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2011年03月28日

【期刊论文】鸡bcl-2表达质粒的构建及其对转染细胞凋亡的影响

张书霞, 步志高, 陈万芳

中国农业科学,13(6):88~94,-0001,():

摘要

构建了CMV驱动及牛生长激素polyA加尾信号修饰的bcl-2cDNA真核表达质粒pCDCB1。随后,采用脂质体转染方法,将扩增并纯化的pCDCB1转染至培养的SPF鸡胚次代单层成纤维细胞(CEF)内,96h后收集全部贴壁及上清脱落细胞,用Dotblot检测bcl-2的表达,用流式细胞术测定其细胞凋亡率。结果,pCDCB1转染后96h,bcl-2在CEF中呈高度表达;CEF平均凋亡率为1.14%,明显低于转染空白载体质粒的对照组7.64%的凋亡率,DNA合成期(S期)细胞为21.58%,也低于对照组。结果证实鸡bcl-2的表达可显著抑制体外培养CEF,亡进程,其效应与细胞DNA合成和增殖无关。

关键词: bcl 2, cDNA, 真核表达质粒 转染, 细胞凋亡

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2010年12月16日

【期刊论文】A族链球菌表面新发现蛋白Fba真核表达质粒的构建及其诱导的免疫应答①

魏林, 李彩虹, 马翠卿, 王锦②

中国免疫学杂志,2007,23(9):835~838,-0001,():

摘要

目的:构建新发现的A族链球菌(GAS)表面蛋白Fba 的真核表达质粒,并将其以及Fba蛋白、M 蛋白分别免疫小鼠,对它们诱导的体液免疫及细胞免疫应答进行评价分析。探讨Fba 蛋白作为GAS候选疫苗的可能性。方法:以SSI-9菌株(GASM 1血清型标准株)作为模板,采用PCR方法扩增Fba基因,测序正确后克隆至真核表达质粒pcDNA3.1,构建真核表达质粒pcDNA3.1/fba;将雌性CD1小鼠随机分成6组,分别为Fba蛋白免疫组、M 蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba+Fba蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba免疫组、pcDNA3.1空质粒对照及PBS对照组。EL ISA检测各免疫组血清IgG的动态变化水平;脾细胞增殖试验检细胞增殖水平,并用流式细胞术检测小鼠体内CD4+ 、CD8+ 淋巴细胞的变化。试验结果经SPSS10. 0统计处理。结果:成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1/fba;质粒或蛋白免疫后小鼠IgG产生水平以Fba蛋白免疫组增高最为明显,其次为Fba质粒蛋白混合免疫组及Fba质粒组。特异性抗原诱导后体外脾细胞增殖试验显示:pcDNA3.1/fba免疫组增殖水平明显高于其它组,流式细胞检测结果与此一致,并显示以CD4+ T细胞水平升高为主,CD8+ T细胞水平在各组别之间也有一定的差异。结论:(1) Fba 蛋白与M 蛋白一样均能有效地诱导机体产生抗体,提示Fba蛋白很有希望成为GAS的候选疫苗。(2)成功构建了Fba蛋白的真核表达质粒pcDNA3. 1/fba,且该重组质粒能有效地诱导抗链球菌所需的抗体,并能增强CD4+ T 细胞、CD8+ T细胞的增殖功能。

关键词: A族链球菌(, GAS), Fba蛋白, 真核表达质粒 免疫

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