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2011年05月03日

【期刊论文】细胞周期依赖性蛋白激酶5/p35在2, 5-己二酮中毒大鼠神经组织中的表达

谢克勤, 王青山, 侯丽艳, 张翠丽, 曾涛, 杨曦伟

中华劳动卫生职业病杂志,2008,26(6):336~340,-0001,():

摘要

目的探讨细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)在2,5-己二酮(HD)中毒性周围神经病发病过程中的作用。方法30只雄性Wistar大鼠,随即分为对照组、200mg/kgHD染毒组和400mg/kgHD染毒组,每组10只。染毒途径为腹腔注射,每周5次,连续8周,建立HD中毒性神经病模型。利用Westernblotting方法检测大脑、脊髓和坐骨神经胞浆蛋一和膜蛋白中CDK5、p35和p25的相对含量。结果与对照组相比,P35蛋白含量在200、400mg/kgHD染毒大鼠大脑和脊髓胞浆蛋白组分中明显降低,而在脊髓和坐骨神经膜蛋白组分中含量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);p25变化趋势与p35基本一致。CDK5在200、400mg/kgHD染毒大鼠大脑胞浆和膜蛋白中均明显下降;除坐骨神经膜蛋白组分中未检出外,在脊髓和坐骨神经中CDK5含量明显升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论HD中毒后大鼠神经组织中CDK5及其激活因子p35和p25发生明显改变,这种改变可能与HD中毒性周同神经病的发病机制有关。

关键词: 己烷类, 细胞周期蛋白质依赖激酶类 神经组织

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2005年03月16日

【期刊论文】永生化人晶状体上皮细胞细胞周期调控相关基因表达的检测

曾骏文, 吴明星, 李绍珍, 高劲松, 刘奕志

中华眼科杂志,2002,38(6):367-372,-0001,():

摘要

目的 探讨人类晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)周期调控中的细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白激酶(cyclin dependent kinase 2,CDK2)和细胞周期蛋白激酶抑制因子(cyclindependent2kinase inhibitor,CKI) p21基因的表达,阐明HLEC增殖和晶状体后囊膜混浊(posterior capsule opacification,PCO)的分子机制。方法 体外培养永生化HLEC系HLE-B3,用二步过量胸苷阻断法进行细胞周期同步化;流式细胞仪检测细胞周期;收集不同时相的细胞提取总RNA。用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测细胞周期蛋白E、CDK2和p21的mRNA表达;分别用免疫组织化学染色和Western blot法检测细胞周期蛋白E和CDK2及p21的蛋白表达。结果 流式细胞仪检测:HLE-B3细胞周期处于G1期,占33.5%;S期,占46.1%;G2期,占20.4%;处于S期及G2期细胞的比例约占总数的66.5%。RT-PCR检测:可见不同周期时相的HLE-B3细胞(细胞周期蛋白E和CDK2)mRNA的表达,但在不同步化的细胞时相中未检测出细胞周期蛋白E的表达。而在同步化的S期细胞中有少许p21mRNA表达。免疫组织化学染色未检测出细胞周期蛋白E阳性细胞,仅可检测出少部分p21阳性细胞。Western blot法检测结果:CDK2阳性表达以S期细胞明显,G1期和G2期略低于S期表达。不同步化细胞也有CDK2的表达。提示细胞周期蛋白E、CDK2与p21的mRNA蛋白表达不平衡。结论体外培养HLE-B3细胞周期过程中存在细胞周期蛋白E、CDK2和p21的表达,且存在表达不平衡。细胞周期蛋白E、CDK和CKI间的表达不平衡有可能是其体外增殖细胞周期分子机制之一。

关键词: 晶体, 上皮细胞, 细胞培养, 细胞周期蛋白E, 细胞周期蛋白质依赖激酶类

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