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2011年05月13日

【期刊论文】鞘脂激活肽真核表达载体的构建及其对前列腺癌细胞增殖的影响

苑辉卿, 任凯, 孔峰, 蔡捷, 王小玲, 胡晓燕, 徐霞, 张建业

山东大学学报(医学版),2007,45(1):1~7,-0001,():

摘要

目的:构建含有鞘脂激活蛋白原神经营养序列短肽-鞘脂激活肽NP(neurotrophic peptide,NP)的真核表达载体以及NP与TAT的融合蛋白真核表达载体(TAT-NP),探讨NP在前列腺癌细胞中的作用。方法:根据NP和TAT的氨基酸序列合成其DNA序列,利用基因克隆技术构建含有TAT和NP读码框架的真核表达载体pcDNA-TAT-NP和pcDNA-NP。在前列腺癌PC3、LNCaP细胞中转染上述载体后通过RT-PCR、MTT和流式细胞术,分别检测TAT-NP、NP的mRNA的表达,NP对前列腺瘤细胞的增殖情况以及对细胞周期的影响。结果:经测序鉴定,成功构建pcDNA-TAT-NP和pcDNA-NP真核表达载体。RT-PCR结果显示,TAT-NP、NP能够在前列腺癌细胞中表达。MTT结果表明,TAT-NP、NP均对前列腺癌细胞增殖具有促进作用。流式细胞结果显示,TAT-NP、NP具有促进细胞进入S和G2/M期的作用。结论:外源表达的鞘脂激活肽NP能够促进前列腺癌细胞的增殖,并能影响细胞周期各时相的变化。

关键词: 鞘脂激活蛋白原, 鞘脂激活肽, TAT蛋白转导结构域, 流式细胞术 前列腺肿瘤, 细胞株

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2011年05月05日

【期刊论文】流式细胞术诊断X连锁高IgM血症的临床应用

陈同辛, 曹睿明, 王玺, 朱亚忠, 金莹莹

中华检验医学杂志,2008,31(5):509 ~512,-0001,():

摘要

目的建立流式细胞术诊断x连锁高IgM血症(X-linked hyper-lgM syndrome,XHIM)的方法。方法取患者、患者母亲和健康对照者外周血,肝素抗凝,用RPML1640培养基稀释,以15μl的佛波醇酯(1ng/μl)和6μl的离子霉素(50ng/μl)作刺激剂,从而将外周m标本分为刺激组和非刺激组,运用荧光标记的抗细胞表面抗原单抗检测CD3+CD8-T淋巴细胞表而CD40配体的表达情况,同时检测CD3+淋巴细胞表面的CD69分子作为激活对照,以确定细胞活化的程度。结果 刺激组细胞表面CD69的表达率均在96%以上;患者母亲及健康对照者CD3+CD8-T淋巴细胞表面CD40L的表达率分别为60.04%和62.87%,而患者仅为0.8%。非刺激组CD69的表达率均小于3%;患者、患者母亲和健康对照者CD40L的表达率分别为0.88%、4.15%和5.51%。结论 流式细胞术可以快速诊断X连锁高IgM血症,有可能成为该类疾病的初筛方法。

关键词: 高丙种球蛋白血症, 免疫球蛋白M, 流式细胞术

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2011年03月28日

【期刊论文】鸡MD肿瘤细胞DNA含量及细胞凋亡的特性

张书霞, 陈万芳, 鲍恩东

南京农业大学学报,2000,23(3):81~84,-0001,():

摘要

用SPF来杭鸡复制MD肿瘤模型,取MD肿瘤组织和相同日龄鸡的正常组织,制成单个细胞悬液,碘化丙锭染色后,用流式细胞仪检测细胞DNA含量和细胞凋亡率。结果:(1)MD肿瘤有二倍体肿瘤和异倍体肿瘤,31例MD肿瘤中26例为二倍体肿瘤,5例是异倍体肿瘤;(2)MD肿瘤细胞动力学特点是:DNA合成期(s期)细胞比例明显增加,肾、肝、卵巢和睾丸MD肿瘤细胞S期分别为12.13%,11.30%,12.31%和15.26%,相应组织细胞依次为1.37%,1.27%,1.54%和0.07%,增殖指数(prollferationindex,PI)显著增高;(3)MD肿瘤细胞凋亡率明显低于正常组织,肾、肝、卵巢和睾丸MD肿瘤细胞凋亡率分别是0.33%,0.69%,0.73%,0.16%,而相应组织细胞凋亡率则为1.40%,2.44%,1.92%和2.11%。提示细胞周期紊乱、细胞增殖活跃、细胞凋亡受阻是MD淋巴瘤形成的共同细胞学基础。

关键词: 马立克氏病, DNA含量, 细胞凋亡, 流式细胞术

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2010年12月08日

【期刊论文】组织细胞DNA含量变化与死亡时间的相关性研究

赵子琴, 陈新, 沈忆文, 顾云菊, 刘志萍, 孙淑惠

法医学杂志,2005,21(2):115~117,-0001,():

摘要

目的 研究人死后各器官组织细胞DNA降解变化规律,探讨其在推断死亡时间方面的应用价值,为推断死亡时间提供科学依据。方法 已知死亡时间人尸体的心、肝、脾、肾,按死后6,12,24和48h四个时间段取材,制成石蜡切片,经Feulgen染色并图像分析;同时将各器官组织按不同时间段取材,制成单细胞悬液,应用流式细胞仪检测DNA含量。结果 (1)人体各器官组织细胞经FCM检测。脾细胞核DNA随死亡时间延长呈现较好的下降梯度,而心、肝、肾,则由于自溶较快,死后6h细胞核DNA含量已很低,其变化情况与死亡时间的相关性不佳:(2)各器官组织细胞核DNA染色强度指数均随死亡时间的延长而下降。结论 (1)机体死亡后。各器官组织细胞核DNA含量随死亡时间延长逐渐减少。具有一定的变化规律。其中以脾细胞核DNA含量的变化趋势与死亡时间最具相关性,肝、肾次之,而心最差;(2)方法学分析,图像分析技术(IAT)与流式细胞术(FCM)两种检测方法在研究组织细胞DNA含量变化方面。各有利弊。可互补不足。

关键词: 死亡时间, DNA含量, Feulgen染色, 流式细胞术 图像分析

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2009年11月02日

【期刊论文】哮喘患儿单个核细胞表面CD86分子表达和TH源细胞因子水平及之间相关性研究

杨锡强, 朱晓萍, 符州, 俞海国, 廉国利, 李欣

中华儿科杂志,2004,2(42):83~86,-0001,():

摘要

目的 探讨哮喘急性发作患儿T细胞协同刺激途径和T细胞亚群激活状况。方法随机选择哮喘急性发作期患儿35例,对照组31例。用直接免疫荧光流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中白细胞分化抗原14阳性(CD)细胞表达CD86的平均荧光强度;经脂多糖刺激后PBMC中CDt9细胞百分率及CDit cNf,双阳性细胞百分率;ELISA检测植物血凝素刺激后PBMC培养上清白细胞介素(Ⅱ)-4、IL-13、IFN- 7水平及血浆总IgE水平,并分析它们之间的相关性。结果(1)哮喘组CDT,细胞表达CD86的平均荧光强度(31.8±9.2)、CD志细胞百分率r(13.5±4.0)%]、CDt CDS+f,细胞百分率[(4.6±2.0)%]及血浆总IgE水平[186.6(64.3-723.6) kIU/L]与对照r(23.5±6.4)、(8.2±3.0)%、(2.3±1.4)%、42.0(0.9-115.2)]比较差异有显著性;(2)哮喘组Ⅱ。4和IL-13水平均增高,IFN/水平降低,与对照组比较差异有显著性;(3)哮喘组CDT,细胞的CD86平均荧光强度与CDT9 CD+fi细胞百分率,CD9 CD,百分率与血浆总IgE水平及CD^、CDi19 CDJb百分率与IL4、IL-13水平均早显著正相关。结论 哮喘急性发作患儿PBMC中抗原递早细胞表达CD86的强度或数量增高;B细胞和TH2细胞对丝裂原的活化作用应答增强。这提示CD86及TH亚群失衡在哮喘发病机制中起重要作用。

关键词: 哮喘, 抗原, CD, 膜糖蛋白类, 细胞因子类, 流式细胞术

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2009年10月10日

【期刊论文】重组病毒趋化因子vMIP对脂多糖刺激的细胞免疫功能的影响*

孙晗笑, 杨清玲

中国病理生理杂志,2004,20(5):788~791,-0001,():

摘要

目的:了解重组病毒趋化因子vMIP作用前后及内毒素刺激后细胞内细胞因子IL-4和IFN-γ水平的变化,探讨vMIP对免疫功能的影响。方法:通过放射性配体一受体结合实验、ELISA法及流式CD4+T细胞的细胞内染色法检测外周血单个核细胞的培养上清IL-12水平及细胞内细胞因子IFN-γ及IL-4分泌水平的变化。结果:通过竞争结合细胞膜表面趋化因子受体,vMIP-II可减缓高浓度LPS引起的爆发式细胞因子IL-12、IFN-γ产生;vMIP可促进IL-12、IFN-γ和11-4分泌。结论:病毒趋化因子vMIP-II可调节CD4+T细胞分泌IFN-γ和IL-4,从而下调过激的炎症反应,并对感染性休克可能有拮抗作用。

关键词: 巨噬细胞炎性蛋白质类, 脂多糖类, 白细胞介素12, 流式细胞术

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2009年09月12日

【期刊论文】葡多酚对胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的影响

钟进义, 李蕾

卫生研究,2004,33(2):191~193,-0001,():

摘要

目的 观察葡多酚(GPC)对氧化损伤引发的胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的影响。方法 在体外培养的胸腺细胞中加入不同浓度的CPC和培养液中浓度为125μmol/L的H2O2,共同培养2h,采用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位水平。结果 氧化损伤组细胞凋亡率为(29.53±3.8)%,线粒体膜电位为27.24±2.2(D值)。50mg/LCPC保护组则分别为(8.61±1.2)%和87.55±4.7(D值),两组间的差异均有显著性(P<0.05)。结论 CPC可有效抑制氧自由基引发的胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的下降,对胸腺细胞的氧化损伤有良好防护作用。

关键词: 葡多酚, 细胞凋亡, 线粒体膜电位, 流式细胞术

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2009年07月16日

【期刊论文】206例垂体腺瘤的免疫组化、电镜及内分泌特征的研究

张建宁, 杨树源, 杨露春, 张丽侠, 管欣琴

中国肿瘤临床,1994,21(11):797~801,-0001,():

摘要

末文丰用免疫组化及电镜观测分析了206倒垂体腺瘤。根据激素分泌及超擞结构特征将肿瘤分为11窦:其中泌乳素腺密最常见(35.92%):其次是生长激素腺瘤(19.42%):零细胞睬瘤(16.50%)等。末文借助流式细胞术DNA 分析研究了38倒术后复发的垂体昧瘤后认为:嗜醮性干细胞哝瘤和伴Nelson蹄合征的促肾上睬皮质激素腺瘟有术后复发的倾向;此外,侵袭性生长的嚷瘤和流式细胞术洲定时DNA 含量较高的DNA 异倍体哝瘤的恶性度相对较高,术后易于复发。

关键词: 垂体腺瘤 免疫组化 超微结构 流式细胞术

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2009年07月14日

【期刊论文】急性缺血性脑卒中患者白细胞粘附分子的表达及细胞内[Ca2+]变化的实验研究

唐方, 张国元, 徐朝义, 张峻梅, 李玲, 陈槐卿

国外医学临床生物化学与检验学分册,2005,8,26(8),-0001,():

摘要

目的 探讨急性缺血性脑卒中患者外周血白细胞计数和粘附分子表达的变化,以及与中性粒细胞激活密切相关的细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]变化,以期为脑卒中的发病机理和治疗提供有价值的理论依据。方法 采用流式细胞术(FCM)检测白细胞粘附分子的表达及细胞内[Ca2+]的变化。结果 脑卒中急性发作时,患者主要是中性粒细胞数增高明显,外周血白细胞CDl1b、CD18的表达在发病24h内升高,同时,脑卒中患者中性粒细胞表面CD62I的表达在急性期明显降低,急性脑卒中患者中性粒细胞内[Ca2+]增加,中性粒细胞表面粘附分子CD11b、CD18的表达与细胞内ECa]具有正相关性,CD62L的表达与[Ca2+]虽无明显的线性相关性,但随着[Ca2+]的增加,CD62L的表达具有下降的趋势。结论 急性脑卒中发生时,白细胞被激活,粘附分子CD11b、CD18表达上调,介导白细胞与内皮细胞粘附增强,可能会加重缺血后迟发性神经元死亡的病理生理过程。同时,随着中性粒细胞的激活,细胞表面粘附分子CD62L的表达显著下调,细胞内[Ca2+]增加,在白细胞与内皮细胞的粘附过程中起重要作用。

关键词: 脑缺血, 白细胞, 细胞粘着分子, 流式细胞术

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2009年07月14日

【期刊论文】急性缺血性脑卒中患者外周血白细胞CD11b、CD18表达变化研究

唐方, 陈槐卿, 徐朝义, 张峻梅, 高励, 刘凯

中国神经免疫学和神经病学杂志,2003,10(2):119~122,-0001,():

摘要

目的探讨急性脑卒中患者外周血白细胞黏附分子CD11b、CD18的表达,以及其在急性缺血性脑损伤发生、发展中的作用。方法采用流式细胞术,用单克隆抗体标记定量测定32例急性脑卒中患者发作24h内外周血白细胞CD11b、CD18的表达量,以平均荧光强度(MF1)的大小来表示CD11b、CD18的相对含量,在发病72h、7d后再分别测定1次。以40例健康者作对照。结果发病24h内患者组白细胞表面黏附分子CD11b、CD18的表达显著高于对照组(P<O.O1);在发病72h内患者组CD11b、CD18的表达逐渐降低.但仍高于对照组(P<O.05);发病7d后,其结果与对照组相比差异无显著性(P>O.05)。结论急性脑卒中发病时,白细胞被激活,黏附分子CD11b、CD18表达上调,介导白细胞与内皮细胞黏附增强,可能会加重缺血后迟发性神经元死亡的病理生理过程。

关键词: 白细胞CD11b、CD18, 流式细胞术 缺血性脑卒中

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2009年07月14日

【期刊论文】流式细胞仪检测恶性肿瘤患者外周血活化T淋巴细胞及临床价值

唐方, 刘晓平, 梁河涛, 刘凯, 张峻梅

四川医学,1998,19(3):198~199,-0001,():

摘要

流式细胞仪(FlowCytometry FCM)是单克隆抗体技术、激光技术、电子计算机技术等学科高度发展的成果。FCM的应用标志着医学生物学研究进入了细胞和分子水平,为微观认识细胞提供了精密、准确的方法。其中肿瘤学中的研究亦越来越广泛。本文应用FCM对l2种115例不同的恶性肿瘤患者外周血活化T淋巴细胞进行了检测,以探讨活化T细胞在恶性肿瘤诊断中的临床价值。

关键词: 活化T淋巴细胞 恶性肿瘤 流式细胞术

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2009年07月14日

【期刊论文】恶性肿瘤患者活化血小板的检测

唐方, 张峻梅, 李玲

中国肿瘤临床,2005,32(16):920~922,-0001,():

摘要

探讨恶性肿瘤患者血小板的活化状态及CD62p和CD63在恶性肿瘤患者中检测的临床意义。方法:采用流式细胞术对76例恶性肿瘤患者(未转移组45例,转移组3l例)活化血小板标志物CD62p和CD63的表达进行检测。并与对照组比较结果:恶性肿瘤患者CD62p和CD63显著高于时照组,转移组显著高于未转移组(P<0.01)。结论:恶性肿瘤患者血小板处于活化状态,其活化程度与是否转移相关。

关键词: 活化血小板 恶性肿瘤 流式细胞术

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2009年07月14日

【期刊论文】DNA含量和细胞周期分析与恶性体腔积液诊断和腔内化疗疗效判断

唐方, 周从明, 周继华, 王靖, 张正伟, 周从全

WEST CHINA MEDICAL JOURNAL 1999.Vol 14. No.3 CN 51-1356/R,-0001,():

摘要

目的:探讨采用流式细胞仪测定DNA含量及作细胞周期分析在诊断恶性体腔积液及判断腔内化疗疗效中的意义。方法:对4l例患恶性肿瘤伴胸水、腹水和心包积液的患者,在腔内化疗前后进行积液中细胞DNA含量测定和细胞周期分析及细胞病理学检查。结果:腔内化疗前;41例患者中l9倒查见癌细胞,34例中查见异倍体细胞。第一次腔内化疗6~7天后:4l例患者积液中均未再查见癌细胞,有3例查见异倍体细胞;DNA指数(DI)、G2/M期所占比例,S期所占比例(SPF)均显著下降(P<0.001)。第二次腔内化疗6~7天后,所有病例中均未查见癌细胞和异倍体细胞。结论:采用流式细胞仪测定DNA含量及作细胞周期分析诊断恶性体腔积液和判断腔内化疗疗效具有快速、灵敏和可靠性高的优点。

关键词: DNA, 恶性积液, 腔内化疗, 流式细胞术

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2007年09月07日

【期刊论文】去甲斑蝥素诱导K562细胞凋亡的影响

陈家旭, 刘晓兰, 刘燕, 王继峰, 戴书静, 杨美娟

中国医药学报2000年第15卷第2期,-0001,():

摘要

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人白血病细胞株K562细胞增殖的抑制作用。方法:用流式细胞测定NCTD对K562细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:NCTD对K562细胞有较强的增殖抑制作用;在作用24小时后达到凋亡高峰;24小时各浓度NCTD作用后,G1期细胞百分数均减少,S期与G2+M期细胞百分数均增加,呈现G2+M期阻滞现象。结论:NCTD可诱导K562细胞调亡,抑制瘤细胞分裂增殖,且有明显的时间和剂量效应。

关键词: 去甲班蝥素, K562, 细胞凋亡, 细胞周期, 流式细胞术

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2006年12月13日

【期刊论文】天然免疫分子TLR2 TLR4在类风湿关节炎的表达模式研究

张源潮, 潘正论, 许冬梅, 马春燕

中华风湿病学杂志,2005,9(2):086~088,-0001,():

摘要

目的 探讨天然免疫分子TLR2、TLR4在类风湿关节炎(RA)发病中的作用。方法 采用多色免疫荧光流式细胞仪技术,观察RA患者和正常对照外周血CD14阳性单核细胞上TLR2、TLR4分子的表达率和平均荧光强度。结果 ①TLR2和TLR4在RA患者外周血CD14阳性单核细胞阳性率和平均荧光强度显著高于对照组;②二者表达模式在早期RA组和晚期RA组差异无统计学意义;③ TLR2平均荧光强度与C反应蛋白(CRP)水平有关联。结论 天然免疫分子TLR2、TLR4在RA的表达模式,提示其在RA发病和病情进展中有重要作用。

关键词: 关节炎,, 类风湿, 单核细胞, 流式细胞术

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2006年12月01日

【期刊论文】小鼠脐血造血干/祖细胞含量与特性初步观察*

方建培, 徐宏贵, 魏菁, 黄文革, 陈凤英, 黄绍良, 李树浓

中国病理生理杂志,2003,19(1):46~50,-0001,():

摘要

目的:探讨小鼠脐血(umbilicalcordblood,UCB)造血干/祖细胞含量与特性。方法:采用体外集落培养和流式细胞术检测C57BL/6(H-2b)小鼠脐血与骨髓(bonemarrow,BM)造血干/祖细胞。结果:小鼠脐血培养7d粒单系祖细胞(CFU-GM)及早期红系祖细胞(BFU-E)集落产率与骨髓相近,但14dCFU-GM、多向祖细胞(CFU-GEMM)明显高于后者(P<0105),且见含细胞多体积巨大的致密型集落。脐血CD34+Sca-1+细胞亚群也明显高于骨髓(P<0.05)。结论:小鼠F脐血富含造血干/祖细胞,具有高增殖潜能。

关键词: Fetal blood, Mice, Hematopoietic stem cells, Flow cytometry3

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2005年11月15日

【期刊论文】细胞凋亡对尖锐湿疣患者外周血单个核细胞的影响

谭升顺, JANG Wei-Su, TAN Sheng-Shun.

中国免疫学杂志,2003,19,870~871,-0001,():

摘要

目的:探讨激活诱导细胞死亡(AICD)对尖锐湿疣患者细胞免疫功能的影响。方法:分离CA患者和健康体检正常人的外周血单个棱细胞(PBMC),在PHA的刺激下体外培养24小时后收集细胞和上清液,经流式细胞术检测凋亡细胞。采用酶联免疫吸附试验检测培养上清液IL-2及Ⅱ-lO。结果:发现CA组新鲜血PBMc的凋亡率很低和对照组相似(P>O.05)。培养24小时后CA患者的外周血单个核细胞揭亡明显高于正常对照组(P<0.001),cA患者的培养上清液IL-2浓度明显低于对照组(P<0.001),而IL-1O浓度显著高于对照组(P<0.001)。结论:A1CD可能是引起尖锐湿疣患者细胞免疫功能低下的一个重要机制,在尖锐湿疣患者发病机制中起重要作用。

关键词: 尖锐湿疣, 激活诱导细胞死亡, 流式细胞术 酶联免疫吸附试验

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2006年01月11日

【期刊论文】人脐血间充质干细胞对脐血CD34+细胞体外扩增作用的研究

黄绍良, ZHOU Dun-hua, HUANG Shao-liang, ZHANG Xu-chao, WEI Jing, WU Yan-feng, HUANG De, LI Yang, FANG Jian-pei

中华儿科杂志,2005,43(7):194-498,-0001,():

摘要

目的 折探讨含人脐血来源的间充质干细胞(MSCs)体系在体外对脐血造血干细胞(HSCs)扩增作用。方法 (1)用含人脐血MSCs及不同造造血生长因子(HGFs)组合的无血清扩增体系对人脐血CD34+细胞进行体外扩增。(2)于扩增前及增后笫6、12天分别用双色流式细胞仪动态检测HSCs表面抗原标记:CD34+、CD34+、CD38-、CD34+CD3+、CD34+CD19+、CD34+CD33+和CD34+CD41a+细胞的含量。(3)按本实验室方法行体外半固体培养,观察扩增前后脐血细胞粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、爆式红系集落形成单位(BFU-E)、混合集落形成单位(CFU-Mix)及高增殖集落形成单位(CFU-HPP)集落形成情况。结果 (1)含人脐血MSCs体系对脐血CD34+;CD38-细胞的扩增倍数在笫6天和第12天分别为159和437倍。该亚群百分比在单纯因子组增第12天时为1.98%,而在含脐血MSCs组为9.98%,明显高增前。(2)集落培养表明,含脐血MSCs组增第12天与增第6天相比,其CFU-Mix和CFU-HPP的扩增倍数增加,而单纯因子组这两种集落的增数下降。(3)随增天数的增加,两组相比,含脐血MSCs组差异更显著。结论 (1)含脐血MSCs体系不仅能扩增更原始的造血干/祖细胞(HSPC),且具有在短期内(12d)保持HSCs不耗竭。(2)含脐血MSCs体系对脐血CD34+细胞向定向祖细胞的扩增,主要为髓系及巨核系祖细胞,而对其向淋巴系祖细胞的扩增具有抑制作用。

关键词: 间质干细胞, 细胞,, 培养的, 抗原,, SD34+, ,, 流式细胞术 胎血

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2005年07月21日

【期刊论文】补肾中药对溴隐亭致流产鼠模型中蜕膜CD56+NK细胞表面CD69和CD94表达的影响

归绥琪, 陆方贤, 储以微

《上海免疫学杂志》,2003,23(4):260-263,-0001,():

摘要

为了观察补肾中药是否能影响蜕膜CD56+NK细胞比例及其表面CD69、CD94 的表达,从而进一步阐明补肾中药对母胎界面免疫的影响机制。SD大鼠于孕6~8d皮下注射溴隐亭013mg/kg·d,建立改良的溴隐亭致SD大鼠流产模型,随机分为三组。A组为模型组;B、C 组在孕1~11d分别给予大剂量中药(415g/kg·d)、P(8mg/kg·d),另设正常孕鼠对照(D组)。孕12d处死,取蜕膜组织,分离成单个细胞悬液,用流式细胞分析技术观察4组蜕膜CD56+NK细胞的量及蜕膜NK细胞表面CD69、CD94的表达差异。结果发现:B组(P<0105)、C、D组(P<0101)妊娠率与A组相比增加,并且有差异;B、C组蜕膜CD56+NK细胞比例与A组相比明显增加,与D 组无差异;各组蜕膜CD56+NK细胞表面CD69表达无差异;B、C、D组CD94的表达与A组相比显著增加;A组蜕膜CD56+NK细胞表达CD69与CD94相比明显增加,B、C 组相反。因此,补肾中药能影响蜕膜CD56+NK细胞表面CD69、CD94的表达,可能通过增加CD94的表达,抑制CD69 从而进一步抑制NK细胞的活性,起到保胎作用。

关键词: 蜕膜CD56+, NK细胞, 流式细胞术 补肾中药, CD69, CD94

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2007年03月09日

【期刊论文】海洋哈维氏弧菌溶血素蛋白在酵母菌细胞的表面展示及其活性测定

池振明, 朱开玲,  池振明,  梁丽琨,  吴龙飞

高技术通讯2006年12月第16卷第12期,-0001,():

摘要

基于酵母表面展示技术的基因工程活载体疫苗,在鱼类疫苗的研究中至今未见报道。海水鱼类病原菌哈维氏弧菌的溶血素是其主要的毒力因子之一,为制备以酒精酵母为载体的基因工程疫苗,参照其Genebank中基因序列设计一对引物,PCR扩增得到预期长度的产物,双酶切插入用于酒精酵母表面展示的穿梭质粒载体pYD1,转化大肠杆菌TOP10,提取阳性质粒转化酒精酵母菌株EBY100,诱导表达后,用免疫荧光和流式细胞仪检测外源蛋白的表达,结果测得最佳诱导时间为36-48小时,诱导培养后约30.0%左右的酵母细胞表达外源蛋白;同时以EBY100和转空质粒的酵母菌株为对照,测得诱导培养后的阳性酵母转化株的细胞对牙鲆鱼血细胞具有溶血活性,以此酵母活细胞分设高中低三个深度组,腹腔注射养殖牙鲆幼鱼,检测其毒性,结果表明此重组酵母对牙鲆是安全的。为下一步鱼用活载体疫苗免疫效果的研究奠定了基础。

关键词: 溶血素, 酵母表面展示, 荧光染色, 流式细胞术 活疫苗

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