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2011年05月27日

【期刊论文】利用重组F26G酶实现呋甾皂苷向螺甾皂苷的体外生物转化

游松, 王亮, 游松*, 蒋雅红, 姚新生

中国药物化学杂志,2001,11(6):326~328,-0001,():

摘要

用BamH I和Xba I两种限制酶酶切质粒pKG27,获得了编码F26G(F26G:furostanol gly-coside 26-O-β-glucosidase)的cDNA,然后将期重组到表达载体pET-22b上而得到pET-22b-CSF26G,利用大肠杆菌E.coli BL21进行表达,用胞内可溶蛋白进行酶反应,通过TLC、HPLC分析证明重组菌表达出高活性的F26G酶,并实现了呋甾皂苷的体外生物转化。

关键词: F26G, 重组 表达, 呋甾皂苷, 生物转化

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2011年04月06日

【期刊论文】日本血吸虫22.6kDa重组抗原的高效融合表达及特性鉴定*

苏川, 马磊, 吴海玮, 沈蕾, 陈淑贞, 张兆松, 吴观陵

中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1999,17(4):205~208,-0001,():

摘要

目的:大量获得纯化的日本血吸虫22.6kDa重组抗原。方法:用PCR方法将其编码基因序列经改造后亚克隆入载体质粒pGEX-1λT进行表达。结果:得到了融合表达的蛋白抗原。此融合蛋白表达量大,用凝血酶酶切后易大量制备纯化的重组22.6kDa抗原。结论:以此融合蛋白免疫的小鼠抗血清进行免疫印迹试验,表明Sj22.6/Sj26GST融合重组蛋白具有与Sj22.6蛋白一样的免疫学活性。

关键词: 日本血吸虫 22., 6kDa抗原 重组抗原 融合表达

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2011年03月28日

【期刊论文】转谷氨酰胺酶对肉块冷黏结性能的影响

徐幸莲, 程巧芬, 周光宏

南京农业大学学报,2002,25(4):87~90,-0001,():

摘要

在对原料肉中添加0,5,10 g•kg-1转谷氨酰胺酶,分别与0,10,20,30,40 g•kg- 1大豆分离蛋白、乳清浓缩蛋白、酪蛋白、明胶蛋白和卵清蛋白组成5个试验组。在4℃条件下催化反应0~24 h,经成型、解冻后,用破碎样品时所做的功作为指标,测定不同试验组原料肉的冷黏结性能。结果显示,4℃、20 g•kg-1NaCl 、40 g•kg-1大豆分离蛋白、5g•kg- 1转谷氨酰胺酶、反应时间2~5h,可以使原料肉获得较强的黏结能力(2 42315 g•s)。转谷氨酰胺酶低温赋形性能的研究为原料肉的综合利用以及新型肉制品的开发提供了理论依据。

关键词: 转谷氨酶胺酶, 非肉蛋白, 冷黏结, 重组

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2011年03月28日

【期刊论文】利用RIl和CSSL群体检测水稻种子休眠性QTL

江玲, 曹雅君, ①, 王春明, 翟虎渠, 万建民, ②, 吉村醇

遗传学报,2003,30(5):453~458,-0001,():

摘要

利用由粳稻品种Asominori与籼稻品种IR24的杂交组合衍生的重组自交F10家系(RecombinantInbredLinese,Ril)群体及其衍生的染色体片段置换系(ChromosomeSegmentSubstitutionLines,CSSl)群体,进行了种子休眠性QTL的检测和遗传效应分析。其中CSSL群体有2个,即CSSL1(以Asominori为背景,置换片段来自IR24)和CSSL2(以IR24为背景,置换片段来自Asominori)。在RIL群体上共检测到3个种子休眠性QTL,分别位于第3、6和9染色体上;在CSSL1群体中检测到分布在第1、3和7染色体上的3个休眠性QTL;而在CSSL2群体上检测到的3个QTL则分别位于第1、2和7染色体上。同时在两套CSSL群体上,分别检测到位于第1、7染色体上位置相近且效应一致的休眠性QTL,分析表明其所在的Asominori片段含对种子休眠性的增效基因,相应的IR24片段含有减效基因。

关键词: 水稻, 种子休眠性, 重组自交系, 染色体片段置换系, 数量性状基因座

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2011年03月28日

【期刊论文】水稻种子休眠性QTL定位及其对干热处理的响应

江玲, 唐九友, 王春明, 刘世家, 陈亮明, 翟虎渠, 吉村醇, 万建民

中国农业科学,2004,37(12):1791~1796,-0001,():

摘要

利用Kinmaze(粳稻)/DV85(籼稻)杂交组合衍生的重组自交F11家系(RecombinantInbredLines,RILs)进行了种子休眠性QTL的检测和遗传效应分析。以抽穗后35d的种子发芽率作为种子休眠性的表型值,分析亲本和81个家系的休眠性表现,利用WindowsQTLCartographer1.13a软件共检测到4个种子休眠性QTL,分别位于第2、5、11染色体上其中第2染色体存在2个QTL,各QTL的贡献率变幅8.37%~17.40%。进一步研究了这些休眠性基因位点对干热破除休眠处理的响应,结果表明,来自DV85增强休眠性的QTL位点qDOR-2-1和qDOR-5,以及来自Kinmaze增强休眠性的QTL位点qDOR-11,易被干热处理破除休眠,这3个QTL效应较强,可在种子休眠性状的遗传改良中加以利用;而位于第2染色体上标记XNpb227-XNpb132之间的QTL位点qDOR-2-2却不易被干热处理破除休眠,该位点增强休眠性的基因来自DV85。

关键词: 水稻, 种子休眠性, 重组自交系, 数量性状基因座, 干热破除休眠

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2011年03月28日

【期刊论文】水稻低温发芽力QTL定位和遗传分析

江玲, 侯名语, 王春明, 万建民, ①, 安井秀, 吉村醇

遗传学报,2004,31(7):701~706,-0001,():

摘要

以Kinmaze(粳稻)/DV85(籼稻)的重组自交系F10世代群体检测了影响水稻低温发芽力性状的数量性状基因座(QTL)。通过测定不同时期的低温发芽率,确定了15℃低温、第10d为检测低温发芽率的最适处理温度和时间,该条件下能够充分检测到品种的差异和分离群体的变异。通过设置对照,证明所检测的低温发芽率不受休眠及二次休眠的影响。15℃低温、第10d时,Kinmaze的发芽率达35%,DV85的发芽率只有7%,两亲本之间存在明显差异,该群体81个家系的低温发芽率变幅在0%~99%之间。QTl分析结果检测到5个与低温发芽力相关的基因座,分别位于第2、6、7、11和12染色体上。位于第2、6和11染色体上的qLTG-2、qLTG-6和qLTG-11贡献率分别为27.1%17.1%和15.0%,对低温发芽力性状的增效基因来自DV85;位于第7、12染色体上qLTG-7和qLTG-12的贡献率分别为22.9%和8.8%增效基因来自Kinmaze。其中,qLTG-6和qLTG-11在染色体上的位置与已报道的有关低温发芽力QTL位置相似,而qLTG-2、qLTG-7和qLTG-12为新检测的低温发芽力基因座。上位性分析结果显示,第3与第5染色体上存在影响低温发芽力的互作位点,其互作可以提高低温发芽力,而第7染色体上的两位点之间的互作降低了低温发芽力。

关键词: 水稻, 重组自交系, 低温发芽力, QTL

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2011年03月28日

【期刊论文】利用重组自交系群体检测水稻种子休眠性数量性状位点

江玲, 曹雅君, 王春明, 刘世家, 陈亮明, 万建民*

南京农业大学学报,2003,26(3):110~112,-0001,():

摘要

利用由191个家系组成的密阳23/秋光重组自交家系(recombinantinbredlines,RIL)F10代群体,进行种子休眠性数量性状基因座(quantitativetraitlocus,QTL)的检测和遗传效应分析。以抽穗后35d的种子发芽率作为种子休眠性的表型值,分析亲本和191个RIL的休眠性表现。通过WinQTLCart软件分析,检测到分别位于第5和第8染色体上的2个水稻种子休眠性QTL,其中位于第8染色体上QTL的加性效应为负值,表明该休眠性基因位点来源于亲本秋光;第5染色体上QTL的加性效应为正值,表明该休眠性减效基因来源于亲本密阳23。

关键词: 水稻, 重组自交系群体, 种子休眠性, 数量性状位点

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2011年03月21日

【期刊论文】重组鸡IL-2增强鸡四联灭活苗免疫效果的研究

李祥瑞, 费聿锋, 钱建飞, 凌雯, 李银, 张则斌, 王贵升, 李祥瑞*

畜牧与兽医,2004,36(4):9~11,-0001,():

摘要

使用在原核 表达系统中表达的重组鸡白细胞介素2(IL-2)蛋白,经过初步的分享纯化,与鸡新城疫-禽流感-法氏囊-传染性支气管炎四联由乳剂灭活苗同时使用,检测其对疫苗垢免疫增强效果。试验共分5组,每组10只鸡,其中对照组只注射四联油乳剂灭活苗:4个试验组,在注射疫苗的同时分别注射重组鸡IL-2蛋白0.05mg、0.01mg、0.15mg、0.20mg。试验组与对照组同时各注射新城疫等多联油苗0.5ml。采用HA,HI试验测定鸡新城疫、禽流感抗体滴度。结果表明,重组鸡IL-2对该四联油乳剂灭活苗有较强的免疫增强作用。以第3、4组的增强效果较为明显,其中对鸡新城疫病毒和禽流感抗 原的抗体交价,与对照组相比分别提高2.4~2.8和2.2~3.0个滴度。重组鸡IL-2在使用过程中,没有发现任何毒副作用,证明是一种安全高效的免疫增强剂。

关键词: 重组鸡IL-2, 油苗, 鸡新城疫, 禽流感, 抗体

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2010年12月31日

【期刊论文】适用于疫苗株筛选的痘苗病毒载体的构建

饶力群, 周小云, 刘颖, 王芙, 戴凯凡, 段丹丽, 邵一鸣

病毒学报,2004,20(4):315~321,-0001,():

摘要

为构建适用于疫苗株筛选的痘苗病毒载体,利用标记瞬时稳定的原理,在痘苗病毒单选择标记载体psc65 的基础上,构建成带有neo 和L acZ 双选择标记的痘苗病毒载体pVI75。为检验载体pVI75的有效性,将HIV-1合成基因syngpnef 插入到载体pVI75 上,构建成转移质粒pVI75-syngpnef,并与天坛株752-1痘苗病毒共转染CEF细胞。筛选得到的重组病毒经PCR 和Dot blot 检验表明,标记基因已被删除,而目的基因被整合到痘苗病毒基因组上。Westem blot 检测结果表明,目的基因的表达正确。痘苗病毒载体pVI75的构建使得疫苗株筛选的工作量大为降低,时间大大缩短,为利用痘苗病毒载体构建重组病毒疫苗株的研究提供了参考。

关键词: 痘苗病毒, 载体, 重组痘苗病毒, 选择标记

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2010年12月16日

【期刊论文】丙型肝炎病毒重组蛋白的免疫保护性

魏林, 李广学, 曾瑞红, 凌世淦, 张贺秋, 姚智燕魏林

中华传染病杂志,2010,28(1):19~23,-0001,():

摘要

目的 研究两种HCV重组蛋白联合免疫小鼠所诱导的免疫应答及免疫保护作用。方法 用两种重组蛋白HCV-T和HCV-第一高变区多片段重组融合蛋白(F4HVR1)分别与联合免疫BALB/e小鼠,共免疫3次,用ELISA方法测定血清特异性抗体;末次免疫后14 d处死5只小鼠,分离小鼠脾细胞。体外检测IFN-7、IL-4和行CTL杀伤实验;剩余的小鼠背部皮下注射1.0×10。个SP2/0-NS3细胞,观察其保护作用。组间均数差异采用LSD-t检验。结果 与PBS组相比,用HCV-T和HCV-F4HVRl联合免疫诱导了针对HCV-F4HVRl的特异性的IgG(t-3.815,3.762,P<0.05)、高水平的HCV-NS3特异性的CTL效应(t=3.971,P<0.05)和高水平的IL-4(t=3.813,3.426,3.671,P<O.05)和IFN-7(t-3.512,3.417,P<0.05)的分泌。结论 用HCv.T和HCV-F4HVRl联合免疫小鼠可诱导出高水平的特异性体液免疫和细胞免疫,能有效地预防SP2/O-NS3细胞的攻击。

关键词: 肝炎病毒属, 肝炎,, 丙型, 病毒性肝炎疫苗, 抗体生成, 免疫。细胞, 重组蛋白质类

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2010年12月08日

【期刊论文】乙型肝炎病毒聚合酶在重组腺病毒系统中的表达

钟江

,-0001,():

摘要

乙型肝炎是一个世蚧范围的传染病,在我国为害尤其严重。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)作为引起人类急性、慢性肝炎的主要病原体之一,属嗜肝DNA病毒科。虽然其基因组仅有3.2kb,但基复制和致病机理过程复杂,突变众多,目前还没有根治的方法。因此,发展抗乙肝药物的研究显得尤为必要。乙肝病毒聚合酶(HBV polymerase)是病毒复制的关键酶,具有TP(蛋白引物)、间隔区(删除大部分后不影响功能)、RT(逆转录酶)、RnaseH等多个功能区域,是抗乙肝药物作用的理想位点。乙肝聚合酶很难在感染细胞中分离纯化,也一直很难在哺乳动物细胞中大量重组表达,严重阻碍了抗乙肝药物和乙肝疫苗的研究。本研究选取高复制型的临床分离株HBV-56,克隆拼接了全长的多聚酶基因,并将基插入穿梭质粒,通过重组穿梭质粒在细菌细胞内与带有腺病毒基因组的质粒发生同源重组,得到带有HBV多聚酶的重组腺病毒质粒。该质粒线性化后转染人胚肾细胞转化细胞系293,成功地得了重组病毒。用该重组病毒感染293细胞系,SDS-PAGE检测,发现了新的蛋白的合成,该蛋白质的分子量与文献报道的乙肝聚合酶的分子量一致,用PCR的方法,初步证明了所表达的乙肝聚合酶具有逆转录酶的活性,合成了对应于HBV聚合酶基因的DNA分子。这一结果将促进对于抗乙肝药物研究和对乙肝病毒复制机制的认识。

关键词: 乙型肝炎病毒聚合酶, 重组腺病毒, 半定量PCR, 逆转录酶

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2010年12月07日

【期刊论文】重组苏芸金杆菌杀虫晶胞蛋白的高效表达

王嘉福, SupatATTATHOM

,-0001,():

摘要

重组质粒psC66d(Cry IAb601)转化大肠杆菌DH5a后,接种TCB培养基,经SDSPAGE电泳和电镜分析,晶胞蛋白基因在大肠杆菌细胞中得到高效表达,表达产物分子量约130KD,在细菌细胞中形成卵圆形包涵体。比较了重组菌株在不同培养基中的生长及晶胞蛋白的表达水平,结果说明重组茵株在IB及2×YT培养基中的生长及表达均较低,在TcB培养基中细菌生长良好,晶胞蛋白高效表达,表达量可达细菌总蛋白的63.4%,较出发菌株GH9601增加17.8倍。测定了纯化的晶胞蛋白对4种鳞翅目昆虫的杀虫活性。

关键词: 苏芸金杆茵, 重组DNA, 杀虫晶胞蛋白, 表达

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2010年11月30日

【期刊论文】应用杆状病毒载体表达狂犬病病毒糖蛋白*

罗廷荣, 源宣之, 金城俊夫

广西农业生物科学,1999,18(4):261~266,-0001,():

摘要

本试验利用杆状病毒载体成功地表达狂犬病病毒糖(G)蛋白。从转染重组了日本动物用狂犬病病毒疫苗株RCHL株G蛋白基因的转移载体和野生型杆状病毒DNA的Sf-9细胞中,分离出2个重组杆状病毒克隆。应用印渍法和荧光抗体法(IFA)从重组杆状病毒感染的Sf-9细胞检出了狂犬病毒G蛋白。Sf-9细胞表达的G蛋白与狂犬病毒RCHL株感染NA细胞的G蛋白的分子量一致。35个抗RCHL株G蛋白的单克隆抗体均与重组杆状病毒感染的Sf-9细胞反应,表明表达的G蛋白的抗原性没有发生变异。表达的G蛋白主要分布在Sf-9细胞的膜表面,形成类似环状的荧光,这种荧光与RCHL株感染的NA细胞的荧光相同。

关键词: 狂犬病病毒, 糖蛋白, 重组杆状病毒

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2010年08月30日

【期刊论文】基于制造规范管理外包决策流程重组

吴锋, 李怀祖

管理学报,2005,9(5):568-571,-0001,():

摘要

界定了影响企业长期竞争力、在制造过程中充当制造商与供应商沟通语言的制造规范,分析了决策流程在战略外包中的必要性;对现有外包决策流程进行了简单回顾,指出其弊端是以保证企业连续生产和获取企业短期利润为目标, 没有从核心制造能力(产品定义与制造技术规范)的获取与保持等方面考虑外包决策;由此对现有流程从决策目标、指标、结果和供应商选择等多个方面进行了重组。

关键词: 外包, 流程重组 决策, 制造规范

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2010年03月07日

【期刊论文】粒度区分和可调的无线流媒体可靠传输策略

喻莉, 汪恒晶, 戴声奎, 罗宁

微电子学与计算机,2005,22(8):121~127,-0001,():

摘要

为实现无线接入流媒体可靠传输和降低应用层设计复杂度,提出结合交织编码和RS 编码,实现对应用层数据有效的分帧/重组,区分数据重要级别并采用不平等粒度的保护,支持根据信道状况对保护粒度和帧长度的自适应调节。该策略增强了传输层功能,实现了灵活的数据保护方式,显著提高了无线流媒体的传输质量。

关键词: 流媒体,, 交织,, 不平等保护,, 分帧/, 重组

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2009年11月09日

【期刊论文】Red/ET同源重组介导细菌人工染色体的快速修饰*

粟永萍, 王军平)**, 张友明), 粟永萍)

生物化学与生物物理进展,2005,32(5):468~473,-0001,():

摘要

随着基因组测序工程的实施与完成,如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体(BAC)进行有目的修饰,已成为功能基因组学研究的一个重要环节。应用新近优化的Red/ET同源重组技术对目标BAC进行修饰,以pSClOI-BAD-gbaA为依托质粒,采用rpsL-ne。为正/反向筛选系统,可以快速、高效地对BAC进行剪切、插入、替换等操作,其中能够进行抗性筛选的一步BAC修饰只需一周时间,以插入非抗性标记基因Cre为代表的两步BAC修饰在两周内即可完成。通过阿拉伯多糖诱导调控和简单地变化培养温度,能使pSClOI-BAD-gbaA依托质粒在发挥完Red/ET同源重组作用后自然消失,最终获得完整而纯净的修饰后BAC,为加快功能基因组学研究提供了一个可靠的实验平台

关键词: RedET同源重组,, BAC修饰,, 功能基凶组

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2009年11月02日

【期刊论文】腺病毒介导的低氧诱导因子-1α基因对大鼠缺血再灌注后脑梗死体积影响的初步观察 *

胡长林, 陶陶, 陈莉芬, 唐宏

复旦学报(医学版),2005,32(5):594~597,-0001,():

摘要

目的 探讨腺病毒介导的低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因对大鼠缺血再灌注后脑梗死体积的影响。方法构建HIF-1α基因的重组腺病毒(Adv-HIF-lα),建立大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血(MCAO)模型:(1)将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒(Adv)于MCAO后立即注射人缺血侧脑室,观察其在脑内的表达部位和持续时间;(2)动物被随机分为4组:假手术(sham)组、缺血再灌注(IR)组、Adv-HIF-1α组、Adv组,除sham组外.其余3组均于MCAO后立即在缺血侧脑室分别注射磷酸盐缓冲液、Adv-HIF-1α基因和Adv,治疗72 h,取大脑,平均切成6片,用2,3,5一三苯基氯化四氮唑染色,以观察Adv-HIF-1α对大鼠脑梗死体积的影响 结果 注射Adv后.GFP仅在大鼠双侧侧脑室壁和脑室内的脉络丛及室管膜上皮细胞表达,持续2周左右;Adv-HIF-1α能明显缩小脑梗死体积,分别与IR组和Adv组相比有显著性差异(P<0.05) 结论 Adv.HIF-1α能显著缩小大鼠缺血再灌注的脑梗死体积,提示其具有治疗缺血性卒中的作用。

关键词: 低氧诱导因子-1α, 局灶性脑缺血, 重组腺病毒

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2009年11月01日

【期刊论文】用体外点突变技术构建乙型肝炎病毒"a"抗原决定簇基因变异体的表达克隆

任红

重庆医科大学学报,21:97~100,-0001,():

摘要

通过基因重组方法构建含HBVS基因的噬菌粒载体pBluescnpt ks+HBVS。利用此重组载体,制备了HBVS基因的单链DNA模板。经体外寡核苷酸介导的人工定点突变技术。突变HBV的“a”抗原头定族基因,从而获得一系列共12种S基因的“a”头定簇基因变异型克隆。分别将其亚克隆至真核表达载体pMEp4上,转染人肝癌细胞系HepG2,经筛选获表达HBV“a”抗原头定簇基因变异抗原的表达细胞克隆。

关键词: HBV基因变异, 体外突变, 基因重组

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2009年10月24日

【期刊论文】CXCR4短发夹shRNA表达质粒的构建

李少林, 杜铭, 李静

重庆医学,2005,34(6):892~896,-0001,():

摘要

目的 构建趋化因子受体CXCR4shRNA质粒重组体,并进行序列分析,为下一步探索肿瘤基因治疗的新途径打好基础。方法 设计有小发夹结构的两条DNA序列。经退火成互补双链,再克隆至Psilencer2. 1-U6 neo质粒栽体中构建重组体,转化DH5a菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。结果 成功构建了CXCR4hRNA质粒重组体。结论 CXCR4 shRNA质粒重组体的成功构建为研究CXCR4靶向RNA干扰抗肿瘤的作用打下基础。

关键词: CXCR4, RNA干扰, 重组体, 序列分析

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2009年10月21日

【期刊论文】pET15b-EGFP原核表达载体的构建及其表达和纯化

王一飞, 董晓, 王家宁黄永章郭凌郧

郧阳医学院学报,2005,24(6):321~325,-0001,():

摘要

目的:利用中间载体pGEM-T easy vector构建表达型载体pET15b-EGFP,在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白EGFP并将其纯化。方法:以质粒pLEGFP-C1为模板采用聚合酶链反应(PCR)的方法特异性扩增EGFP cD-NA序列,利用Taq DNA聚合酶的非模板依赖性末端转移酶活性催化PCR扩增的EGFP序列和三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,在EGFP序列两3’端加“ ,将纯化后的EGFP序列与中间载体pGEM-T easy vector连接后转化感受态大肠杆菌DH5ct,经蓝白筛选,挑取白色单菌落进行扩增、酶切鉴定,正确重组的质粒命名为pGEM-T-EGFP用XhoI和BamH1分别双酶切pGEM-T-EGFP和pET15b,低熔点琼脂糖回收EGFP eDNA和线性化的pET15b片段后将两片段相连,转化感受态大肠杆菌DH5ct并对重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序,获取正确重组的表达型质粒并命名为pET15b-EGFP。将正确重组的质粒pET15b-EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基p-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。利用表达蛋白N端的组氨酸“标签”(His-tag)进行N一树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化蛋白质。结杲:经测序证实重组质粒pET15b-EGFP中的EGFP eDNA序列与从Clontech公司购买的质粒pLEGFP-C1中的EGFP eDNA序列完全一致,从而成功构建了表达型重组质粒pET15b-EGFP。pET15b-EGFP转化感受态大肠杆菌BI21(DE )并经诱导后得到高效表达,表达量可达66me,/100ml菌液,SDS-PAGE和Western blotting显示纯化蛋白为目的蛋白EGFP。结论:表达型重组质粒pET15b-EGFP的成功构建和表达、纯化为细胞穿透肽-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。

关键词: TA克隆载体, 增强型绿色荧光蛋白(, EGFP), 重组质粒, 蛋白表达, 蛋白纯化

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