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2011年06月07日

【期刊论文】玉米雄性不育细胞质特异DNA片段的发现及差异展示

曹墨菊, 荣廷昭, 朱英国

遗传,27(5):747-752,2005,-0001,():

摘要

利用3对线粒体引物对玉米同核异质和同质异核不育系的基因组总DNA进行PcR扩增;对检测到多态性的引物,再分别对供试材料小孢子发育至四分体、单核期和双核期的花药总RNA进行差异显示分析。结果表明:以基因组总DNA为模板,引物P1-P2在所有供试不育材料都有一相同的特异扩增带,而在保持系中均无扩增;引物P3-P4在所有供试材料中均无扩增;引物P5一P6仅在保持系黄早四中有扩增,而在其他供试材料中无扩增。这一结果说明以P1-P2为引物所检测到的特异扩增带为所有供试不育细胞质所特有,且不受供试材料不同核背景的影响。对于在不育材料基因组总DNA中具有特异扩增的引物P1-P2,进一步以cDNA为模板进行PcR扩增(RT-PcR),所有不育材料在小孢子发育的3个时期均有一相同的特异扩增带,而保持系在小孢子发育的相应时期均无扩增,说明以P1-P2为引物所检测到的转录本的大小和数目,在同核异质及同质异核不育材料间均表现一致,且不受小孢子发育时期的影响。这说明以P1-P2为引物所检测到的不育材料DNA水平的共同结构特点在小孢子发育中具有转录上的一致性,因此可以认为供试不育细胞质DNA水平的这一特异序列结构与雄性不育性状的表现有关。

关键词: 玉米, 细胞质雄性不育, 同核异质, 同质异核, PcR扩增, 差异展示

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2011年06月07日

【期刊论文】甘蓝型油菜TOC33基因启动子的克隆及序列分析

赵云, 李熠毅, 刘薇, 李雪东, 王茂林l, *

四川大学学报(自然科学版),2006,43(4);944~947,-0001,():

摘要

叶绿体是植物细胞中重要的细胞器,大部分叶绿体蛋白质都是由核基因组编码,在细胞质中合成分子量较大的前体蛋白,转运至叶绿体实施其功能。TOC33/TOC34是叶绿体上发现的一个外膜蛋白转运器构件蛋白,它与TOC159、TOC75和TOC64相互作用,构成了叶绿体外被膜上的一个蛋白转运器[1]目前已从豌豆(Pisumsa tivum)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、玉米(Zea mays)、小立碗藓(Physcomitrellapatens)、诸葛菜(Orychophroginus violaceus)和油菜(Brassica napus)克隆到TOC33或TOC34的CDNA或DNA的编码区。与其功能研究相比,TOC33基因的表达调控研究较少,该基因5’端调控区域的克隆及序列分析均未见报道。为此,在本实验室已经克隆到甘蓝型油菜TOC33基因编码区的基础上,采用单引物PCR方法[2]进行染色体步移,克隆出TOC33基因的启动子,为进一步研究TOC33基因的转录调控机制奠定基础。

关键词: Brassica napus, Toc33 gene, regulation region, chromosome walking, single primer PCR

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2011年06月07日

【期刊论文】甘蓝型油菜突变体Cr3529抑制性消减文库的构建

赵云, 刘阳, 王茂林, 邱峰, 周云涛, *m张帆

四川大学学报(自然科学版),2005,42(5):1029~1032,-0001,():

摘要

应用抑制性消减杂交(suppreSSion subtractive hybridization, SSH)技术构建了甘蓝型幼叶黄化油菜突变体Cr3529和其野生型3529品系幼叶期的正、反向消减文库.经茵落PCR检测,正向消减文库的有效重组率为55.5%;反向消减文库的有效重组率为76.5%。为进一步克隆消减文库中的差异表达基因和研究这些基因的功能奠定了基础。

关键词: 抑制消减杂交, 消减文库, 菌落PCR

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2011年05月27日

【期刊论文】Phenotypic and genotypic characterisation of antimicrobial resistance in faecal bacteria from 30 Giant pandas

王红宁, An-Yun Zhang, Hong-NingWang*, Guo-Bao Tian, Yi Zhang, Xin Yang, Qing-Qing Xia, Jun-Ni Tang, Li-Kou Zou

International Journal of Antimicrobial Agents 33(2009)456-460,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Giant panda, Antimicrobial resistance, Resistance genes, Multiplex PCR

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2011年05月27日

【期刊论文】An effective method for isolation of DNA from pig faeces and comparison of five different methods

王红宁, Jun-ni Tang, Zhi-guang Zeng, Hong-ning Wang *, Tai Yang, Peng-ju Zhang, Yu-ling Li, An-yun Zhang, Wen-qiao Fan, Yi Zhang, Xin Yang, Su-jun Zhao, Guo-bao Tian, Li-kou Zou

Journal of Microbiological Methods 75(2008)432-436,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Pig faeces, DNA extraction, β-mercaptoethanol, Comparison, PCR

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2011年05月23日

【期刊论文】天然棕色棉查尔酮合成酶基因(GbCHSl)的克隆和实时定量表达分析

孙杰, 杨会娜, 田新惠, 李艳军, 李明月, 冯鸿杰, 孙杰*

棉花学报,2010,22(1):42~48,-0001,():

摘要

根据植物查尔酮合成酶基因保守区序列设计引物,以发育18d的天然棕色棉纤维为材料,用RT-PCR结合RACE技术分离得到了一个查尔酮合成酶基因的全长cDNA(GenBank登录号:EU921263),将该基因命名为GbCHSl。实时荧光定量PCR检测显示。GhCHSl基因在棕色棉纤维细胞中优先表达,且在棕色棉纤维中的表达量远高于其近等基因系白色棉,但是该基因在绿色棉中几乎检测不到。这些试验结果暗示。该基因可能在棕色棉纤维色素形成中发挥重要作用。

关键词: 查尔酮合成酶, 天然彩色棉, 实时定量RT-PCR

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2011年05月23日

【期刊论文】单细胞PCR技术的研究进展

朱宝长, 吴国华

生物学杂志,2002,19(6):7~9,-0001,():

摘要

快速、准确、敏感和可靠的单细胞PCR技术是开展法医学、古微生物学、种植前遗传学诊断(PGD)等的前提。综述一些常用的单细胞PCR策略,并对这些技术的研究进展作一些介绍。

关键词: 单细胞, 引物延伸预扩增, PCR

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2011年05月11日

【期刊论文】Diversity and dynamics of microcystin—Producing cyanobacteriain China's third largest lake, Lake Taihu

杨虹, Wenjin Ye, Xianglong Liu, Jing Tan, Daotang Li, Hong Yang *

HarmfulAlgae 8(2009)637-644,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Hypertrophic lake Microcystin-producing cyanobacteriamcy Agene DGGEReal-time PCR

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2011年04月29日

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2011年04月29日

【期刊论文】苦瓜 MAP3D基因原核表达载体的构建和PCR快速检测重组子的研究

胡忠, 庄东红, 欧阳永长

遗传,2004,26(5):701~704,-0001,():

摘要

根据已报道的序列,把苦瓜(Momordica charantia)MAP30基因成功克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并对PCR快速检测阳性克隆进行了研究。结果表明,直接用菌落、菌液、酚氯仿处理过的菌液,以及提取的质粒进行PCR都可以成功地筛选阳性菌落。其中,酚氯仿处理过的菌液PCR与质粒PCR的结果最接近,而且比质粒PCR简单,因此可作为方便可靠的阳性克隆筛选的新方法。

关键词: MAP30, PCR 克隆子筛选, 苦瓜

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2011年04月25日

【期刊论文】影响PCR-SSCP的因素分析

姜运良, 李宁, 赵兴波, 吴常信

农业生物技术学报,2000,8(3):245~247,-0001,():

摘要

PCR-SSCP是一种基于PCR的单链构象多态性(single-stranded conformation polymorphism)分析技术,是DNA已知突变的检测或未知变异分析中十分常用和实用的技术之一。本研究从非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制,校品的变性处理,电沪条件、显色方法和结果分析等方面对影响PCR-SSCP实验室操作的因素进行了分析,并结合作者的经验给出了大小在100~200bp范围以内的DNA片段进行SSCP分析的操作程序:凝胶浓度为10%~15%,98℃变性5~10min,4℃条件下5W过夜电泳,银染法染色。

关键词: PCR-SSCP, 碱基置换突变, 影响因素

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2011年04月25日

【期刊论文】猪雌激素受体基因(ESR)点突变的PCR—SSCP检测

姜运良, 李宁, 习欠云, 吴常信

遗传,2000,22(4):214 ~216,-0001,():

摘要

雌激素受体基因(ESR)是控制猪高产仔数的主效基因之一,具有明显的基因效应BB型比AA型母猪胎总产仔数和产活仔数分别高出1.40~3.37和0.63~3.58头。是目前商品猪育种和生产中重点检测的主要基因之一。常规采用PCR-RFLPs方法区分该基因由点突变造成的3种不同的基因型。本研究建立1种基于PcR的SSCP(single-stranded corformation polymorphism)方法对猪ESR该位置的点突变进行检测,具有操作简便、灵敏度高和不需要酶切等优点,可以在育种实践中广泛应用。

关键词: 猪, ESR基因, 点突变, PcR-SSCP

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2011年04月25日

【期刊论文】猪RYR1基因三种PCR-RFLPs检测方法的比较

姜运良, 杜立新, 王爱华, 章岩

中国畜牧杂志,2000,36(4):8~9,-0001,():

摘要

猪应激综合症是猪在应激因子(如运输、转栏、高温、预防注射和配种等)的作用下诱发的一种综合症,其发生主要是由于RYR1基因的点突变造成的。本研究对RYRl基因的三种PCR-RFLPs检测方法进行了比较,分别利用三种方法对60头猪的检测结果证明:三者具有相同的准确性。但是三引物法和四引物法较二引物法所需的时司更少,检测成本更低。

关键词: 猪, RYR1基因, PCR-RFLPs, 检测方法

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2011年03月28日

【期刊论文】检测987p+肠毒素性大肠埃希氏菌PCR方法的建立

张书霞, 华荣虹, 何孔旺, 倪艳秀, 杨宗照

中国兽医科技,2002,32(1):3~5,-0001,():

摘要

以987p菌毛结构基因保守序列为靶序列,设计舍成了1对可扩增459bp目的片段的引物,建立了检测肠毒索性大肠埃希氏菌987p茵毛基因的PCR方法。该方法对K88+(+为菌毛阳性)、K99+、F41+参考菌株和链球菌、葡萄球菌、己氏杆菌的检测结果均为阴性;该方法的敏感度可达102CFU,对20株腹泻仟猪粪便分离物进行检测,有1株为阳性与血清学检测的结果一致。结果表明,此方法特异性和敏感性都很高,可用于临床987P肠毒素性大肠埃希氏茵病的快速诊断和流行病学调查。

关键词: 肠毒素性大肠块埃希氏酋, 茸毛基因, PCR

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2011年03月28日

【期刊论文】ETEC肠毒素基因多重PCR检测方法的建立

张书霞, 张雪寒, 何孔旺, 华荣虹

中国人兽共患病杂志,2003,19(2):67~70,-0001,():

摘要

肠毒素性大肠杆菌的致病性与其具有粘附性的菌毛和产肠毒素的能力密切相关。由于菌毛的血清型多而复杂,肠毒素只有不耐热肠毒素(LT)和耐热肠毒素(ST)两种,因此成为研究的对象。用三对扩增产物分别为110bP、237bP、368bp的引物建立了检测LT和STⅠ、STⅡ毒素基因的多重PCR方法。扩增产物分别用HindⅢ、HincⅡ、sau3AⅠ限制性内切酶酶切,均得与预期一致的2个片段。对各个参考株的检测结果为100%符合。结果表明该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性。该方法可用于肠毒素性大肠杆菌腹泻病的辅助诊断以及大肠杆菌的分类检测。

关键词: 肠毒素性大肠杆菌, 不耐热肠毒素, 耐热肠毒素Ⅰ、Ⅱ, 多重PCR

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2011年03月25日

【期刊论文】Comparative analysis of ESTs in response to drought stress in chickpea (C. arietinum L.)

麻浩, Wen-Rui Gao a, Xian-Sheng Wang a, Qing-You Liu b, Hui Peng a, Chen Chen a, Jian-Gui Li c, Ju-Song Zhang c, Song-Nian Hu b, *, Hao Ma a

Biochemical and Biophysical Research Communications 376 (2008) 578-583,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Chickpea,, Drought stress,, Drought tolerance,, cDNA library,, Expressed sequence tags,, Quantitative real-time PCR

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2011年03月25日

【期刊论文】国大陆绒螯蟹线粒体16S rDNA序列变异分子鉴定标记*

孙红英, 周开亚**, 陆健健, 杨光

自然科学进展,2002,12(5):485~490,-0001,():

摘要

选取了中国大陆东部6个水系合计110个绒螯蟹个体,通过DNA序列测定和PCR/RFLP分析,对线粒体16s rDNA部分片段的序列变异进行研究结果表明,在401bp的16s rDNA片段中,合浦绒螯蟹(Eruocheir japonica hepuensis)与中华绒螯蟹(E. j. sinensis)之间存在3~4个固定的碱基替代;合浦绒螯蟹的闽江、九龙江和南流江种群之间未发现碱基变异,表现为1种单元型(C型);中华绒螯蟹长江和辽河的种群中,有1个固定的碱基替代,表现为A,B两种单元型单元型之间的碱基变异反映了绒螯蟹地理种群之间的遗传歧异经,Jrn I酶切形成的16s rDNA酶切片段差异,为2个亚种的鉴定提供了一种准确、简捷的DNA分子标记对长江水系部分水域绒螯蟹的分子鉴定提示,长江下游至长江口以中华绒螯蟹的2个单元型为主,但已混有合浦绒螯蟹的单元型。在江苏、安徽渔场中的饲养种群分别属于单元型A型和B型16s rDNA的PCR/RFLP差异可作为正确鉴定中华绒螯蟹和合浦绒螯蟹的分子鉴定标记;16s rDNA片段中1个固定位点的碱基替代可作为区分中华绒螯蟹两种单元型的分子鉴定标记。

关键词: 中华绒螯蟹 合浦绒螯蟹 16S rDNA序列变异 PCR/, RFLP分子鉴定标记

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2011年03月18日

【期刊论文】齿瓣石斛的位点特异性PCR鉴别

丁小余, 徐珞珊*, 王峥涛, 徐红, 周开亚

药学学报,2002,37(11):897-901,-0001,():

摘要

目的设计出齿瓣石斛的位点特异性鉴别引物,仅通过PCR就能完成对齿瓣石斛真伪进行准确鉴别。方法根据齿瓣石斛及其他枫斗类、黄草类石斛的rr)NAlls序列数据库,设计了齿瓣石斛的位点特异性PcR鉴别引物JB-Chinban-01S和J-B-Chibsn-01X。然后,对38种石斛属植物模板DNA进行了PCR扩增,阳性者即为齿瓣石斛正品。结果当退火温度设定为58℃时,只有齿瓣石斛的模板DNA能被扩增出来,而其他的37种石斛属植物均为阴性。该鉴别反应重复性好,已在鉴别齿瓣石斛时发挥重要作用。结论运用位点特异性鉴别引物能成功地对齿瓣石斛进行PCR鉴别,与DNA测序鉴别方法相比,位点特异性PCR具有高效、准确、简便、省时等优点。

关键词: 齿瓣石斛, 位点特异性PCR 鉴别

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2011年03月18日

【期刊论文】Effect of H202 on fiber initiation using fiber retardation initiation mutants in cotton (Gossypium hirsutum)

郭旺珍, Dayong Zhang, Tianzhen Zhang, Wangzhen Guo *

Journal ofPlantPhysiology167(2010)393-399,-0001,():

摘要

暂无

关键词: Cotton flberinitiation H2O2 Retardation development RT-PCR SEM

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2011年02月18日

【期刊论文】古核嗜热菌组蛋白基因多点突变的新方法

冯雁, 翁梁, 纪昕, 王智, 刘丹, 马吉胜, 李娜, 曹淑桂, 冯雁*

药物生物技术,2002,9(5):264~266,-0001,():

摘要

嗜热菌组蛋白基因序列中精氨酸密码子在大肠杆菌中的表达率极低,限制了组蛋白的大量获得。运用分子生物学技术,在传统PCR定点突变技术的基础上进行改进,参照古核嗜热菌组蛋白基因序列和大肠杆菌偏爱密码子表,设计了一对含有5个精氨酸突变密码子的单链DNA,全长为115nt,在3'端有20nt互补序列。将单链DNA在94℃变性,45℃复性,使其互补结合,72℃进行延伸反应,得到含有突变位点的组蛋白基因;再以此基因为模板设计相应的一对引物进行PER扩增反应,得到大量组蛋白突变基因。该研究为一些序列已知,片段较小基因的多点突变提供了一种简单、易行的方法。

关键词: 多点突变, 聚合链式反应, 组蛋白

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