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2011年05月23日

【期刊论文】利用mRNA荧光差异显示技术规模化筛选棉纤维特异表达基因

孙杰, 李园莉, 汪若海, 夏桂先*

生物工程学报,2004,20(1):39~42,-0001,():

摘要

以陆地棉(Gossypium hirsutumL.)品种TM-1开花后9d、21d、27d三个不同发育时期的棉花纤维为材料,利用mRNA荧光差异显示(FDD)技术,筛选到109个差异显示的cDNA片段。在此基础上,结合两轮反Northem杂交筛选和Nonhern杂交分析,获得了多个仅在棉花纤维细胞中特异表达或在纤维中优先表达基因的cDNA片段,序列测定和数据库搜索分析表明,这些cDNA片段中的多数还未有报道。本工作为克隆上述基因的全长cDNA,并进一步研究它们在棉纤维发育中的功能奠定了基础。

关键词: 棉花,, 纤维特异表达基因,, 荧光差异显示

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2011年05月19日

【期刊论文】植物抗虫基因工程研究进展 ¹

侯丙凯, 陈正华

植物学通报,2000,17(5):385~393,-0001,():

摘要

植物抗虫基因工程为防治农业害虫提供了一条崭新途径。本文对植物抗虫基因工程近年来所取得的某些研究进展,包括目前已发现和利用的抗虫基因、提高抗虫基因在植物体内表达的方法以及防止或延缓害虫产生抗性的策略等方面进行了综合评述,并对植物抗虫基因工程中有待解决的问题和发展前景提出了自己的看法。

关键词: 植物,, 抗虫基因,, 基因工程

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2011年04月18日

【期刊论文】反硝化功能基因—— 检测反硝化菌种群结构的分子标记

左剑恶, 梁丽华, *左剑恶

微生物学通报,2009,36(4):627~633,-0001,():

摘要

反硝化菌种类繁多,且分属多个分类学上的不同种属,故不能利用常规的16S rRNA测序方法对其进行研究。利用编码反硝化酶的功能基因作为分子标记,可以有效研究环境样品中反硝化菌的种群结构、数量以及活性等。本文重点介绍了主要的反硝化功能基因以及常用的扩增引物,分析了反硝化功能基因与16S rRNA系统发育之间的关系,比较了nirS和nirK基因菌的群落分布特征,对目前反硝化功能基因的研究和应用现状进行了综述,讨论了研究中发现的新问题,期望为研究复杂微生物的生态特征提供参考。

关键词: 反硝化菌,, 功能基因,, 种群结构

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2011年03月18日

【期刊论文】对硝基苯酚降解菌P3的分离、降解特性及基因工程菌的构建*

崔中利, 张瑞福, 何健, 李顺鹏**

策生物学报,2002,42(1):19~26,-0001,():

摘要

分离到一株假单胞菌(Pseudomonassp.)P3,该菌能够以对硝基苯酚为唯一碳源和氮源进行生长。在有外加氮源的条件下,P3降解对硝基苯酚并在培养液中积累亚硝酸根。P3有比较广泛的底物适应性,对多种芳香族化合物都有降解能力。不同金属离子对P3降解对硝基苯酚有不同的作用。葡萄糖的存在对P3降解对硝基苯酚无明显促进作用,而微量酵母粉可以大大促进P3对硝基苯酚的降解。以P3为受体菌,通过接合转移的手段将甲基对硫磷水解酶基因mpd克隆至P3菌中,获得了表达甲基对硫磷水解酶活性的基因工程菌PM,PM能够以甲基对硫磷为唯一碳源进行生长。工程菌PM具有较高的甲基对硫磷降解活性及稳定性。

关键词: 对硝基苯酚,, 生物降解,, mpd 基因,, 基因工程菌

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2010年11月30日

【期刊论文】广西12株狂犬病野毒株的g基因序列测定与分析*

罗廷荣, 熊毅, 罗廷荣**, 刘棋, 李华明, 南松剑, 郭建钢, 邓朝阳, 兰斌

中国病毒学,2006,21(2):131~135,-0001,():

摘要

对广西12株狂犬病病毒株g基因全序列进行测序分析,结果显示:广西毒株属于I型,可分为3个群,即Ⅰ群、Ⅱ群和Ⅲ群。GX01、GX08、GX09、GX014、GX091、GX195、GX260、GXLA8株为Ⅰ群,GX219、GX074、GXBM3株为Ⅱ群,GXN119株为Ⅲ群。Ⅰ群的广西毒株g基因核苷酸的同源性为97.6%~99.9%,氨基酸同源性在97.7%~100%之间;Ⅱ群的核苷酸的同源性为98.2%~99.0%,氨基酸的同源性在98.5%~99.2%之间。糖蛋白在主要的抗原位点GI、GⅡ区以及与中和抗原有关的36、263、367位氨基酸没有变异,GⅢ区上只有Ⅱ群在332位缬氨酸变异为异亮氨酸,G蛋白上的氨基酸主要在-2、-5、-13、-14、-15、-16、90、96、132、140、156、168、170、204、241、249、253、264、289、332、382、427、436、445、463、474位共26个氨基酸发生了变异,这些氨基酸的变异具有群的特异性。

关键词: 狂犬病病毒,, 糖蛋白基因,, 测序

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2009年11月09日

【期刊论文】甜瓜抗病基因的研究进展及其应用前景

李冠, 赵惠新, 李冠*, 李金玉, 蔡建辉

分子植物育种,2005,2(3):249~254,-0001,():

摘要

甜瓜是世界各地都广泛栽培的重要经济作物,其营养丰富味道美好而备受人们的喜爱。随着甜瓜种质资源商品化,甜瓜病虫害扩散蔓延迅速,已成为影响甜瓜产量和品质的主要因素。本文概述了对甜瓜生产和品质危害较严重的主要病虫害的发病特征、蔓延情况及相应抗性基因的研究进展,目前已有50个甜瓜抗病基因被认知。另外对与抗病性状相关基因的定位、分子标记、分离克隆、甜瓜基因遗传图谱等研究现状进行了总结分析,综合阐述了甜瓜抗病基因在实践中的使用价值和应用前景:利用甜瓜抗病基因的分子标记进行甜瓜抗病育种辅助选择,将抗病基因转化感病品种进行抗病分子育种。

关键词: 甜瓜,, 病虫害,, 抗病基因,, 应用前景

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2009年10月30日

【期刊论文】T细胞受体Vβ基因在识别HSV-2过程中的表达水平和特点

黄树林, 张萃, 陈耕夫, 杨红

中华微生物学和疫学杂志,1997,17(3):168~171,-0001,():

摘要

本课题主要研究T细胞受体(TCR)识别抗原后Vβ基因发生重排,mRNA表达水平改变。用紫外线处理的单纯疱疹病毒-2型(Hsv-2)、HSV-2及PHA分到感染或刺激正常人的PBLs,培养4~6天后,提取mRNA。并采用RT-PCR、Southern杂交发现识别HSV-2的TCR vβ2、6、7、8基目在体外选择性扩增。在采用HSV-2攻击皮肤病患者发作期、缓解期以及再发作期的PBLs时。发现TCR Vβ基目表达随著病程变化而改变,尤其Vβ7亚家族表达水平显著高于其它亚家族基因。这显示了TCR Vβ基因的变化是恒定特异性的。

关键词: 基因表达 单纯疱疹病毒 基因,, 病毒 T淋巴细胞

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2009年10月21日

【期刊论文】对HCMV UL54 mRNA片段特异性切割的MIGS构建建*

周天鸿, 吕静竹, 李弘剑, 陈浩军, 李月琴, 周天鸿**

微生物学通报,2005,32 (2): 83~86,-0001,():

摘要

人巨细胞病毒是一种DNA病毒,在人群中一般呈亚临床感染和潜伏感染。为研究病毒基因沉默工具和抗病毒制剂,以人巨细胞病毒UL54基因mRNA序列设计互补的外部引导序列,共价结合到大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA上,从而构建成MIGS-T6核酶。通过对DNA聚合酶UL54基因亚克隆片段转录产物体外切割研究,证实该核酶具备对UL54 mRNA片段的特异切割能力。

关键词: 人巨细胞病毒,, Ul54基因,, RNase P,, 外部引导序列

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2009年10月21日

【期刊论文】抑癌基因PTEN在喉鳞状细胞癌和转移淋巴结中的表达

王继群, 何龙, 山艳春, 王丽华

中国耳鼻咽喉头颈外科,2005,12(4):235~238,-0001,():

摘要

目的 研究抑癌基因(phosphatase and tensin homology deleted on ch romosome ten,PTEN)在喉鳞状细胞癌、癌旁安全缘、声带息肉、转移淋巴结和无转移淋巴结中的表达,探讨其在喉鳞状细胞癌发生、发展和转移中的作用和意义,探讨喉鳞状细胞癌和转移淋巴结在分子水平的差异。方法 采用免疫组织化学SP法检测了57例喉鳞状细胞癌患者的病理标本,随机抽取的27例癌旁安全切缘、22例声带息肉与57例标本中18例淋巴结转移阳性的喉状细胞鳞癌、转移淋巴结、无转移淋巴结中PTEN 的表达进行检测和统计分析。结果 PTEN在喉鳞状细胞癌、癌旁安全缘和声带息肉中的阳性率分别为89.5%(51/57)、88.9%(24/27)和95.5%(21/22),三者之间无显著性差异(P>0.05),但喉鳞状细胞癌、癌旁安全缘中PTEN的阳性表达程度较声带息肉中为低,有显著性差异(P<0.01);PTEN的阳性表达在不同性别、年龄、发病部位、分化、T分期、临床分期、淋巴结转移组间未见显著性差异(P>0.05)。无转移淋巴结中均未见PTEN的表达,18例转移淋巴结阳性患者喉鳞状细胞癌和转移淋巴结中PTEN的阳性率均为94.4% (17/18),但转移淋巴结中PTEN的表达强度较喉鳞状细胞癌高,差异有显著性(P<0.05)。 结论 在喉鳞状细胞癌发生的过程中,PTE N可能发生部分变异,属喉鳞状细胞癌癌变的早期分子事件,但与喉鳞状细胞癌的进展无关。喉鳞状细胞癌与转移淋巴结在分子水平存在差异。

关键词: 喉肿瘤, 癌,, 鳞状细胞, 淋巴转移, 基因,, 肿瘤抑制, 免疫组织化学

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2009年07月14日

【期刊论文】抗膀胱癌J82及丝裂霉素C单链抗体基因的研究

朱理玮, 梁晓宇, 王炜, 何强, 何向辉, 邱宇杰, 王鹏志

中华实验外科杂志,2001,18(4):361~363,-0001,():

摘要

目的 研制单链抗体,以减少鼠源抗体的异源性,为寻找合理的导向治疗方案提供工具。方法 将经抗原刺激的BALB/C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤,用多聚酶链反应(PCR)方法克隆其抗体可变区基因,并用重叠延伸拼接法(SOE)构建相应的单链可变区抗体片段(SeFv)基因。结果 获得杂交瘤细胞株D10及1C8,酶联免疫吸附法及免疫组织化学法证实所分泌的抗体可分别与人膀胱癌细胞及丝裂霉素C特异性结合。获得两种抗体的可变区基因(320bp及340bp片段)及SeFv基因(75Obp片段)。结论 应用PCR-SOE方法可快速便捷地获得目的抗体的SeFv基因,为进一步研制双特异性SeFv提供了实验基础。

关键词: 单克隆抗体, 基因,, 合成, 丝裂霉素类

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2009年04月06日

【期刊论文】对一个新的耳聋候选基因-TECTB的初步研究

冯永, 贺定华, 夏昆, 李崎, 贺楚峰

中国耳算咽喉颅底外科杂志,2003,9(6):338~340,-0001,():

摘要

目的 通过对作为β-tectorin编码的基因TECTB进行结构分析并探讨它与耳聋发生的关系,以鉴定其是否为新的耳聋基因。方法 27个语前聋家系病人用直接测序的方法进行突变检测;40个语后聋家系则用PCR-SSCP进行突变检测,对发现异常构象带者进一步行TECTB基因的DNA测序。结果 27个语前聋家系病人发现三种核酸改变,但通过对这种改变的家系进一步检测时证实这些改变均未与耳聋共分离,为正常多态。40个语后聋家系先证者用SSCP进行突变检测,未发现致病突变。结论 本研究的结果虽未能最终证明TECTB为耳聋的致病基因,但从该基因背景来分析它仍是很好的耳聋候选基因,有待进一步研究。

关键词: 聋/, 遗传学, 基因,, tectb, 多态

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2011年05月03日

【期刊论文】食管癌细胞NGAL基因-152~-60区段存在TPA反应元件

许丽艳, ), 李恩民)**, 牛永东), 蔡唯佳), 袁华敏), 常静霞), 沈忠英), 曾毅)

生物化学与生物物理进展,2006,33(2):140~148,-0001,():

摘要

以往研究发现。在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatnase-associate lipocaIin,NGAK)基因过表达,但过表达机制不明。最近研究提示,食管癌细胞,NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件。为了对NGAL的这-TPA反应元件进行更准确定位,采用PcR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆NGAL5’侧翼区-152~+84、-140~+84、-78~+84、-59~+84、-50~+84、-41~+84、-37~+84、-29~+84和-10~+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、paLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体。将上述报告基因表达载体分别同pRL一_rK共转染食管癌细胞Ecl09,并用TpA刺激,检测TPA刺激转染ECl09的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152~+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动f区的TPA反应兀件给进一步分段定位。结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152~-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强。生物信息学分析结果显示,NGAL工启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永牛化食管上皮细胞癌变中NGAL三过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用。

关键词: 中件粒细胞明胶酶相关载脂蛋白基因,, 食管癌细胞,, 基因表达调控,, TPA反应元件

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2011年05月03日

【期刊论文】 反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架影响*

许丽艳, 林珏龙), 许丽艳), 李思民)**, 蔡唯佳, 牛永东), 方昆阳), 熊华淇), 沈忠英), 曾毅)

生物化学与生物物理进展,2004,31(5):409~415,-0001,():

摘要

为了研究反义封闭NGAI。基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响。以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞,通过C418筛选,建立一系列旨在封lⅥSHEEC食管癌细胞NGAL基因表达的亚细胞克隆在细胞内F一肌动蛋白(F-aetin)及DNA荧光双标记基础上,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜扫描术等技术手段检测封闭反义NGAI。基因表达后,SHEEC食管癌细胞中F-actin和DNA含量、F-actin形态结构以及肿瘤细胞生物学行为的变化特征结果显示。反义封l羽NGAL基冈表达后,SHEEC食管癌细胞F-aetin的古量明显降低,与永生化食管卜皮细胞SHEE相近,但细胞分裂增殖指数未见明显变化表明反义封}jj NGAL基因表达对SFIEEC食管癌细胞的微丝骨架有明显影响。而对SHEEC食管癌细胞的分裂增殖影响不明显激光共聚焦显微镜扫描观测显示。反义封闭NGAL基因表达可使SHEEC食管癌细胞F-actin分布均匀,F-aetin小体减少,细胞间连接重新建立。结构较紧密。主要形态结构特征与SHEE细胞趋于致提示反义封闭NGAL基因表达可对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架F-actin产生明显影响,推测癌细胞的微丝骨架F-actin可能是NGAL基因在SHEEC食管癌细胞中发挥功能的种作用环节。

关键词: 微丝骨架,, F-肌动蛋白,, NGAI,, 基因,, SHEEC细胞.细胞周期

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2011年05月03日

【期刊论文】NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中过表达的研究*

许丽艳, 许丽艳)**, 李思民), 熊华淇), 蔡唯佳), 沈忠英)

生物化学与生物物理进展,2001,28(6):839~843,-0001,():

摘要

为研究NGAL (neutrophil gelatinase associated lipocalin)基因在永远生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况,以永生化食管上皮细胞系SHEE食管癌细胞系SHEEC互为对照,用cDNA微列阵进行筛选,用RNA印迹和RT-PCR进行鉴定,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较,结果表明 NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达,其cDNA序列与小鼠24p3、大鼠NRL(neu-related lipcalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性,这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用,可能是一种新癌基因或促癌基因。

关键词: NGAL,, cDNA微列阵,, 差异表达基因,, 食管癌

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2011年05月03日

【期刊论文】一氧化氮诱导食管癌细胞线粒体DNA编码基因过表达*

许丽艳, 李恩民)**, 许丽艳), 杨帆), 袁兰), 陈跃)

生物化学与生物物理进展,2002,29(3):378~384,-0001,():

摘要

以人食管癌细胞系EC109作为驱赶方(driver),以被一氧化氮(nitric oxid, NO)诱导的ECl09作为实验方(tester),应用抑制消减杂交(suppression subractive hybridization, SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的食管癌细胞中基因的过表达情况然后对过表达基因的表达序列标签(expressed seqnencetag,EST)实施序列测定,并与GenBank进行BLAST同源性比较和序列突变分析结果先后两次从69个SSH阳性克隆中共鉴定出6个线粒体DNA(milochondrial DNA,mtDNA)编码的基因,即ND 4L、ND 4、COX-2、Lys-tRNA、ATP -8和ATP-6表明NO可以诱导食管癌细胞mtDNA编码的基因过表达另外,在ND-4L/ND-4基因的片段(10736~11449)上发现了三处同型单核苷酸置换(10872→C,11001A →G,11346A→G),在COX-2/Lys-Trna/ATP-8/ATP-6基因片段(8011~8 589)上发现了一处单核苷酸缺失(8380A)氨基酸序列分析表明,在NO诱导的EC109中可能存在着一种结构异常的ATP-8肽链(一条在N端被截短的只有11个氨基酸残基的肽链,而正常的ATP-8肽链为68个氨基酸残基)这些研究结果为深入揭示NO对肿瘤细胞的作用机制提供了新的重要线索。

关键词: 食管癌,, 一氧化氮,, 线粒体DNA编码基因,, 基因过表达,, 抑制消减杂交

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2006年11月29日

【期刊论文】结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性四种测定方法的比较

胡忠义, 崔振玲, 王洁, 张莹蓉, 陈慧萍, 翁心华

中华结核和呼吸杂志,2005,28(4):245~249,-0001,():

摘要

目的探讨噬菌体生物扩增(PhaB)、Baetee-960、最低抑菌浓度(MIC)和基因芯片方法在结核分枝杆菌(MTB)异烟肼(INH)耐药性测定中的应用价值。方法应用4种方法检测167株MTB临床分离株INH耐药性,并比较测定结果的敏感性、特异性和准确性。结果Baetee-960检测敏感株111株,耐药株56株。若以Baetee-960测定结果为判断标准,则PhaB的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为964%、964%、93l%、982%和964%;MIC的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为929%、991%、98l%、965%和970%;基因芯片的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为839%、964%、922%、922%和922%。若以MIC测定耐药性结果为判断标准,则PhaB检测INH耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为100%、956%、914%、100%和970%;Baetee一960的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为98l%、965%、929%、991%和970%;基因芯片的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为887%、965%、922%、948%和940%。结论PhaB检测INH耐药性具有很高的敏感性和特异陆,与Bactec-960及MIC的符合率很高,只需3d时间,且操作简便、不需特殊仪器设备,可作为MTB的INH耐药性快速筛选方法。MIC测定INH耐药陆结果与Bactec-960符合率较高,是否用于INH耐药性测定的判断标准有待进一步研究。基因芯片检测INH耐药性敏感性偏低,只能作为参考方法。

关键词: 分枝杆菌,, 结核, 抗药性,, 微生物, 分枝杆菌噬菌体, 异烟肼, 基因,, 细菌

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2006年10月27日

【期刊论文】反义核酸抑制B16黑色素瘤细胞tyr基因的表达*

朱振宇, 吉琼梅, 朱振宇△, 王晓华, 张东方, 张海涛, 李秀英, 马涧泉

中国病理生理杂志,2005,21(7):1321~1325,-0001,():

摘要

目的:用反义核酸技术抑制小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因(tyr)的表达。方法:构建tyr反义重组体pcDNA311(-)-tyr,用脂质体法导入B16细胞,用酪氨酸酶活性及黑色素含量测定,多巴染色及透射电镜等检测由反义重组体pcDNA311(-)-tyr转录产生的tyr反义核酸对B16细胞tyr表达的抑制情况。结果:成功构建了反义重组体pcDNA311(-)-tyr,转染了反义重组体的B16细胞其酪氨酸酶活性为0.0498±0.0036,显著低于对未转染组B16细胞的0.0916±0.0132(P<0.01);转染空质粒pcDNA311(-)及真核表达重组体pcDNA311(+)-tyr组B16细胞的氨酸酶活性分别为0.1015±0.0166 和0.0948±0.0096,两者同对照组相比均无显著差异(P>0.05)。多巴染色及电镜观察结果表明转染了反义重组体的B16细胞其黑色素颗粒的含量明显低于对照组。结论:反义核酸可以显著抑制B16黑色素瘤细胞tyr的表达。

关键词: 核苷酸,, 反义, 黑色素瘤, 一元酚单氧酶, 基因,, tyr

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2005年02月24日

【期刊论文】脂质体-C-erbB2反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌细胞的作用

丰有吉, 沈梅, 葛柏青, 吴直江, 朱铭伟

中华妇产科杂志,1999,34(8):485~487,-0001,():

摘要

目的 探讨脂质体-C-erbB2反义脱氧寡核苷酸(脂质体-C-erbB2 S-ODNs)对卵巢癌细胞系C-erbB2癌基因表达及细胞增殖的影响。方法 应用流式细胞仪技术,3H-胸腺嘧啶核苷掺入方法,观察脂质体-C-erbB2 S-ODNs对卵巢癌细胞系SKOV3 C-erbB2癌基因表达及细胞生长、细胞周期的作用。结果 脂质体-C-erbB2 S-ODNs能够降低C-erbB2的表达,并抑制细胞生长;脂质体-C-erbB2 S-ODNs降低细胞C-erbB2癌基因表达的作用效率较单用C-erbB2反义脱氧寡核苷酸(C-erbB2 S-ODNs)增强约40倍。结论 C-erbB-癌基因的反义调控在卵巢癌基因治疗中有一定作用;脂质体可有效增强C-erbB2 S-ODNs调控细胞C-erbB2癌基因表达的作用。

关键词: 卵巢肿瘤, DNA,, 反义, 基因,, erbB-2, 脂质体

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2004年12月28日

【期刊论文】转译起始密码子周边序列的改变对Δ6-脂肪酸脱氢酶基因表达的影响

邢来君, 张琦, 李明春, 孙颖, 马海庭, *

微生物学报,2004,44,(4):536~539,-0001,():

摘要

将少根根霉中Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(RAD6)的起始密码子周边序列作适当的修改,并把修改后获得的片段(RAD6-1)亚克隆到表达载体pYES2.0,构建重组表达载体pYRAD6-1。经测序验证,把pYRAD6-1 转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达分析,同时以空载体pYES2.0和出发序列所构建的pYRAD6作为对照。通过气相色谱(GC)和气相色谱P质谱(GC-MS)分析表明,在pYRAD6和pYRAD6-1转化的酿酒酵母中生成γ-亚麻酸,而pYES210中没有检测到。其中,pYRAD6-1转化的酿酒酵母γ-亚麻酸表达量占细胞总脂肪酸含量的5.23%,而对照pYRAD6转化的酿酒酵母中表达量只占2.64%。

关键词: 少根根霉,, Δ6-脂肪酸脱氢酶基因,, 转译起始密码子,, 酿酒酵母,, γ-亚麻酸,, 表达

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2004年12月28日

【期刊论文】深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及序列分析*

邢来君, 李明春, 刘莉, 张丽, 胡国武

菌物系统,2001,20(1):44~50,-0001,():

摘要

γ-亚麻酸(GLA,C18:3△6,9,12)是由A6-脂肪酸脱氢酶以亚油酸(LA,C18:2△9,12)为底物,在C6位脱氢形成的。由于在人体中,γ-亚麻酸是花生四烯酸、前列腺素类和白三烯类等生理活性物质的前体物,而深黄被孢霉是目前用于微生物发酵生产γ-亚麻酸的主要菌株。本文根据脂肪酸脱氢酶的保守区设计引物,利用反转录聚合酶链式反应从丝状真菌深黄被孢霉中克隆了编码△6-脂肪酸脱氢酶的cDNA,全长为1374个核苷酸,编码457个氨基酸,但与其他位点的脂肪酸脱氢酶不同的是,A6-脂肪酸脱氢酶在其序列的N端特有细胞色素b5(Cytb5)区。这是国际上对深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的首次报道。

关键词: 深黄被孢霉,, △6-脂肪酸脱氢酶基因,, 克隆

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