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2011年06月07日

【期刊论文】甘蓝型油菜矮化突变体抑制消减cDNA文库的构建及初步分析

赵云, 李小艳, 周云涛, 李熠毅, 王茂林*

中国油料作物学报,2008,28(4):396~402,-0001,():

摘要

采用抑制性消减杂交(suppresson stubtracitve hybridization, SSH)技术,以甘蓝型油菜矮化突变体“NDF-1”为实验方(tester),野生型“3529”为驱动方(driver)构建植株差异表达的抑制消减cDNA文库。所建cDNA文库的插入片段大小主要集中在100~1000bp之司。斑点杂交筛选得到了32个阳性克隆,序列测定和同源性对比分析表明,其中的12个克隆功能未知,其余涉及到激素信号转导、第二信使、光合作用、脂肪酸代谢及衰老等多个方面。还对部分差异表达基因的功能进行了分析。为进一步认识油菜植株矮化的机理奠定了基础。

关键词: 甘蓝型油菜, 矮化突变, 抑制消减杂交 cDNA文库

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2011年06月07日

【期刊论文】甘蓝型油菜突变体Cr3529抑制性消减文库的构建

赵云, 刘阳, 王茂林, 邱峰, 周云涛, *m张帆

四川大学学报(自然科学版),2005,42(5):1029~1032,-0001,():

摘要

应用抑制性消减杂交(suppreSSion subtractive hybridization, SSH)技术构建了甘蓝型幼叶黄化油菜突变体Cr3529和其野生型3529品系幼叶期的正、反向消减文库.经茵落PCR检测,正向消减文库的有效重组率为55.5%;反向消减文库的有效重组率为76.5%。为进一步克隆消减文库中的差异表达基因和研究这些基因的功能奠定了基础。

关键词: 抑制消减杂交 消减文库, 菌落PCR

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2011年05月03日

【期刊论文】一氧化氮诱导食管癌细胞线粒体DNA编码基因过表达*

许丽艳, 李恩民)**, 许丽艳), 杨帆), 袁兰), 陈跃)

生物化学与生物物理进展,2002,29(3):378~384,-0001,():

摘要

以人食管癌细胞系EC109作为驱赶方(driver),以被一氧化氮(nitric oxid, NO)诱导的ECl09作为实验方(tester),应用抑制消减杂交(suppression subractive hybridization, SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的食管癌细胞中基因的过表达情况然后对过表达基因的表达序列标签(expressed seqnencetag,EST)实施序列测定,并与GenBank进行BLAST同源性比较和序列突变分析结果先后两次从69个SSH阳性克隆中共鉴定出6个线粒体DNA(milochondrial DNA,mtDNA)编码的基因,即ND 4L、ND 4、COX-2、Lys-tRNA、ATP -8和ATP-6表明NO可以诱导食管癌细胞mtDNA编码的基因过表达另外,在ND-4L/ND-4基因的片段(10736~11449)上发现了三处同型单核苷酸置换(10872→C,11001A →G,11346A→G),在COX-2/Lys-Trna/ATP-8/ATP-6基因片段(8011~8 589)上发现了一处单核苷酸缺失(8380A)氨基酸序列分析表明,在NO诱导的EC109中可能存在着一种结构异常的ATP-8肽链(一条在N端被截短的只有11个氨基酸残基的肽链,而正常的ATP-8肽链为68个氨基酸残基)这些研究结果为深入揭示NO对肿瘤细胞的作用机制提供了新的重要线索。

关键词: 食管癌,, 一氧化氮,, 线粒体DNA编码基因,, 基因过表达,, 抑制消减杂交

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