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2009年11月01日

【期刊论文】肝癌细胞亚细胞组分的双向凝胶电泳分析

邱宗荫, 李兴, 潘卫, 邱峰, 田昆仑

中华肝脏病杂志,2005,13(4):271~273,-0001,():

摘要

目的建立超速离心方法分离亚细胞组分的技术路线,以提高肝癌细胞蛋白质组的双向凝胶电泳分离效率。方法体外培养的肝癌细胞QGY-7703匀浆破碎后,经差速离心分离成细胞核、20000×g沉淀,100000×P沉淀和细胞浆4个亚细胞组分,分别进行双向凝胶电泳,然后用Image Master软件分析电泳图谱。结果亚细胞组分分离后,电泳分辨率明显提高,特别是细胞核和细胞浆蛋白质的检出效率得到很大提高。不同亚细胞蛋白质组电泳图谱的差异显示了其蛋白质组构成的不同。结论超速离心是一种有效的亚细胞组分分离手段,蛋白质组技术与超速离心技术的结合能克服全细胞双向凝胶电泳的一些缺陷,并可将蛋白质组研究引向亚细胞水平。

关键词: 癌,, 肝细胞, 蛋白质组,, 亚细胞部分,, 电泳,, 凝胶,, 双向

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2011年03月21日

【期刊论文】高效毛细管电泳法手性分离D唰氨基酸取代胸腺五月太类似物的研究

韦萍, 朱颐申*, 屠春燕, 顾薇, 欧阳平凯

分析化学(FENXI HUAXUE)研究简报,2007,35(1):127~130,-0001,():

摘要

采用高效毛细管电咏法分离两对刀,氨基酸取代的胸腺五肤类似物。对影响分离的缓冲被pH 值、电泳温度、电咏电压等进行了系统的研究。用含20mmoVL 2,6-=甲革份环糊精(DM份CD),40 mmoVL 磷酸盐援冲液(1:pH 6.03:II:pH 5.05) 作运行缓冲液,柱温15℃,电Æ20 kV,使样品就得基钱分离,取得了满意的分离结果。结果显示,两组样品的D嗣氨基酸取代物均比L-氨基酸取代物出峰早,提示D-氨基酸取代物的电泳移动速度较快,句。M份-CD 的结合稳定性较ι氨基酸取代物弱。

关键词: 胸腺五肤,, D-氨基酸,, 手性分离,, 南妓毛细管电泳,, 2,, 6-二甲基乔·环糊精

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2009年04月23日

【期刊论文】兔晶状体蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定研究

刘奕志, 张敏, 柳夏林, 黄强, 刘欣华, 夏朝霞, 吴明星

中华眼科杂志,2004,40(2):113~117,-0001,():

摘要

目的 探讨双向电泳和质谱鉴定在晶状体蛋白质组特性研究中的价值,为白内障的防治提供新的有效途径。方法 采用固相pH梯度(IPG)等电聚焦双向凝胶电泳方法对兔龄为3个月的新西兰兔透明晶状体蛋白质进行分离,使用ImageMaster-DElite3.01图像分析软件分析电泳图像,使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对主要的高丰度晶状体蛋白质进行鉴定。结果 双向电泳图谱显示,在250μg兔晶状体中蛋白质分布在等电点(PI)为pH 值5~9、相对分子质量为14000~94000的区域内;而高丰度晶状体蛋白质的相对分子质量为14000~40000。图像分析软件定量检出180个蛋白质斑点的近似PI、相对分子质量及蛋白质相对含量,质谱鉴定得到其中16个高丰度晶状体蛋白质的种类。结论 双向电泳和质谱鉴定可有效分离和分析晶状体蛋白质组的特性,为分析白内障形成过程中蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径,为白内障的防治带来了新的前景。

关键词: 晶体蛋白类, 蛋白质组, 电泳,, 凝胶,, 双向, 光谱法,, 质量,, 基质辅助激光解吸电离

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2009年02月12日

【期刊论文】新型毛细管电泳Polybrene/聚丙烯酸双涂层柱的研制及应用

杜迎翔, 杜迎翔*, 陈建民

分析化学研究报告,2004,32(10):1295~1298,-0001,():

摘要

以阴离子聚合物聚丙烯酸为涂层材料,研制了一种新型的阴离子型毛细管电泳Polybrene/聚丙烯酸双涂层柱。此法不但操作方便,而且毛细管涂层重现性好,柱寿命超过100次电泳分析,经1mol/LHC1、0.1mol/LNaOH、CH3OH和CH3CN 等冲洗15min 后,涂层未发生变化,化学稳定性强。将该双涂层柱用于以新型多糖作手性选择剂的碱性药物手性拆分中,毛细管内壁对碱性药物的吸附作用大大降低,样品色谱峰对称性显著改善,手性分离的效果良好。

关键词: 毛细管电泳,, 涂层毛细管柱,, 多糖,, 碱性药物,, 手性分离

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2006年10月25日

【期刊论文】痹肿消汤干预胶原诱导性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究**★

梁清华, 杨波, 蔡颖, 谢薇, 何金华, 刘小春

中国临床康复,2006,10(15):74-78,-0001,():

摘要

目的:观察痹肿消汤干预胶原诱导性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质改变,分析痹肿消汤治疗类风湿关节炎可能的作用机制。方法:实验于2004-05/2005-02在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室、卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验完成。70只SD大鼠随机分为3组,正常组10只,其余60只大鼠采用牛II型胶原与完全福氏佐剂诱导SD大鼠实验性关节炎模型,选取造模成功者再随机分为两组,即痹肿消汤组和模型组。痹肿消汤煎液制备:白花蛇舌草15g,肿节风30g,丹参15g,络石藤20g,骨碎补15g,苡米30g等15味中药,双蒸水煎2次,30min/次,两煎混合,G4滤器过滤,于60℃水浴中浓缩成每毫升药液含生药116g。痹肿消汤组灌服痹肿消汤煎液10Ml/kg(相当于生药62.1g),2d灌服;模型组灌服生理盐水10mL/kg,2次/d灌服。正常组自由进水。应用双向凝胶电泳技术分别分离正常组、模型组及痹肿消汤组大鼠关节滑膜的总蛋白后,经胶体考染显色、图像分析、识别差异表达的蛋白质点,应用MALDI-TOF-MS质谱仪得到相应的肽质量指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:纳入实验的70只大鼠,造模不成功被淘汰7只,最终痹肿消汤组26只、模型组27只、对照组10只,共63只大鼠进入结果分析。①建立了正常组、模型组和痹肿消汤组关节滑膜的双向凝胶电泳图谱,其平均蛋白质点数分别为947±39,994±41,1031±52,其匹配率为92%,91%,94.2%。②发现并鉴定了正常组、模型组和痹肿消汤组大鼠滑膜的差异表达大于2倍的蛋白质点55个,这些差异表达蛋白质的功能涉及物质代谢、能量产生、物质转运、抗氧化应激、信号转导及细胞骨架蛋白,随即用免疫印迹的方法差异蛋白质annexin 1、aldolase A在正常组、模型组、痹肿消汤组中的表达,其结果也显示了类似的表达差异。结论:类风湿关节炎模型关节滑膜病变是一个多种蛋白质参与的复杂过程。滑膜组织的比较蛋白质组学分析是一种筛选病变相关蛋白的可靠方法之一。Annexin 1、aldolase A可能与实验性关节炎的关节滑膜病变有关;痹肿消汤可能通过对实验性关节炎大鼠滑膜蛋白质表达的调控达到治疗目的。

关键词: 关节炎,, 类风湿/, 中药疗法, 关节炎,, 类风湿/, 病理学, 滑膜/, 病理学, 蛋白质类/, 分析, 电泳,, 凝胶,, 双向, 辐射,, 电离

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2005年04月15日

【期刊论文】毛细管电泳法测定猪体组织中甜菜碱含量

汪以真, 胡彩虹*, 许梓荣

分析华学,2001,11(29):1269~1272,-0001,():

摘要

建立了毛细管电泳法快速测定猪体组织中甜菜碱含量的方法。甜菜碱首先转化为苯甲酰甲基酯后直接上样测定。pH为3.0的磷酸缓冲溶液使甜菜碱酯化物和甜菜碱结构类似物酯化物之间以及酯化物和酯化剂之间都能很好地分离,这也省去了反应混合液的前处理。该法标准曲线的线性范围为4~600mgPL,相关系数r为0.9999,最低检测限为1mgPL,相对标准偏差为2.2%~4.7%,标准加入回收率为95.9%~98.4%。

关键词: 甜菜碱,, 猪,, 毛细管电泳,, 体组织

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2005年08月09日

【期刊论文】吲哚美辛抗人结肠癌HCT116细胞双向电泳蛋白质表达谱的差异分析

张桂英, 程艳丽, 张桂英*, 肖志强

,-0001,():

摘要

目的 分析吲哚美辛(Indomethacin,IN)对人结肠癌细胞系HCT116蛋白质表达谱的影响,为研究IN抗结肠癌作用的相关蛋白提供新的方法。方法 应用固相pH梯度(Immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离IN-处理组和未处理组HCT116细胞的总蛋白,银染显色,ImageMaster 2D图像分析软件比较分析IN-处理组和未处理组HCT116细胞系的双向凝胶电泳图谱并识别差异表达的蛋白质。结果 获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的HCT116细胞系的双向凝胶电泳图谱,IN-未处理组与处理组蛋白质点数为:1256±50,1169±36;匹配率为:93.0%,90.6%。IN-未处理组的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(Isoelectric focusing,IEF)方向的偏差是0.896±0.177mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodiumdo-decylsufate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)方向的偏差为1.106±0.289mm。比较分析IN-处理组和未处理组HCT116细胞的双向凝胶电泳图谱,发现IN-处理组和未处理组共有45个差异点,IN-处理组有9个蛋白质点表达上调,34个蛋白质点表达下调,2个蛋白质点仅在IN-未处理组表达。结论 首次建立了IN-处理和未处理HCT116细胞的双向凝胶电泳图谱,识别了45个差异表达的蛋白质点,对这些差异蛋白质点的鉴定将为揭示IN抗结肠癌作用的机理提供实验依据。

关键词: 双向凝胶电泳,, 吲哚美辛,, 蛋白质组,, 结肠癌

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2004年12月31日

【期刊论文】抗人类免疫缺陷病毒-1活性小分子生物效应机制的研究

杨铭, 庞瑞芳, 郝美荣

Chinese Remedies & Clinics, October 2003, Vol 3, No.5,-0001,():

摘要

目的 研究小分子化合物大环多胺类MP-A、MP-B和MP-C抗人类免疫缺陷病毒(HIV)-1的生物活性机制。方法 通过核酸Tm测定及圆二色(CD)光谱法观察大环多胺类化合物对聚腺尿苷酸PolyA:PolyU构象的影响;核酸断裂实验用琼脂糖凝胶电泳法、流式细胞计数法研究其对细胞凋亡和周期的影响;计算机分子模型Docking计算从理论上判断其与TAR RNA结合的可能性。结果 ①MP-A、MP-B 和MP-C不仅可引起PolyA:PolyU构象的变化使其发生断裂,而且可抑制Tat-RNA相互结合。②MP-A、MP-B和MP-C可影响细胞亚二倍体的含量。③分子模型理论计算结果与实验结果基本一致。结论 大环多胺MP-A、MP-B 和MP-C可能通过与病毒基因组RNA的作用抑制HIV-1 RNA与Tat蛋白的结合而发挥抗HIV-1的活性。

关键词: 大环多胺, 细胞凋亡, 电泳,, 琼脂凝胶, 流式细胞术

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2010年03月01日

【期刊论文】非水介质毛细管电泳电导检测舒血宁片中槲皮素含量

郑妍鹏, 莫金垣*, 谢天尧, 黄建林

分析化学(FENXI HUAXUE)研究简报,2002,30(11):1379~1382,-0001,():

摘要

以甲醇:水=70:30的体系为分离介质,柠檬酸一三(羟甲基)氨基甲烷(Citric acid-Tris)为支持电解质,使用电导检测,对槲皮素及其制剂舒血宁片进行了毛细管电泳分离检测,对电泳介质的种类、浓度、表观pH值以及操作电压和进样时司对分离的影响进行了研讨,并对分离检测机理进行了探讨。建立的测定槲皮素的方法的线性范围8.0~160.0mg/L;峰面积的RSD(n=6)为17%,检出限为1.0mg/L;样品加标回收率为92.8%~98.2%。

关键词: 非水介质毛细管电泳,, 电导检测,, 槲皮素

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