘要

为了进一步研究乙型肝炎病毒(HBV)的s基因变异在免疫逃逸中的作用,我们通过酶消化质粒载体pEcob(含双拷贝HBVDNA),得到约900bp的HBV-s基因片断。将其插入到噬菌载体pBluescriptSK+的 Smal位点上。然后通过体外寡棱苷酸介导的人工定点突变获得一系列(共种)s基 因“免疫逃逸”突变型。再通过 EB病毒真棱表达载体pMEP4将s基因突变型片断定向克隆pMEP4上,从而构建了含HBVs基因突变型的重组质粒pMEP4HBSM。用其转染人肝癌传代细系HepG2,经潮霉素选择,3周后获得抗性细胞克隆经用HBV-s单克隆抗体检测发现除含变异145(gp145位上甘氨酸为精氨酸替代)外,其余变异体HBsAg均为阳性。经 Western blot杂交证实异体145在分子量约为24000处也存有一特异性HBsAg蛋白带。这一表达细胞系的成功建立HBV免疫逃逸的诊断和治疗提供了基础。

关键词: 乙型肝炎 乙型肝炎病毒 基因突变

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2009年11月01日

【期刊论文】重组乙型肝炎表面抗原插入突变体的真核表达及其抗原性的分析

任红, 古柏燕, 张定凤

中华医学杂志,1999,79(2):139~142,-0001,():

摘要

目的研究与乙型肝炎病毒感染的临床进程相关的两种乙型肝炎表面抗原(HBsAg)插入变异体的免疫学性状,以阐明在HBsAg阴性的慢性乙型肝炎病毒感染中所起的作用。方法利用体外PCR诱变方法.构建重组HBsAg的插人突变体;借助EB病毒载体pCEP4和逆转录病毒载体PXT1将重组插入变异S基因转染哺乳动物细胞;利用EHSA及Western blot方法,探讨变异抗原与抗HBs的结合力。结果(1)构建了HBsAg的插A突变体(分别在 HBsAg的第122位与123位氨基酸间插入Arg, Ala和第123位与124位氨基酸问插入Arg,Glv,Ala)的真核表达载体;(2)将其转染哺乳动物细胞,最终建立了能表达野生型和变异型 HBsAg的HepG2细胞系;(3)这些细胞系能在体外稳定地连续传代培养;(4)野生型HBsAg可与抗HBs结合,变异型HBsAg不能与抗HBsAg结合。结论研究表明这两种插人变异体影响了HBsAg的空间结构.从而使其失去与乙型肝炎病毒表面抗体的结合力,因而可能逃避机体的免疫清除而持续存在于体内形成慢性感染。

关键词: 肝炎表面抗原,, 乙型,, 突变,, 插入,, 基因表达

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2009年11月01日

【期刊论文】树突状细胞HBsAg疫苗抗乙型肝炎病毒免疫的体外研究

任红, 李用国, 罗云萍, 兰英华, 梁增伟, 许红梅

中华传染病杂志,2002,20(6):333~336,-0001,():

摘要

目的研究人单核细胞来源的树突状细胞(DC)激活的HBsAg特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对表达HBsAg的HepG2/S靶细胞的杀伤的效应,以探索DC-HBsAg疫苗在抗乙型肝炎病毒(HBV)中的作用方法从健康外间血中分离出单核细胞,在粒细胞巨噬细胞集落刺激因了(GMCSF)和白细胞介素4(11.4)的作用下培养7D诱导出DC,然后以DC为刺激细胞在体外诱导出HBsAg特异性CTL,将携有HBV-S基因的Plxsn/s重组质粒电击导入肝癌细胞系(HepG2),建立表达HBsAg的靶细胞模型HepG2/S;用染色法检测HBsAg特异性CTL寻HepG2/S靶细胞的杀伤效应。结果DC激活的HBsAg特异性CTL对HepG2/S靶细胞具有较强的杀伤效应,不同浓度HBsAg(0μg/L, 50μg/L和100μg/L)诱导的CTL的杀伤率分别为3.8%、69.5%和85.1%,而CTL对HepG2细胞无明显杀伤效应,结论由DC激活HBsAg特异性CTL具有较强的特异性抗HBV作用。

关键词: 树突细胞, 抗病毒免疫, 肝炎病毒, 乙型 肝炎疫苗、乙型

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2009年11月01日

【期刊论文】母婴传播后母子体内乙型肝炎病毒前S/S基因变异研究

任红, 许红梅, 明利, 凌宁, 卿玉玲

中华肝脏病杂志,2003,11(7):398~401,-0001,():

摘要

目的通过经母婴传播获得乙肝炎病毒(HBV)感染的慢性无症状乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)母子体内HBvpreS/S基因序列研究,了解来源相同的HBV在不同程度病毒血症情况下PreS/S基因变异的特点。方法选择15对母孕前为HBV感染、未接种过乙型肝炎疫苗日均未使用过抗HBV药物的Asc母子。应用T-A克隆技术构建重组质粒PGEMPreS/S、双酶切进行鉴定,每个患肯选2个酶切鉴定正确的克隆测序并进行分析。结果选择15对ASC母子,根据HBV病毒血症高低分为3组,每组5对,A组母子均为高病毒血症,B组子女为高病毒血症、母亲为低病毒血症,c组子女为低病毒血症、母亲为高病毒血症。高病毒血症患者均为乙型肝炎e抗原(+),低病毒血症均为抗HBe(+)。母子HBV亚型相同,各组中有4/5对母子为B/adw2、1/5对母子为C/adrq+亚。对每组中B/adw2亚型HBV患者的PreS/S基因进行分析显示:高病毒血症组间或低病毒血症组间HBVPreS/S基因变异数目及位点差异均无显著性,变异与年龄无关,低病毒血症患者变异数目及位点明显高于高病毒血症患者。两个低病毒血症组PreS/S基因绝大多数变异位点相同(113个),其中变异热点85个、可引起37个氨基酸变异,这些变异的氨基酸大多位于免疫表位内或(和)其附近。结论HBV变异可能与感染的时间长短无关;在发生乙型肝炎e抗原血清转换后的低病毒血症患者体内,HBVPreS/S基因出现较多的变异,且有规律,可能与病毒逃避免疫攻击有关。

关键词: 肝炎病毒,, 乙型 变异, PreS/, S, 母婴传播

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2009年10月30日

【期刊论文】HBsAg HBeAg 作用 PBLs 对 TCR Vβ基因表达的影响*

黄树林, 陈红清, 李菁华, 李依娜, 罗利琼

世界华人消化杂志,1999,7(1):25~27,-0001,():

摘要

目的 探讨乙肝病毒(HBV)与肝癌的相关性。方法 取用乙肝疫苗注射3次前后外周血淋巴细胞(PBL):HBV DNA转染的HepG2 2215株培养上清(HBsAg,HBeAg阳性)感染健康人PBL后进行TCR Bβ基因1-20亚家族表达水平的分析。结果 乙肝疫苗注射后及HepG2 2215株培养上清感染健康人PBL后TCR Vβ6、14,Vβ6.15特异性扩增而表达水平显著增高。结论 vβ6可能为识别HBV抗原或引发免疫应苔的基因片段,但Vβ14,15各自在限制和杀伤功能方面起着重要的作用,这从分子水平上又证明了HBV与肝癌的关系。

关键词: 乙型肝炎病毒, 肝肿瘤, 乙型肝炎表面抗原, 乙型肝炎e抗原, TCR Vβ基因, 基因表达

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2009年08月07日

【期刊论文】血清HBsAg阳性IgA肾病肾组织HBV抗原蛋白及血清和肾组织HBV-DNA检测分析

金晓明, 张磊, 贺岩, 迟继铭, 班翔, 黄淇

中华实验和临床病毒学杂志,2006,20(3):247~249,-0001,():

摘要

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染与IgA肾病发病的关系。方法 32例肾活检冰冻切片组织HBsAg和HBcAg蛋白和42例HBsAg阳性的肾活检石蜡切片组织及其部分血清HBV-DNA的检测。结果 HBsAg和HBcAg在IgA肾病肾活检组织的总阳性率为59.1%,在非IgA肾病中的总阳性率为63.6%,二者差异无统计学意义。42例肾活检组织中,仅发现有5例(n.9%)在肾活检组织中有HBV-DNA的存在。且5例均为大三阳患者,其病理诊断为系膜增生性肾小球肾炎2例,轻微肾小球病变l例,基底膜病变l例,IgA肾病仅l例。血清HBsAf;阳性的患者,同时进行了42例肾活检组织的血清HBV-DNA检测,其中大三阳患者为12例,其血清HBV-DNA均为阳性,而这12例血清阳性的肾活检组织中仅有5例HBV-DNA为阳性,其余30例血清及肾活检组织中HBV-DNA为阴性。结论 HBsAg和HBcAg蛋白在IgA肾病肾活检组织和非IgA肾病肾活检组织表达差异无统计学意义,表明HBV感染与IgA骨病并无直接关系。

关键词: 肾小球肾炎, IgA肾病, 肝炎病毒,, 乙型 肝炎表面抗原, 乙型 肝炎核心抗原, 乙型 肾组织穿刺活检

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2009年06月09日

【期刊论文】乙型肝炎病毒感染患者肝移植术后再感染及其机制

赵连三, 方清, 周陶友, 刘隽, 刘丽, 唐红, 卢实春

中华肝脏病杂志,2005,3(3):225-227,-0001,():

摘要

暂无

关键词: 肝移植; 肝炎病毒, 乙型; 单核细胞

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2009年03月30日

【期刊论文】IFN-γ基因对表达DHBVpreS/S蛋白质的DNA疫苗诱生免疫应答的影响

瞿涤, 龙健儿, 黄莉娜, 秦智强, 王文逸

中华微生物学和免疫学杂志,2003,7(7):529-533,-0001,():

摘要

目的 利用DHBV感染鸭模型,研究鸭IFN-γ真核表达质粒作为免疫佐剂对DNA疫苗诱导免疫应答的影响和预防DHBV感染的作用。方法 用DuIFN-γ真核表达质粒与DHBpreS/SDNA疫苗共免疫,或用DHBpreS/SDNA疫苗单独免疫正常幼鸭,检测经免疫前后鸭PBMC表达DuIFN-γ的mRNA水平(半定量竞争性RT-PCR)、诱生的抗体水平(ELISA)、病毒攻击免疫鸭后血清和肝脏中的病毒DNA变化(斑点和Southern印迹核酸杂交)。结果 IFN-γ表达质粒作为免疫佐剂,可以增强DNA疫苗诱导的鸭PBMCIFN-γ的mRNA表达水平。用大剂量病毒攻击免疫鸭的结果显示,用DuIFN-γ表达质粒和DHBpreS/SDNA疫苗共免疫鸭清除DHBV的速度,明显比仅用DHBpreS/SDNA疫苗免疫鸭清除病毒的速度快,肝脏中DHBV总DNA和共价闭环DNA(cccDNA)的量也低于DHBpreS/SDNA单独免疫组。结论 IFN-γ真核表达质粒作为免疫调节佐剂在DNA免疫中具有潜在的应用价值。

关键词: 鸭IFN-γ, 竞争性RT-PCR, 乙型肝炎病毒, DNA免疫

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2009年03月30日

【期刊论文】复方药物ZL-1在鸭乙型肝炎病毒实验感染模型中抗病毒作用的研究

瞿涤, 牛巍, 张继明, 王文逸, 龙健儿, 曾毅, 李泽琳

上海医学,2003(4):234-238,-0001,():

摘要

目的 研究中药复方ZL-1在鸭己型肝炎病毒(DHBV)持续性感染模型中抗嗜肝DNA病毒的作用。方法 应用中药复方ZL-1治疗实验感染鸭,口服给药,剂量500mg•kg-1•d-1,分2次服用,连续4周。采用斑点分子杂交和southem印迹杂交检测治疗后感染鸭血清和肝脏中病毒的动态变化。同时以拉米夫定及安慰剂作为对照组。结果 复方药物ZL-l治疗后血清中DHBvDNA均数从3.6×1010拷贝/ml下降至0.9×1010拷贝/ml(P<001),抑制病毒率为75%,但尚不能清除病毒血症,肝组织中总DHBvDNA和DHmv超螺旋型DNA量无明显减少,停药观察2周,病毒复制反弹不明显。拉米夫定治疗后可显著降低病毒血症(P<0.01),抑制病毒率达99%,同时肝组织中总DHBVDNA和DHBV超螺旋型DNA量减少,但停药观察2周,病毒复制反弹明显。安慰剂组(口服生理盐水)治疗前后病毒水平的差异无显著性(P>0.05)。结论 复方药物ZL-1治疗4周可使感染鸭病毒血症降低。但不能清除病毒血症,肝脏中病毒复制水平也无显著下降。

关键词: 抗病毒治疗, 乙型肝炎病毒感染

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2009年03月18日

【期刊论文】HBVPreS2反义寡核苷酸对HepG2.2.15细胞系HLA-I类抗原表达及生物活性的影响*

马春红, 丁培芳, 孙汶生, 王勤友, 蒋保云, 曹英林

山东大学学报(医学版),2002,40(3):202~204,-0001,():

摘要

目的:观察针对乙型肝炎病毒(HBV)PreS2基因特异性反义寡核苷酸(asON)对转基因细胞HepG2.2.15表面的人类白细胞Ⅰ类抗原(HLA2I)基因表达的影响。方法:设计合成互补于HBV PreS2翻译起始区的反义寡核苷酸即序列Ⅰ,并设非互补序列作对照即序列Ⅱ,免疫细胞化学染色观察asON对HepG2.2.15表面表达的HLA-I类抗原的影响,用ELISA法动态检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg的变化,放射免疫测定法检测asON对宿主细胞自身分泌蛋白2血清铁蛋白的影响。结果:HepG2.2.15细胞表面HLA-I类抗原表达降低,用药组和对照组相比有统计学意义(P<0.05)。asON能够抑制HBV表达HBsAg和HBeAg,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为66%和91%,而序列Ⅱ对HBsAg和HBeAg的抑制率均为11%。asON对宿主细胞自身分泌蛋白无影响,即对宿主细胞无毒性作用。结论:asON以序列特异性方式抑制HBV基因表达而对宿主细胞无毒性作用,HLA-I类抗原表达降低,这对减轻过度炎症反应,阻止慢性肝炎至重症肝炎的发生具有重要意义。

关键词: 寡核苷酸类,, 反义, 肝炎病毒,, 乙型 HLA抗原

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2009年03月18日

【期刊论文】抗HBV最佳反义寡核苷酸片段的体外筛选

马春红, 孙汶生, 刘素侠, 丁培芳, 张利宁, 曹英林, 宋静

中华微生物学和免疫学杂志,2000,20(1):012~014,-0001,():

摘要

目的 寻找抗HBV 最佳反义寡核苷酸区段。方法 合成4种互补于HBV不同区段的反义硫代寡核苷酸(asON),加入HBV基因转染的肝癌细胞模型HepG22.2.15,以ELISA法测定HBsAg、HBeAg含量。结果 互补于pre2S2翻译起始区的asON(序列Ⅰ)抗HBV基因表达作用最强(P<0.02),对HBsAg、HBeAg的最高表达抑制率分别为66%和91%,针对增强子Ⅱ(ENⅡ)的序列Ⅲ也有较强的抑制作用(52%、56%)。asON抗HBV作用具有明显时相性,其抑制作用随时间延长而有反跳,且针对增强子Ⅱ的反义序列Ⅲ和针对S基因起始区的反义序列Ⅱ的抑制作用规律相似,并在时相上与序列Ⅰ互补。结论 4种asON中,序列Ⅰ抗HBV基因表达作用最强,而且序列Ⅰ与Ⅲ或Ⅱ配伍有望成为理想的抗HBV基因药物。

关键词: 乙型肝炎病毒, 反义寡核苷酸, 基因表达

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2009年03月18日

【期刊论文】反义寡核苷酸抗HBV作用的双峰现象

马春红, 孙汶生, 张利宁, 曹英林, 宋静, 刘素侠, 丁培芳

世界华人消化杂志,1999,7(8):708-709,-0001,():

摘要

HBV基因组含3.2kbDNA,有至少4个ORF,其中S区包含S基因,pre-S1基因和pre-S2基因,编码形成大、中、小3种蛋白,构成HBV的包膜蛋白(HBsAg, preS1Ag, preS2Ag)。其中HBsAg在体内引起的免疫病理反应是HBV感染中的重要致病机制,preS2Ag较HBsAg有更强的抗原性,并具有反式激活作用,在HBV感染及肝癌发生中关系密切。因而如何从基因水平抑制HBsAg和preS2Ag的表达,对抗HBV治疗有重要意义。我们设计了针对S基因翻译起始区和preS2基因翻译起始区的反义寡核苷酸(asON)作为基因封条,作用于HepG2.2215细胞,对其抑制作用进行研究,并首次报道了asON抑制作用的双峰现象,为开发新型抗HBV基因药物奠定基础

关键词: 乙型肝炎病毒, 寡核苷酸类,, 反义, 乙型肝炎表面抗原, 乙型肝炎核心抗原

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2009年03月18日

【期刊论文】乙型肝炎病毒对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导凋亡的影响及其机制

马春红, 韩丽辉, 孙汶生, 张利宁, 曹英林, 宋静, 陈有海

中华医学杂志,2002,82(9):795、895、995、006,-0001,():

摘要

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)转染后,细胞对肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的凋亡的敏感度变化及作用机制。通过人肝癌细胞HepG2及转染了HBV全基因组的HepG212115细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感度研究,探讨HBV感染对细胞凋亡的影响及其机制。方法 流式细胞仪检测TRAIL诱导的凋亡反应和细胞表面TRAIL蛋白的表达,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清中分泌型TRAIL蛋白质的表达,半定量逆转录聚合酶链反应检测TRAIL受体和其转导通路中凋亡拮抗分子FLIP的表达。结果 HepG2和HepG212115对TRAIL诱导的凋亡率分别为51.60%和9.12%。与HepG2相比,HepG212115细胞表面TRAIL蛋白质及其受体的表达都有不同程度的下调,而抵抗细胞凋亡的分子—FLIP的表达却显著上调(P<0.01),两细胞系上清中分泌型TRAIL的表达量差异无显著意义(P>0.05)。结论 HBV转染可以抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡,可以下调细胞表面TRAIL蛋白质及其受体的表达,但使FLIP的表达显著上调。这能从一定程度上解释HBV感染逃逸机体免疫监视,持续存活,导致相应病理变化的机制。

关键词: 肝炎病毒,, 乙型 肿瘤坏死因子, 配体, 脱噬作用

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2009年03月18日

【期刊论文】γ干扰素对HBV相关性肝癌细胞凋亡的免疫调节效应研究

马春红, 韩丽辉, 孙汶生, 贾晓青, 高立芬, 刘素侠, 王晓燕

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摘要

目的:以转染HBV全基因组并稳定分泌病毒抗原的HepG2.2.15肝癌细胞系为细胞模型,探索IFNγ对HBV相关性肝癌的免疫调节效应。方法:用HBsAg和HBeAg ELISA检测试剂盒测定IFNγ作用0,6,12,24h后,HBV病毒颗粒的分泌表达水平。通过MTT法检测不同剂量IFNγ对新型凋亡配体TRAIL与TWEAK的生长抑制效应的调节作用,不同剂量IFNγ对TRAIL与TWEAK的凋亡诱导效应的调节作用。结果:IFNγ在不同的时间点对HBsAg和HBeAg的分泌均具有抑制作用,IFNγ能够显著增强TRAIL和TWEAK对HepG2.2.15肝癌细胞系的生长抑制效应和凋亡率。讨论:IFNγ是HBV感染后的一个重要的免疫效应分子,它可以通过抑制病毒复制和增强免疫监视分子的效应而在HBV相关性肝癌中发挥抗病毒和抗肿瘤效应。

关键词: 干扰素γ,, 重组・肝肿瘤・肝炎病毒,, 乙型・配体・细胞凋亡・免疫,, 细胞

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2009年03月18日

【期刊论文】两种端粒酶逆转录酶启动子真核表达载体的构建

马春红, 刘华, 刘素侠, 王晓燕, 高立芬, 韩丽辉, 朱法良, 张艳, 杨咏梅, 吴伟芳

,-0001,():

摘要

目的:构建hTERT启动子和保留HBV同源序列的缺失点变hTERT启动子(pGL3del445)的真核表达载体,为进一步研究HBV与hTERT启动子的关系奠定实验基础。方法:通过双酶切及PCR方法从pCRTRTP载体上将全长及含有HBV同源序列的hTERT启动子的基因序列克隆到pPLbasic多克隆位点上,构建真核表达载体pGL3TRTP与pGL3Bdel445,将该两质粒与pRLtk共转染不同细胞系,评估其端粒酶启动子活性。结果:经测序证明成功构建了全长及含有HBV同源序列的hTERT启动子的真核表达载体pGL3TRTP和pGL3Bdel445,共转染实验中,证实在永生细胞系中重组子高效表达,在非永生正常细胞中重组子不表达。结论:构建的两种重组表达载体具有端粒酶启动子活性,在不同端粒酶表型的细胞系中其表达具有选择性。

关键词: 端粒酶逆转录酶・启动子・基因表达・基因融合・肝炎病毒, 乙型

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