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2010年08月31日

【期刊论文】蜡样杆菌(Bncillus ereus)M22 Mn-SOD cDNA片断的克隆

王琦, 惠芳, 尚玉磊, 王琦*, 王慧敏, 梅汝鸿

微生物学杂志,2004,24(3):8~11,-0001,():

摘要

析不同种细菌Mn-SOC氨基酸序列的保守区域,设计一对简并引物进行RT-PCR扩增,产物经T-A载体连接转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆、测序并进行同源性分析,得到436 bp Mn-SOD cDNA片段。根据此片段设计5′端特异性引物,然后进行5′RACE扩增,获得Mn SOC 5′端387 bp cDNA片断。将2段序列进行拼接获得594 bp cDNA片断,编码172个氨基酸。对推定氨基酸序列进行BLAST分析,结果表明其与炭疽芽孢杆菌(岛Bacillus anthracis)同源性为95%,且Gly77,Aly78,phes86,G1n150和Asp151在已报道的Mn-SOD中均存在,构成Mn-SOD的活性中心。表明该序列为蜡样芽孢杆菌Mn-SOD的cDNA序列。

关键词: 样芽孢杆菌(, Bacillus cereus), Mn-SOD eDNA, 克隆, 分析

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2010年08月31日

【期刊论文】蜡样芽孢杆菌M22锰超氧化物歧化酶基因在毕赤酵母中的表达*

王琦, 王黎明, 尚玉磊, 王勇军, 王琦**, 梅汝鸿

农业生物技术学报,2005,13(3):360~364,-0001,():

摘要

实验成功地构建了毕赤酵母(Pichia pasfom)表达质粒pPIcZA-Min-sod,质粒线性化后通过电激法导人毕赤酵母GS115,抗生素zeocm抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株。PCR鉴定及Mut+表型分析表明,目标基因已经重组到宿主基因组染色体上;0.5%甲醇诱导表达后,SDS-PAGE结果显示,表达蛋白的相对分子量约为23kD,活性电泳出现明显活性条带;酶活性测定显示,重组菌株SOD活性比对照提高5倍左右;氯仿乙醇(3:5/V:V)和KCN(5mmol/L)抑制反应进一步证明,所表达的SOD为锰超氧化物歧化酶C。来源于蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)M22的Mn-sod基因在毕赤酵母中得到正确表达。为研究该酶的生理功能提供了必要的物质条件。

关键词: 锰超氧化物歧化酶(, Mn-SOD), 毕赤酵母, 表达

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