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2006年06月01日

【期刊论文】人纤溶蛋白酶原K5在毕赤酵母中的表达及其生物活性鉴定

吕红, SHEN Li, SONG Da-Xin, GAO Bo-Yu, L

生物工程学报,2004,20(6):879~883,-0001,():

摘要

化学合成人纤溶蛋白酶原K5(pK5)的编码基因并克隆到毕赤氏酵母表达系统的分泌型载体pPIC9K上,将重组质粒经BglⅡ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选出对G418有高抗性和在MM培养基上生长缓慢的转化子。经摇瓶发酵和甲醇诱导后,用15%SDS-PAGE检测发酵上清液,表明有重组蛋白pK5的高表达。经CM.Sepherose离子交换柱和Superdex 75分子筛层析两步分离纯化,获得了纯度达到98%的rpK5。用MTT方法检测的结果表明,纯化的rpK5可显著地抑制人血管内皮细胞的生长。

关键词: 人纤溶蛋白酶原K5,, 酵母,, 分泌表达,, 内皮细胞增殖分析

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