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2011年06月07日

【期刊论文】玉米同核异质不育系小孢子发育的m RNA多态性分析

曹墨菊, 荣廷昭, 朱英国

玉米科学,2005,13(3):3-5,-0001,():

摘要

应用cDNA-RAPD技术分析了玉米同核异质不育材料在小孢子发育过程中花粉发育相关基因表达的差异。结果表明,在小孢子发育的相同时期,引物s330在48-2背景下的不同胞质之间存在差异,不同时期差异表现不一;引物s330在黄早四背景下的不同胞质之间未检测到差异,并且小孢子发育的3个时期表现一致。对同核异质不育系和同质异核不育系的比较发现,核背景对mRNA转录的影响大于细胞质,不育胞质T、C、S在48-2背景和黄早四背景下的差异表现不一。根据S330在48—2背景下的扩增结果,发现基于mRNA多态性的相似性比较结果与不育细胞质的败育特点及败育时期具有较好的一致性,即配子体不育类型与保持系的相似性高于孢子体不育类型,孢子体不育类型之间的相似性高于孢子体不育与配子体不育的相似性。

关键词: 玉米, 细胞质雄性不育, eDNA-RAPD分析, 同核异质系

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2011年06月07日

【期刊论文】甘蓝型油菜矮化突变体抑制消减cDNA文库的构建及初步分析

赵云, 李小艳, 周云涛, 李熠毅, 王茂林*

中国油料作物学报,2008,28(4):396~402,-0001,():

摘要

采用抑制性消减杂交(suppresson stubtracitve hybridization, SSH)技术,以甘蓝型油菜矮化突变体“NDF-1”为实验方(tester),野生型“3529”为驱动方(driver)构建植株差异表达的抑制消减cDNA文库。所建cDNA文库的插入片段大小主要集中在100~1000bp之司。斑点杂交筛选得到了32个阳性克隆,序列测定和同源性对比分析表明,其中的12个克隆功能未知,其余涉及到激素信号转导、第二信使、光合作用、脂肪酸代谢及衰老等多个方面。还对部分差异表达基因的功能进行了分析。为进一步认识油菜植株矮化的机理奠定了基础。

关键词: 甘蓝型油菜, 矮化突变, 抑制消减杂交, cDNA文库

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2011年01月04日

【期刊论文】甘蓝型油菜种子不同发育时期SSH文库的构建

刘春林, 彭琦, 胡燕, 杜培粉', 谢青轩, 阮颖, 刘春林*

作物学报,2009,35(9):1576-1583,-0001,():

摘要

利用抑制差减杂交技术构建了20d和35d甘蓝型油菜湘油15发育种子特异表达基因的ssH文库。随机挑取单菌落进行PCR表明,文库质量较好。在20d和35dssH文库中随机挑选489个阳性克隆进行测序,获得452条高质量的表达序列标签(EST)。对序列进行Blast比对及功能注释,比较20d和35dSSH文库的基因表达谱,发现在20dssH库中参与糖代谢的基因出现频率较高,而在35dSSH库中与脂肪酸储存有关的油体蛋白家族、与脂肪酸转运有关的柠檬酸合酶、与脂肪酸合成有关的酰基载体蛋白去饱和酶等,参与油脂代谢相关基因出现频率较高。该结果对进一步研究油菜脂肪酸代谢调控的分子机制打下了基础。

关键词: 甘蓝型油菜, 种子发育, 脂肪酸, 抑制差减杂交, cDNA文库

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2010年08月31日

【期刊论文】蜡样杆菌(Bncillus ereus)M22 Mn-SOD cDNA片断的克隆

王琦, 惠芳, 尚玉磊, 王琦*, 王慧敏, 梅汝鸿

微生物学杂志,2004,24(3):8~11,-0001,():

摘要

析不同种细菌Mn-SOC氨基酸序列的保守区域,设计一对简并引物进行RT-PCR扩增,产物经T-A载体连接转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆、测序并进行同源性分析,得到436 bp Mn-SOD cDNA片段。根据此片段设计5′端特异性引物,然后进行5′RACE扩增,获得Mn SOC 5′端387 bp cDNA片断。将2段序列进行拼接获得594 bp cDNA片断,编码172个氨基酸。对推定氨基酸序列进行BLAST分析,结果表明其与炭疽芽孢杆菌(岛Bacillus anthracis)同源性为95%,且Gly77,Aly78,phes86,G1n150和Asp151在已报道的Mn-SOD中均存在,构成Mn-SOD的活性中心。表明该序列为蜡样芽孢杆菌Mn-SOD的cDNA序列。

关键词: 样芽孢杆菌(, Bacillus cereus), Mn-SOD, eDNA 克隆, 分析

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2009年03月30日

【期刊论文】重组腺病毒介导VEGF121cDNA体外转移与表达

宋后燕, 王跃祥, 杨健, 马春姑, 杨新英, 宋后燕*

生物化学与生物物理进展,2003(4):612-616,-0001,():

摘要

构建携带VEGF121cDNA重组复制缺陷型腺病毒表达载体,制备重组腺病毒,该腺病毒能介导vEGF121cDNA基因促进人脐静脉血管内皮细胞增殖,促进毛细血管管腔样结构形成ELIsA检测表明vEGF121cDNA基因表达产物分泌至培液上清,并显示强烈血管通透作用为进一步利用重组腺病毒介导vEGF121cDNA进行缺血性疾病的基因治疗奠定良好的基础。

关键词: vEGF121cDNA, 重组腺病毒, 基因转移, 表达, 增殖, 血管通透

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2011年05月03日

【期刊论文】NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中过表达的研究*

许丽艳, 许丽艳)**, 李思民), 熊华淇), 蔡唯佳), 沈忠英)

生物化学与生物物理进展,2001,28(6):839~843,-0001,():

摘要

为研究NGAL (neutrophil gelatinase associated lipocalin)基因在永远生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况,以永生化食管上皮细胞系SHEE食管癌细胞系SHEEC互为对照,用cDNA微列阵进行筛选,用RNA印迹和RT-PCR进行鉴定,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较,结果表明 NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达,其cDNA序列与小鼠24p3、大鼠NRL(neu-related lipcalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性,这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用,可能是一种新癌基因或促癌基因。

关键词: NGAL,, cDNA微列阵,, 差异表达基因,, 食管癌

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2006年11月16日

【期刊论文】广州管圆线虫Y-丁基甜菜碱羟化酶基因的获得与分析*

詹希美, 孟锦绣, 梁瑜, 何蔼, 李卓雅, 雷智刚, 易冰, 张瑞琳

中国人兽共患病杂志,2004,20(3):186-189,-0001,():

摘要

目的对广州管圆线虫成虫cDNA文库的插入片段进行研究。方法铺平板培养广州管圆线虫成虫cDNA文库,从中挑选生长、分离良好的噬菌斑进行PCR扩增,根据PCR产物电泳结果挑选较大的cDNA插入片段进行克隆、测序和原核诱导表达,对表达产物进行免疫学鉴定,用生物信息学方法分析其结构和功能。结果获得了国内外尚未见报道的广州管圆线虫全长基因,该基因长1416bp,编码由421个氨基酸组成的7-丁基甜菜碱羟化酶(gsmma-butyrobetaine,2-oxoglu-tarateclioxygenase。GAMMA-BBH,EC1.14,11.1);免疫学鉴定结果显示GAMMA-BBH不能与大鼠的抗血清结合。结论首次获得广州管圆线虫成虫GAMMA~BBH表达基因,为广州管圆线虫的研究提供实验室依据。

关键词: 广州管圆线虫, eDNA文库, 克隆, 7-丁基甜菜碱羟化酶, 生物信息学

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