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2011年03月21日

【期刊论文】犬白细胞介素一2基因(IL-2)的克隆与表达

李祥瑞, 魏晓锋, 李春华, **徐立新

农业生物技术学报,2004,12(3):268~272,-0001,():

摘要

根据GenBank上发表的犬(Canis familiaris)IL-2基因序列,设计了1对引物。采用RT-PCR技术,以ConA刺激的犬外周血淋巴细胞为材料,从总RNA中扩增出犬IL-2基因。琼脂糖凝胶电泳显示扩增片段约为550 bp。分离纯化片段,克隆人pMD18-T载体,经酶切鉴定,测序结果显示,克隆的犬IL-2基因与GenBank上发表的序列一致,生物软件分析结果表明该序列与牛、羊和鹿的亲源性更近。构建表达质粒pET28-CaIL-2,转化大肠杆菌(Eschetichia coli)BL21,IPTG诱导表达,SDS-DPAGE电泳显示21.8kD左右的表达条带。MTT比色法测定活性结果表明:表达的重组犬IL-2蛋白具有极显著的体外增殖活化淋巴细胞的活性。

关键词: 犬, IL-2基因 克隆, 表达

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