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2011年03月16日

【期刊论文】中华鳖胃肠道5-羟色胺和胃泌素内分泌细胞的免疫细胞化学研究

陈秋生, 苏泽红, 陈晓武, 柳金雄

南京农业大学学报,2006,29(1):89~93,-0001,():

摘要

采用ABC免疫细胞化学法,对中华鳖(Trionyx sinensis)胃肠道5-羟色胺(5-HT)细胞和胃泌素(Gas)细胞的分布和形态进行了观测,并比较了冬眠期和活跃期的分布差异。结果显示,5-HT细胞在胃和肠道各段均有分布,在胃分布于胃腺,在肠则分布于黏膜上皮。在胃的前部和中部,5-HT细胞位于胃腺各部,而在胃的后部,5-HT细胞则主要集中于胃腺的上部和胃小凹底部。在肠道中,由前向后5-HT细胞的分布呈递减趋势,且大部分细胞呈上窄下宽的锥体形、梨形等,顶端伸达肠腔,为开放型内分泌细胞,少数细胞为封闭型。前、中部胃腺中,Gas细胞的分布数量较多,且位于腺细胞之间,一般为开放型。后部胃腺中Gas细胞数量减少。胃黏膜上皮和肠道中未见Gas细胞的分布。与活跃期相比,冬眠期Gas细胞的分布情况变化不大,但5-HT细胞的分布数量显著减少。

关键词: 中华鳖, 胃肠道, 5-羟色胺, 胃泌素, 免疫细胞化学

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2009年11月01日

【期刊论文】人胚胎生殖细胞在人胚胎成纤维细胞饲养层上的生长

王亚平, 刘永刚, 韩兵, 陈地龙, 李芳菲, 王亚平*, 王莎莉

解剖学报,2005,36(3):716~719,-0001,():

摘要

目的探讨以人胚胎成纤维细胞为饲养层分离、培养人胚胎生殖细胞的方法和条件。方法分离、培养3-4月胚胎成纤维细胞,取3~15代细胞经丝裂酶素处理后铺板备用;分离6~11周胚胎原始生殖细胞,将其置于人胚胎成纤维细胞饲养层上,在含生长因子、分化抑制因子的培养体系中培养胚胎生殖细胞;用免疫细胞化学方法检测胚胎生殖细胞表面标志SSEA-1和SSEA-4;钙,钴法检测碱性磷酸酶活性;RT-PCR检测转录因子Oct-4的表达。结果人胚胎成纤维细胞可连续传代25代以上(6月),3~15代细胞可以用作饲养层细胞。分离的胚胎生殖细胞在饲养层上可增殖形成典型胚胎生殖细胞集落,并能连续在体外培养超过8代。集落未分化标志检测显示SSEA-1、SSEA-4呈阳性,碱性磷酸酶活性呈强阳性,Oct-4表达阳性。结论用人胚胎成纤维细胞作为饲养层能获得可连续增殖的胚胎生殖细胞。

关键词: 胚胎生殖细胞, 胚胎成纤维细胞, 细胞培养, 免疫细胞化学 逆转录聚合酶链反应, 人胚

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2009年06月12日

【期刊论文】促性腺激素在白蚁脑中的免疫细胞化学定位

奚耕思, 苏晓红, 奚耕思**, 李柯

动物学报,2004,50(2):240~244,-0001,():

摘要

为研究昆虫卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的存在与分布,我们用免疫细胞化学染色技术对FSH和LH在尖唇散白蚁(Reticulitermes aculabialis)脑中的分布进行了定位研究。结果显示:FSH免疫阳性神经细胞及神经纤维分布在雌性繁殖蚁分飞期前脑的左叶、右叶及中部,雌性末龄若虫前脑的右叶,雄性繁殖蚁前脑的右叶;LH免疫阳性物质分布在雌、雄繁殖蚁前脑左叶;在工蚁和兵蚁中未见有FSH和LH免疫阳性物质存在。研究结果表明:FSH和LH在白蚁脑中的存在具有发育阶段特异性,并且有可能像其在脊椎动物中那样参与调节性腺发育及精卵成熟;可能调节繁殖蚁、兵蚁、工蚁的产生[动物学报50(2):240-244,2004]。

关键词: 尖唇散, 白蚁, 脑, 卵泡刺激素, 黄体生成素, 促性腺激素, 免疫细胞化学

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2007年11月27日

【期刊论文】成人毛囊干细胞分选及β-连环蛋白表达的研究

许增禄, 仇文颖, 徐园园

解剖学报2006年4月第37卷第2期/ACTA ANATOMICA SINICA Apr., 2006, Vol. 37, No 2,-0001,():

摘要

目的 寻找一种快速简便的分离毛囊干细胞的方法,探讨β-连环蛋白(β-catenin)信号分子在毛囊干细胞增殖分化中的调节作用。方法 利用毛囊干细胞黏附性强的特点,通过将毛囊细胞悬液黏附于包被有人胶原的平板而使富毛囊干细胞分离。利用毛囊干细胞标志物Keratin 19(K19)及体外集落形成能力进行鉴定。采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测分选后的毛囊干细胞β-catenin的表达情况。结果 毛囊干细胞悬液黏附于人胶原20min后,K19的表达增加1.6倍,集落形成能力增加3.5倍。β-catenin在细胞核中的蛋白表达增加。结论 快速黏附法可以使富集毛囊干细胞分离,β-catenin参与了毛囊干细胞的增殖及分化调控。

关键词: 毛囊, 干细胞, β-连环蛋白, 免疫细胞化学 原位杂交,

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2007年11月26日

【期刊论文】神经组织细胞特异性蛋白在大鼠羊膜上皮细胞中的表达

陈东, Lou

中国临床康复2006-07-10出版第10卷第25期/Chinese Journal of Clinical Rehabilitation July 10, 2006, Vol. 10, No. 25,-0001,():

摘要

背景:有证据表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原,且可以分泌多种神经营养因子及递质。若羊膜上皮细胞能够代替神经细胞,其神经营养作用必将为治疗神经推行性病变带来广阔前景。 目的:检测神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中是否表达? 设计:重复测量设计。 单位:吉林大学第二临床医学院,吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。 材料:实验于2004-10/2005-10在吉林大学基础学院组织与胚胎学教研室完成。选取清洁级孕12~14d的Wistar大鼠1只,将分离出的羊膜上皮细胞用于实验。小鼠抗大鼠神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶单克隆抗体、免抗大鼠神经元特异性烯醇化酶和NT-3多克隆抗体(武汉博士德公司);大鼠抗大鼠Musashi抗体(日本庆应义塾大学岗野荣之教授惠赠)。 方法:取孕12~14d的Wistar大鼠胎盘,剥离羊膜获得上皮细胞,在37℃、体积分数为0.05的CO2环境下,胰蛋白酶消化5min,加入DMEM/F12培养液,以5×109L-1的浓度接种于培养瓶中。培养3d后,细胞以1×108L-1的浓度接种于预先涂有多聚赖氨酸的直径35mm平皿中,用质量浓度为40g/L的多聚甲醛固定20min。采用免疫细胞化学染色方法对神经元特异性抗原微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶在羊膜上皮细胞中的表达情况进行检测。 主要观察指标:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况。 结果:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察:羊膜上皮细胞培养24h后,细胞扁平呈成纤维细胞样。3~5d后,胞体饱满,核大而圆,核仁清晰,突起发达,并互相连成网状。②神经组织细胞培养特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况:培养4d后免疫细胞化学染色结果可见,羊膜上皮细胞表达Nestin、神经元特异性烯醇乙酶、乙酰胆碱转移酶以及Musashi、神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白。 结论:羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性,可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源。

关键词: 羊膜, 上皮细胞, 免疫细胞化学 染色法, 组织细胞, 大鼠

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2006年10月10日

【期刊论文】5-氮杂胞苷诱导骨髓源性心肌干细胞向心肌分化过程中心肌肌钙蛋白T的表达变化

谭玉珍, 孙丽莉, 王海杰, 贺其志, 王新艳

解剖学报,2005,36(3):329~323,-0001,():

摘要

目的 研究5-氮杂胞苷诱导骨髓源性心肌干细胞(MCSC)向心肌分化过程中,心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达变化和超微结构。方法 从SD大鼠骨髓间充质干细胞(MMSC)中筛选MCSC,用5-氮杂胞苷诱导向心肌定向分化。取分化后不同时间的细胞作cTnT免疫细胞化学染色,并对结果进行图像分析。透射电镜下观察分化细胞的超微结构。取不同发育期和成熟期的sD大鼠心肌作对比研究。结果 用5.氮杂胞苷诱导后2周,细胞内开始表达cTnT;诱导后3周,eTnT表达增强,可见横纹样结构;诱导后4周,cTnT表达明显增强,横纹增多,但排列不规则。诱导后4周的细胞内出现心房粒,可见丰富的粗面内质网和糖原。胚胎11 d大鼠的心肌内,横纹样结构较少且排列不规则。新生大鼠心肌内横纹增多,排列较规则。1月龄和3月龄心肌的横纹样结构发达,排列规则。诱导分化后4周的细胞cTnT表达特征与胚胎11 d的心肌相似。结论 MCSC经5-氮杂胞苷诱导后可分化为心肌细胞,表现为未成熟心肌的结构和功能特征。

关键词: 骨髓间充质干细胞, 骨髓源心肌干细胞, 心肌分化, 心肌肌钙蛋白T, 心肌细胞, 免疫细胞化学 大鼠

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2005年07月22日

【期刊论文】用免疫细胞化学方法观察胚胎脊髓组织移植后的细胞构筑特

王振宇, 张绩隆

,-0001,():

摘要

本文应用生长抑素、5--羟色胺\P物质,胶质酸性蛋白的抗体,通过免疫细胞化学反应,对胚胎脊髓组织移植后的细胞构筑特征进行了观察。结果发现,移植后2--6个月的胚胎脊髓组织内分布有与上述抗体相应的免疫阳性神经元及神经纤维。在移植组织与宿主脊髓融合差的情况下,移植界面可见胶质酸性蛋白免疫反应明显增强。研究表明,免疫细胞化学方法可反映移植组织的生长分化程度,并可显示移植部位的细胞构筑特征。

关键词: 胚胎脊髓 组织移植 免疫细胞化学

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2005年03月08日

【期刊论文】α-synuclein2pEGFP真核表达载体的构建及其在SH2SY5Y细胞中的表达①

杨慧, 张宇新, 赵焕英, 苏月, 苏玉金, 赵春礼, 徐群渊

神经解剖学杂志,2003,19(3):124~128,-0001,():

摘要

为了构建α-synuclein-pEGFP真核表达载体,检测其在SH-SY5Y细胞内的表达,本研究应用下述方法:PCR扩增α- synuclein基因并消除终止密码子;PCR产物连入pGEM T-easy载体,经测序确认无误后,亚克隆入pEGFP-N1,构建α-synucle-in-pEGFP真核表达载体;LipofectAMINE法转染SH-SY5Y细胞;荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,原位杂交和免疫荧光细胞化学法检测α-synucleinmRNA及其蛋白表达。结果显示,该载体转染SH-SY5Y细胞后,可在细胞内观察到报告基因和目的基因的表达产物。结论:α-synuclein-pEGFP真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达。本工作为今后动态观察研究α-synu-clein致Parkinson病多巴胺能神经细胞损伤机制奠定基础。

关键词: α-synuclein, 绿色荧光蛋白, 原位杂交, 荧光免疫细胞化学

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