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2011年06月27日

【期刊论文】雌激素对慢性间歇性低氧大鼠颏舌肌线粒体细胞色素C氧化酶活性及其亚基表达的影响

刘月华, 齐娟, 贾珊珊

中华口腔医学杂志:2008,43(10):604~607,-0001,():

摘要

目的:通过研究雌激素对慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia CIH)大鼠颏舌肌线粒体细胞色素c氧化酶(cytochrome C oxidase, COX)活性及其亚基(C0x I、coxⅣ)表达的影响,探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)发病中雌激素所起的作用。方法:3个月龄健康雄性SD大鼠48只,分为正常对照组(NC组)、慢性间歇性低氧组(CIH组)及慢性间歇性低氧雌激素干预组(E+CIH组)。后两组建立CIH模型,同时E十CIH组给予苯甲酸雌二醇0.2 mg/kg,NC组、CIH组给予无菌橄榄油O.2 ml/次,2次/周,肌肉注射。密度梯度离心法分离大鼠颏舌肌线粒体,极谱法测量cox活性;western blottiIlg分析C0X I和coxⅣ蛋白表达;实时聚合酶链反应(real time p01ymerase chain action)法检测COX I和coxⅣ的基因表达。结果:CIH组大鼠颏舌肌线粒体C0X活性为(O.143±O.029)jkat/mg,与Nc组[(0.273±0.058)ukat/mg]相比显著降低(P<0.01),E+CIH组COX活性[(O.203±O.073)ukat/mg]较CIH组有所回升(P<0.05),但仍显著低于NC组(P<0.05)。CIH组与E+CIH组COX I蛋白表达分别为(10.789±8.144)和(25.593±11.108),与NC组(47.325±7.502)相比均显著降低(P<0.01),且E+CIH组COX I蛋白表达显著高于CIH组(P<O.05)。3组COXⅣ蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05);3组COX I、COXⅣ mRNA表达量的差异无统计学意义(P>O.05)。结论CIH可抑制大鼠颏舌肌线粒体COX蛋白表达及活性,而雌激素干预可部分恢复C0X蛋白表达及活性。

关键词: 雌激素类, 细胞色素c类, 缺氧, 基因表达 颏舌肌

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2011年06月07日

【期刊论文】叶绿素缺乏油菜突变体的LHCⅡ多肽组成、蛋白含量与cab易基因转录研究

赵云, 张年辉, 杜林方*, 林宏辉, 梁厚果

西北植物学报,2004,24(3):484~487,-0001,():

摘要

与野生型油菜相比,叶绿素缺乏油菜突变体Cr3529 LHCⅡ多肽组成并未发生改变,但其含量却都明显降低。RNA印迹及点杂交结果都显示出Cr352cab基因的转录增加。这些结果表明:该叶绿素缺乏突变体仅影响LHCⅡ多肽的蛋白含量;并未影响其组成;突变体LHCⅡ蛋白量的减少并非cab基因转录降低所致。可见转录水平的调节仅对LHCⅡ在类囊体膜上的积累起有限作用;cab核编码基因转录活性的维持和质体信号的产生并不要求有结构完整的叶绿体的存在。

关键词: 叶绿素缺乏突变体, 油菜, 捕光色素蛋白复合物, cab基因表达 质体信号

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2011年05月27日

【期刊论文】酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因的克隆及表达

游松, 蒋雅红, 任杰, 谢兰漪

沈阳药科大学学报,2002,19(4):291~293,-0001,():

摘要

目的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)丙酮酸脱羧酶(PDC)基因的克隆和表达。方法利用PCR技术从酿酒酵母的总cDNA中钓取出PDCsc基因,构建其高效表达质粒,利用Ion和ompT蛋白酶缺陷株Escherichia coli BL21(DE3)进行表达。结果扩增出长约1.7kb的PDCsc基因,成功构建其表达质粒pSC-22b,对转化菌株的SDS-PAGE分析结果显示:该基因获得高效表达,表达蛋白占细胞总蛋白的18.6%。结论成功构建高效表达PDCsc基因的工程菌株,为实现利用PDCsc进行的生物转化奠定基础。

关键词: 酿酒酵母, 丙酮酸脱羧酶, 克隆, 高交表达

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2011年05月27日

【期刊论文】利用重组F26G酶实现呋甾皂苷向螺甾皂苷的体外生物转化

游松, 王亮, 游松*, 蒋雅红, 姚新生

中国药物化学杂志,2001,11(6):326~328,-0001,():

摘要

用BamH I和Xba I两种限制酶酶切质粒pKG27,获得了编码F26G(F26G:furostanol gly-coside 26-O-β-glucosidase)的cDNA,然后将期重组到表达载体pET-22b上而得到pET-22b-CSF26G,利用大肠杆菌E.coli BL21进行表达,用胞内可溶蛋白进行酶反应,通过TLC、HPLC分析证明重组菌表达出高活性的F26G酶,并实现了呋甾皂苷的体外生物转化。

关键词: F26G, 重组, 表达 呋甾皂苷, 生物转化

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2011年05月23日

【期刊论文】棉纤维特异表达蓝铜蛋白基因(GhBCP1)的克隆与鉴定

孙杰, 田琴, 李艳军, 郭芳, 张新宇, 王海云

中国农业科学,2010,43(3):612-617,-0001,():

摘要

【目的】对从棉纤维细胞分离获得的基因GhBCP1进行序列和表达分析,初步分析其功能。【方法】采用mRNA荧光差异显示结合cDNA末端快速扩增技术克隆基因全长cDNA序列,用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推定氨基酸序列进行分析,并用荧光实时定量PCR法研究基因在不同组织中的表达。【结果】克隆了一个棉纤维特异表达基因的全长cDNA,命名为GhBCP1(GenBank登录号:EF222282),该cDNA全长721bp,含有一个编码176个氨基酸蛋白的开放阅读框。BLAST分析表明该基因所编码产物为一个蓝铜蛋白。Southern杂交分析表明该基因在陆地棉(Gossypium hirsytumL.)中有2个拷贝。实时荧光定量PCR分析发现该基因在棉花纤维细胞特异表达,在纤维发育过程中,GhBCP1转录产物的累积主要发生在纤维细胞发育由伸长向次生壁合成转换阶段。【结论】GhBCP1基因的组织特异性和发育阶段性表达初步证明该基因的功能可能与次生壁合成的起始密切相关。

关键词: 棉花, 纤维, 蓝铜蛋白, 特异表达

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2011年05月23日

【期刊论文】利用mRNA荧光差异显示技术规模化筛选棉纤维特异表达基因

孙杰, 李园莉, 汪若海, 夏桂先*

生物工程学报,2004,20(1):39~42,-0001,():

摘要

以陆地棉(Gossypium hirsutumL.)品种TM-1开花后9d、21d、27d三个不同发育时期的棉花纤维为材料,利用mRNA荧光差异显示(FDD)技术,筛选到109个差异显示的cDNA片段。在此基础上,结合两轮反Northem杂交筛选和Nonhern杂交分析,获得了多个仅在棉花纤维细胞中特异表达或在纤维中优先表达基因的cDNA片段,序列测定和数据库搜索分析表明,这些cDNA片段中的多数还未有报道。本工作为克隆上述基因的全长cDNA,并进一步研究它们在棉纤维发育中的功能奠定了基础。

关键词: 棉花,, 纤维特异表达基因,, 荧光差异显示

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2011年05月11日

【期刊论文】应力松弛接骨板对骨折愈合胶原基因表达及细胞超微结构的影响

张先龙, 戴戎, 汤亭亭

中华骨科杂志,2000,20(6):362~365,-0001,():

摘要

目的 观察采用应力松弛接骨板固定对骨折愈合的影响及机制。方法 对24只新西兰兔两侧胫骨干截骨,分别采用应力松弛接骨板和坚硬接骨板固定,术后2、4及8周采用核酸原位杂交技术和透射电镜观察骨折愈合过程中骨痂胶原mRNA的表达及细胞超微结构变化。结果 骨折后2周,应力松弛接骨板组骨痂内见较多功能活跃的成骨细胞和成软骨细胞,分别表达Ⅰ型和Ⅱ型胶原mRNA;4周时成骨细胞数量明显增加,功能更加活跃,Ⅰ型胶原表达水平也达到高峰。此时活跃的破骨细胞开始出现;8周时仍可见到较多功能活跃的成骨细胞、破骨细胞及Ⅰ型胶原mRNA表达。而坚硬接骨板组2、4周时,成骨细胞数量及功能均不及应力松弛接骨板组;8周时破骨细胞功能活跃,伴有相邻骨细胞骨溶解现象。结论 应力松弛接骨板的应力松弛作用,促进了局部间充质细胞向成骨细胞和成软骨细胞分化,并且高水平表达Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA,有利于骨痂改建的顺利进行。

关键词: 骨折愈合, 基因表达 成骨细胞

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2011年05月11日

【期刊论文】一个在中华绒螯蟹性腺中特异表达的Sox基因HMG盒区的克隆与鉴定*

邱高峰, 亓海燕, 邱高峰**

自然科学进展,2009,19(3):279~284,-0001,():

摘要

根据人的睾丸决定因子(SRY)的高速泳动组蛋白区设计简并引物,以中华绒螯蟹雌雄个体的基因组DNA为模板进行PCR扩增,从雌雄体均扩出220bp左右的条带,说明中华绒螯蟹中存在SRY基因的同源体,且无性别差异。经克隆、测序后得到两条SRY盒区相关基因(Sox基因)片段,ES1和ES2,其序列与人相应Sox基因保守区的最高同源性分别为66%和93%。ESl和ES2在成体8种组织中的检测结果表明,ES1在精巢、肌肉、心脏、肝脏、鳃、胸神经团、不同时期的卵巢及排出的成熟卵等组织中均表达,而ES2只在精巢、成熟的卵巢以及排出的成熟卵中有表达,说明ES2基因可能参与性腺的发育和早期胚胎发育过程。

关键词: 中华绒螯蟹 Sex基因 ItMG盒区 表达分析

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2011年04月25日

【期刊论文】潍坊萝卜中芜菁花叶病毒分离物的分子特性及C基因的表达

李向东, 刘金亮, 于晓庆, 田延平, 都杰, 竺晓平, 李向东*, 严敦余

园艺学报2006,33 (1):84~88,-0001,():

摘要

从表现红心病的潍坊萝卜块根上得到一芜菁花叶病毒(Turno mosaic virus,TuMV)分离物(TuMV.Ra),通过RT-PCR获得了该分离物的外壳蛋白(CP)基因,对其进行了序列测定,并将其核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中登录的其它20个TuMV萝卜分离物的相应序列进行比较和分析。结果表明,TuMV.Ra与这20个分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89.9%~99.0%,CP氨基酸序列同源性为94.8%~99.7% ;其中与中国浙江杭州萝卜的两个分离物HZLB1、HZLB2同源性最高,核苷酸序列的同源性为98.7%和99.0%,氨基酸序列同源性为99.0%和99.7%。TuMV-Ra与1999年从表现相同症状的潍坊萝b得到的分离物CHINA-wF CP基因核苷酸同源性为93.66%,氨基酸同源性为96.53%,说明病毒发生了比较大的变异,而且变异的位点主要在CP的N末端。将TuMV-Ra cP基因克隆到原核表达载体pET-22b(+),在大肠杆菌BI21(DE3)中表达出分子量为38 kD的融合蛋白。Western blotting分析证明TuMV-Ra CP在大肠杆菌中得到了正确表达。

关键词: 芜菁花叶病毒, 萝卜, CP基因, 分子特性, 基因表达

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2011年04月21日

【期刊论文】肿瘤基因表达谱——肿瘤免疫学研究的新策略

葛海良, 王颖, 袁明

国外医学分子生物学分册,2002,24(4):212~214,-0001,():

摘要

基因表达谱代表了细胞中基因表达的状况。通过比较肿瘤细胞和相应正常组织细胞的基因表达谱所获得的信息,就可获得在肿瘤和正常细胞中差异表达的基因。进一步研究这些基因的结构和功能。对研究肿瘤的发生发展和肿瘤的I临床诊断和治疗都具有重要的意义。本文着重介绍了目前常用的研究肿瘤基因表达谱的各种方法。包括mRNA水平和蛋白质水平肿瘤基因表达谱的研究方法。国内外的最新研究进展及应用前景。

关键词: 肿瘤, 基因图谱, 基因表达调控

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2011年04月18日

【期刊论文】水稻RAD21同源基因(OsRIX4)存在多种mRNA选择性剪接模式

裴雁曦, 董海涛①*, 郭小勤①, 裴雁曦①, 戴承恩①, 方永启①, 屠奇超①, 庄杰云②, 赵东④, 郑康乐②, 李德葆①*

科学通报,2004,52(10):1147~1152,-0001,():

摘要

水稻RAD21同源基因(OsRIX4)存在着多种mRNA选择性剪接模式,从中鉴定出一类特殊的剪接模式,即一个组成型外显子内部的部分片段可以被单独剪除,该类型不属于已知的5类剪接模式之一。这种剪接模式所产生的转录本能够独立地得到翻译。DsRIX4基因多转录本的表达各具组织特异性,其中OsRIX4-4和OsRIX-5转录本的表达量与水稻育性呈正相关。这种剪接模式的发现,可以为理解和定义植物mRNA剪接模式提供新的内容,也凸显转录后mRNA加工和调控机制的复杂性。

关键词: mRNA 表达 选择性剪接 翻译 水稻

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2011年04月18日

【期刊论文】茎瘤芥胞质雄性不育性与线粒体T基因选择性剪接有关

裴雁曦, 裴雁曦①, 陈竹君②, 曹家树②, 陈学军③, 刘晓辉①

科学通报,2004,49(22):2312~2317,-0001,():

摘要

从茎瘤芥胞质雄性不育(cytoplasmic male sterile,CMS)系线粒体cDNA中扩增获得了CMS相关T基因的2个不同转录本,分别命名为T1170和T1243。序列分析表明,T1243是一个保留了内含子的转录本,该内含子具备Ⅱ型内含子基本特征。这2个转录本是T基因选择性剪接的产物。RT-PCR分析表明,在苗期,T基因转录水平的表达以T1170转录本为主;随着发育时期变化,该转录本表达逐渐减少,而另一个转录本T1243表达丰度增加;到盛花期,该基因的表达以后者为主。Northern杂交验证了这一结果。推断茎瘤芥胞质雄性不育性和T基因转录后选择性剪接有关。

关键词: 茎瘤芥(, Brassica juncea var., tumida Tsen et Lee), 胞质雄性不育 选择性剪接 转录 表达

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2011年04月06日

【期刊论文】日本血吸虫22.6kDa重组抗原的高效融合表达及特性鉴定*

苏川, 马磊, 吴海玮, 沈蕾, 陈淑贞, 张兆松, 吴观陵

中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1999,17(4):205~208,-0001,():

摘要

目的:大量获得纯化的日本血吸虫22.6kDa重组抗原。方法:用PCR方法将其编码基因序列经改造后亚克隆入载体质粒pGEX-1λT进行表达。结果:得到了融合表达的蛋白抗原。此融合蛋白表达量大,用凝血酶酶切后易大量制备纯化的重组22.6kDa抗原。结论:以此融合蛋白免疫的小鼠抗血清进行免疫印迹试验,表明Sj22.6/Sj26GST融合重组蛋白具有与Sj22.6蛋白一样的免疫学活性。

关键词: 日本血吸虫 22., 6kDa抗原 重组抗原 融合表达

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2011年03月28日

【期刊论文】鸡bcl-2表达质粒的构建及其对转染细胞凋亡的影响

张书霞, 步志高, 陈万芳

中国农业科学,13(6):88~94,-0001,():

摘要

构建了CMV驱动及牛生长激素polyA加尾信号修饰的bcl-2cDNA真核表达质粒pCDCB1。随后,采用脂质体转染方法,将扩增并纯化的pCDCB1转染至培养的SPF鸡胚次代单层成纤维细胞(CEF)内,96h后收集全部贴壁及上清脱落细胞,用Dotblot检测bcl-2的表达,用流式细胞术测定其细胞凋亡率。结果,pCDCB1转染后96h,bcl-2在CEF中呈高度表达;CEF平均凋亡率为1.14%,明显低于转染空白载体质粒的对照组7.64%的凋亡率,DNA合成期(S期)细胞为21.58%,也低于对照组。结果证实鸡bcl-2的表达可显著抑制体外培养CEF,亡进程,其效应与细胞DNA合成和增殖无关。

关键词: bcl 2, cDNA, 真核表达质粒, 转染, 细胞凋亡

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2011年03月28日

【期刊论文】bcl-2基因在成年和胚胎鸡免疫器官中的表达及其与细胞凋亡的关系*

张书霞, 陈万芳, 于勇, 鲍恩东

南京农业大学学报,1999,22(4):65~68,-0001,():

摘要

用一步法从17日龄来克亨SPF鸡胚和90日龄成年鸡的法氏囊、脾脏和胸腺组织中提取总RNA(TRNA),用鸡B-细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)cDNA探针进行Northernblot杂交。发现bcl-2在成年和胚胎鸡的不同免疫器官中表达量不同,成年鸡bcl-2的表达量多少依次为胸腺、脾脏、法氏囊,而胚胎鸡则是胸腺、法氏囊、脾脏。同时用流式细胞法测定这些器官的细胞凋亡情况,胚胎鸡法氏囊、脾脏和胸腺的细胞凋亡率分别是0.40%,0.68%和0.38%;成年鸡则是6.98%,1.17%和0.61%。结果表明,鸡bcl-2基因通过阻抑细胞凋亡直接调控正常免疫器官的发育,在淋巴细胞发育过程中bcl-2是免疫细胞亚型选择的重要调节物。

关键词: bcl-2, 鸡, 免疫器官, 表达 细胞凋亡

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2011年03月28日

【期刊论文】bcl-2在鸡马立克氏病肿瘤中的表达

张书霞, 陈万芳

畜牧兽医学报,32(1):58~63,-0001,():

摘要

用来克亨SPF鸡复制马立氏病(Marek'sdisease,MD)肿瘤模型,取肿瘤和相应正常组织,液氮保存。AGPC(AcldGuanidiniumThiocvanate-Phenol-Chloroform)法提取组织总RNA(TR-NA),紫外测定其浓度,甲醛变性胶电泳观察其纯度。将一个含鸡bcl-21.2kb片段的质粒(PTTCB1),经转化扩增,提取质粒DNA,限制性内切酶(RE)消化,回收纯化bcl-2片段,放射性α-32P标记,制成探针。通过Nothern分子杂交检测MD肿瘤组织中bcl-2的表达,并与相应的正常组织比较。结果:鸡MD肿瘤组织和相应正常组织中均有bcl-2的表达;MD肿瘤组织中bcl-2的表达显著高于相应的正常组织。结合已进行的凋亡研究表明,bcl-2表达产物通过阻遏细胞凋亡促进MD淋巴瘤的形成。

关键词: bcl-2基因, 马立克氏病, 肿瘤, 表达

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2011年03月28日

【期刊论文】水稻LRR型类受体蛋白激酶胞外区的原核表达及多克隆抗体制备*

张炜, 程彦伟**, 李亮**, 沈嵘, 齐耀程, 刘晓宇, 王宁, 张炜***

生物化学与生物物理进展,2008,35(9):1077~1083,-0001,():

摘要

前期研究表明,水稻根尖细胞质膜类受体蛋白激酶OsRLK的表达受盐胁迫诱导。为了进一步研究该激酶的生理功能,通过反转录PCR得到OsRLK胞外区cDNA片段,将其亚克隆至pET29a原核表达载体并在大肠杆菌中实现了高表达,表达量约为细胞总蛋白的30%。重组蛋白经SDS-PAGE分离,染色切胶收集后,作为抗原免疫新西兰家兔,分离抗血清,经纯化得到1:20000效价的多克隆抗体。Western blot结果显示,该抗体能特异识别在原核表达系统内表达的抗原,以及水稻根尖细胞质膜组分中的LRR型类受体蛋白激酶,并且在蛋白质水平证实该激酶为盐胁迫响应蛋白。

关键词: LRR型类受体蛋白激酶,, 水稻,, 原核表达,, 多克隆抗体

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2011年03月21日

【期刊论文】犬白细胞介素一2基因(IL-2)的克隆与表达

李祥瑞, 魏晓锋, 李春华, **徐立新

农业生物技术学报,2004,12(3):268~272,-0001,():

摘要

根据GenBank上发表的犬(Canis familiaris)IL-2基因序列,设计了1对引物。采用RT-PCR技术,以ConA刺激的犬外周血淋巴细胞为材料,从总RNA中扩增出犬IL-2基因。琼脂糖凝胶电泳显示扩增片段约为550 bp。分离纯化片段,克隆人pMD18-T载体,经酶切鉴定,测序结果显示,克隆的犬IL-2基因与GenBank上发表的序列一致,生物软件分析结果表明该序列与牛、羊和鹿的亲源性更近。构建表达质粒pET28-CaIL-2,转化大肠杆菌(Eschetichia coli)BL21,IPTG诱导表达,SDS-DPAGE电泳显示21.8kD左右的表达条带。MTT比色法测定活性结果表明:表达的重组犬IL-2蛋白具有极显著的体外增殖活化淋巴细胞的活性。

关键词: 犬, IL-2基因, 克隆, 表达

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2011年03月18日

【期刊论文】甲基对硫磷水解酶的重组表达及其纯化和性质研究

崔中利, 傅国平, 徐玮, 吴旭平, 李顺鹏

微生物学报,2004,44(3):356~360,-0001,():

摘要

用PCR方法获得甲基对硫磷水解酶编码基因,构建了重组表达质粒pET29a-mpd,将其转化至EscherichiacoliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,得到C2末端含有6个寡聚组氨酸的甲基对硫磷水解酶,用Ni2NTA亲和层析纯化得到具有活性的甲基对硫磷水解酶。测定了环境因素对酶活性的影响及酶动力学参数。甲基对硫磷水解酶水解甲基对硫磷时,最适pH8.6~8.8,最佳反应温度15℃;Mn2+、Zn2+、Cu2+可使酶活性增加15%~20%,Ca2+、Mg2+微弱地促进酶的作用,Ni2+对酶活性几乎无影响;1mmolPLEDTA•Na2+几乎不影响酶的活性,而10mmolPLEDTA•Na2+对甲基对硫磷水解酶有较强的抑制作用。甲基对硫磷水解酶水解乙基对硫磷时,最适pH816。25℃时,该酶对甲基对硫磷的米氏常数Km为(68.6±511)μmolPL,kcat为(45±6)S-1;对乙基对硫磷的米氏常数Km为(59.5±6.0)μmolPL,kcat为(8±1)S-1。kcatPKm表明甲基对硫磷水解酶对甲基对硫磷的催化效率更高。

关键词: 甲基对硫磷水解酶,, 基因表达,, Ni2NTA 亲和层析,, 酶活性

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2011年03月18日

【期刊论文】利用短短小芽孢杆菌启动子和信号肽编码序列构建穿梭分泌表达载体

崔中利, 张晓舟, 闫新, 李顺鹏*

微生物学报,2006,46(4):526~530,-0001,():

摘要

以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHI和PstI酶切位点,将PCR产物双酶切后克隆至穿梭载体pP43NMK的相应位点构建分泌表达载体pP15MK,插入片段置于该载体中mpd基因的上游,并使信号肽编码序列与去除了自身信号肽编码序列的mpd基因阅读框恰好融合。将pP15MK导入枯草杆菌构建表达菌株1A751(pP15MK),在短短小芽孢杆菌启动子和信号肽元件的带动下,mpd基因能够在表达菌株的对数生长期和稳定期持续性高效分泌表达,表达产物结合在细胞膜上;发酵液在48h酶活达到最高值7.79U/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的8.1倍。

关键词: 短短小芽孢杆菌, 启动子, 信号肽, 分泌表达 枯草芽孢杆菌

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