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2010年10月19日

【期刊论文】油井采出液中硝酸盐还原菌的分离培养及对硫酸盐还原的抑制*

吴晓磊, 谭燕, 程杰成, 屈睿, 吴晓磊**

应用与环境生物学报,2007,13 (3):390~394,-0001,():

摘要

采用油井采出液培养基和加入无机盐成分的改良油井采出液培养基,对大庆油田萨北过渡带油井采出液中的细菌进行分离培养及初步鉴定,比较了两种情况下培养出的具有硝酸盐和/或亚硝酸盐还原,以及/或反硝化能力菌群结构的差异。利用采出液培养基培养出一组新的微生物菌株,并且分离的硝酸盐和/或亚硝酸盐还原菌,以及/或反硝化细菌(Nitrate/nitrite reducing bacteria, denitrifying bacteria, NRDB)比例明显高于无机盐- 采出液培养基;但培养基中无机盐成分的添加,提高了可培养NRDB的群落生物多样性。仅仅向油井采出液中直接投加硝酸盐作为电子受体,对其中硝酸盐还原、亚硝酸盐还原和反硝化微生物(NRDB)的激活作用以及产抑制硫化物产生的能力有限,而同时加入分离自采出液的NRDB和硝酸盐则对硫酸盐还原菌(SRB)的生长和产硫化物活性都产生了明显的抑制。但是NRDB与硝酸盐同时投加对不同SRB的抑制效果并不相同,导致了SRB群落结构的变化。

关键词: 微生物可培养性, 荧光原位杂交(, F ISH), 硝酸盐还原菌, 硫酸盐还原菌

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2010年10月19日

【期刊论文】油田回注水中硫酸盐还原原核生物的快速检测和群落结构分析

吴晓磊, 曾景海, 吴晓磊*, 赵桂芳, 钱易

环境科学,2006,27(5):972~976,-0001,():

摘要

利用荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH) 技术,采用荧光标记的rRNA 探针及其组合对胜利油田胜利采油厂回注水中硫酸盐还原原核生物(Sulfate reducing prokaryotes, SRPs, 包括硫酸盐还原细菌和硫酸盐还原古菌)进行检测,分析了该回注水中SRPs 群落结构。结果表明:SRPs在胜利油田回注水中具有极高的种群多样性,广泛分布于4个细菌门和1个古菌门;总数可达2.86×104个/mL,占回注水中总微生物细胞的20%左右;其中优势菌属为脱硫弧菌属(Desulf ovibrio)和脱硫肠状菌属(Desulf otomaculum), 分别占回注水微生物总细胞数的8.71%(±4.45%),和12.15% (±3.90%)Desulfobacterales 和Syntrophobacterales这2个目中的SRPs, Thermodesulf obacteriales 以及Thermodesulf ovibro属的SRPs分别占样品微生物总量的7159%(±2.92%),3.57%(±1.39%)和2.32%(±0.80%)。除此之外,也检测到了占微生物总量4.29%(±1.75%)的A rchaeoglobus 属的SRPs, 证明了古菌类SRPs是回注水中一个不容忽视的硫酸盐还原微生物种群。FISH法能够快速、准确地检测回注水中SRPs数量,解析SRPs群落结构。

关键词: 荧光原位杂交 硫酸盐还原原核生物, 基因探针, 群落结构, 绝迹稀释法

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2010年10月19日

【期刊论文】胜利油田外排水中铁细菌主要类群的检测及群落结构分析*

吴晓磊, 赵桂芳, 吴晓磊**, 曾景海, 李佳, 钱易

应用与环境生物学报,2006,12(6):828~832,-0001,():

摘要

根据油田外排水中常见铁细菌的16SrRNA特异性保守序列,设计和合成了4种荧光探针,利用荧光原位杂交方法,分别利用它们对胜利油田孤岛采油厂、胜利采油厂1号和2号综合处理站外排水中存在的铁细菌的种类和数量进行检测,分析了各外排水中铁细菌的群落结构.结果表明,利用基因探针能快速对胜利油田外排水中的铁细菌进行检测:在孤岛采油厂、胜利采油厂1号和2号综合处理站的外排水中,利用4种探针的组合探针检测到的铁细菌细胞数量分别占样品中微生物总细胞数量的11.0%、12.8%和9.0%, 其中Leptothrix和Sphaerotilus,以及Leptospirillum fer-riphilum 为胜利油田外排水中的3种优势铁细菌,分别占水样中总微生物细胞数的2.94%±0.52%~3.39%±0.52%和2.24%±0.16%~2.63%±0.49%;而Leptospirillum ferrooxidans和Acidithiobacillus spp.的种群则较小.3个污水处理站中铁细菌群落结构差异较大,而多样性相差不大.利用4种探针的各种组合对外排水中铁细菌的检测表明,单探针能够很好地分析外排水中铁细菌的群落结构,而组合探针能快速、较准确地检测外排水中铁细菌的数量,比传统的绝迹稀释法具有快速、准确、直观等优点。

关键词: 荧光原位杂交(, FISH), 铁细菌, 基因探针, 群落结构, 绝迹稀释法

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2009年10月21日

【期刊论文】慢性低氧对大鼠肺内几种原癌基因表达的影响*

冉丕鑫, 欧阳能太, 钟南山, 陈顺存

中国应用生理学杂志,1997,13(1):21~24,-0001,():

摘要

本文原位杂交技术动态观察了慢性低氧大鼠肺内原癌基因Jun、fos和myb的表达,结果发现:(1)正常大鼠肺内有一定量的jun mRNA表达,少见到myb及fos的表达:(2)低氧1同时.Jun的表达较正常下降.2周后有听增加.低氧3周后.jun的mRNA表达较正常明显上升:(3)低氧1、2周后,myb的表达明星增加.3周时基本恢复到正常水平:(4) fos原癌基因在低氧1、2周时有一定量的表达.低A3用时遮最大值.提示低氧可刺鞋大鼠肺内雁癌基因Jun、myb和fos的表达.

关键词: 慢性低氧, 肺脏, 元癌基因, 原位杂交

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2007年11月27日

【期刊论文】成人毛囊干细胞分选及β-连环蛋白表达的研究

许增禄, 仇文颖, 徐园园

解剖学报2006年4月第37卷第2期/ACTA ANATOMICA SINICA Apr., 2006, Vol. 37, No 2,-0001,():

摘要

目的 寻找一种快速简便的分离毛囊干细胞的方法,探讨β-连环蛋白(β-catenin)信号分子在毛囊干细胞增殖分化中的调节作用。方法 利用毛囊干细胞黏附性强的特点,通过将毛囊细胞悬液黏附于包被有人胶原的平板而使富毛囊干细胞分离。利用毛囊干细胞标志物Keratin 19(K19)及体外集落形成能力进行鉴定。采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测分选后的毛囊干细胞β-catenin的表达情况。结果 毛囊干细胞悬液黏附于人胶原20min后,K19的表达增加1.6倍,集落形成能力增加3.5倍。β-catenin在细胞核中的蛋白表达增加。结论 快速黏附法可以使富集毛囊干细胞分离,β-catenin参与了毛囊干细胞的增殖及分化调控。

关键词: 毛囊, 干细胞, β-连环蛋白, 免疫细胞化学, 原位杂交

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2007年05月10日

【期刊论文】弹力蛋白酶 mRNA 在肝细胞中的表达

蒋健

临床肝胆病杂志2002年12月第18卷第6期/Chin J Clini Hepatol, December 2002, Vol. 18, No. 6,-0001,():

摘要

探讨肝脏组织细胞弹力蛋白酶 mRNA 的表达。克隆成地高辛素标记的大鼠胰腺丝氨酸弹力蛋白酶RNA探针,并以此进行原位杂交。多数肝细胞的胞浆内有弹力蛋白酶mRNA的表达,其强度因小叶内肝细胞部位的不同而有所差异。组成肝窦窦壁的内皮细胞以及其他细胞也有弹力蛋白酶mRNA的表达。从形态学证实肝脏细胞有弹力蛋白酶mRNA的表达,丝氨酸弹力蛋白酶有可能参与肝纤维化细胞外基质代谢。

关键词: 弹力蛋白酶, 原位杂交 肝细胞

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2007年05月10日

【期刊论文】扶正化瘀方对大鼠弹力蛋白酶表达的影响

蒋健, 蒋健;谭善忠;谭春雨;刘成海;徐列明

,-0001,():

摘要

目的 从基因、蛋白及其活性调查胰腺丝氨酸弹力蛋白酶在肝纤维化过程中的作用,并探讨扶正化瘀方对其表达的影响。方法 采用二甲基亚硝胺制备大鼠肝纤维化模型,随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方治疗组,观察肝组织中弹力蛋白酶mRNA、蛋白及其活性的表达。结果 弹力蛋白酶mRNA及其活性在正常肝组织均有表达。这些表达在模型组有所减少,而在扶正化瘀组则较高。结论 弹力蛋白酶参与肝纤维化代谢过程;扶正化瘀方上调弹力蛋白酶的表达是其抗肝纤维化的机理之一。

关键词: 丝氨酸弹力蛋白酶, 肝纤维化, 扶正化瘀方, 原位杂交

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2007年05月10日

【期刊论文】球囊损伤后血管迁徙平滑肌细胞弹力蛋白酶 mRNA 的表达

蒋健, 舒强, 凌光烈, 三俣昌子, 前田秀一郎, 吉田洋二

,-0001,():

摘要

目的 探查血管平滑肌细胞有否弹力蛋白酶 mRNA 的表达、其在血管组织中的分布及与细胞迁徙的关系。方法 采用球囊损伤大鼠动脉的模型,克隆成大鼠胰腺弹性蛋白酶Ⅱ的RNA探针,运用原位杂交及免疫组化、电镜等方法。结果 弹性蛋白酶ⅡmRNA 的表达见于正常动脉部分平滑肌细胞,并因血管损伤而增强。中膜迁徙性平滑肌细胞毫无例外均有弹性蛋白酶mRNA的强烈表达,其细胞周围基质显著减少,内弹性板遭到破坏。结论中膜平滑肌细胞的丝氨酸弹性蛋白酶表达亢进是促进向内膜迁徙并形成平滑肌增生性血管疾病的重要机理之一。

关键词: 球囊损伤, 中膜迁徙性平滑肌细胞, 弹力蛋白酶Ⅱ, 原位杂交

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2007年05月10日

【期刊论文】血小板源性生长因子影响血管弹性蛋白酶表达的初步研究

蒋健, 舒强, 凌光烈

,-0001,():

摘要

探讨球囊损伤后血管平滑肌细胞丝氨酸弹性蛋白酶表达增加的机理。用球囊导管损伤 Wistar 系雄性大鼠主动脉或颈总动脉。以血小板源性生长因子 A 和大鼠胰腺丝氨酸弹性蛋白酶的地高辛标记 RNA 探针进行原位杂交,并用抗 5-溴脱氧尿嘧啶抗体进行双重染色。用抗血小板源性生长因子 AA、抗血小板源性生长因子 BB、抗胰腺弹性蛋白酶、抗人增殖细胞核抗原等抗体进行免疫染色或免疫双重染色。电镜观察细胞的超微结构。结果发现:①在球囊损伤后 0.5~4h,血小板源性生长因子 mRNA 表达细胞多于弹性蛋白酶 mRNA 表达细胞。②增殖细胞和迁徙细胞既有血小板源性生长因子 mRNA 和其蛋白表达,又有弹性蛋白酶 mRNA和其蛋白表达。③迁徙细胞多为增殖细胞核抗原染色阳性,细胞内可见到核分裂像。血小板源性生长因子可能是刺激中膜平滑肌细胞增殖、迁徙并使其弹性蛋白酶增加的影响因子之一。

关键词: 分子生物学, 血小板源性生长因子诱导血管弹性蛋白酶表达, 原位杂交 细胞增殖, 迁徙, 球囊导管成形术, 动脉硬化

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2005年03月03日

【期刊论文】玉米B染色体特异RAPD分子标记的染色体定位

陈瑞阳, 祁仲夏, 李秀兰, 陈成彬, 宋文芹, 陈瑞阳*

Acta Botanica Sininca Vol. 44 No.4 2002,-0001,():

摘要

B染色体存在于多种动植物中,具有很多独特的性状。B染色体与正常染色体在DNA组成方央十分相似,寻找B染色体特异序列一直是B染色体研究的难点和热点。通过对含有和不含有B染色体的两种玉米(Zea mays L.)基因组进行好RAPD分析,筛选到一个B染色体特异性分子标记B480。该标记与玉米的自主复制起始序列ARSI和ARS2同源,特别是该序列中25bp出现在多种模式生物基因组中。FISH的结果显示,B480集中分布于B染色体着丝粒部位。

关键词: 玉米B染色体, RAPD, 荧火原位杂交(, FISH), 自主复制起始序列(, ARS),

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2005年03月03日

【期刊论文】黑麦A, B染色体着丝粒区同源性的荧光原位杂交分析

陈瑞阳, 张荣信, 陈成彬, 李秀兰, 宋文芹, 陈瑞阳*

科学通报,1999,44(5):520~525,-0001,():

摘要

显微切割了4条黑麦B染色体着丝粒区片段,用连接接头扩增方法(linker adapter PCR, LA-PCR)扩增,得到100-2000bp的扩增产物,用DIC-11-dUTP标记PCR产物进行荧光原位杂交分析,结果表明,此PCR产物业源于黑麦B染色体着丝粒区且和A染色体着丝粒区有较高的同源性,为探讨B染色体起源于A染色体提拱了佐证。

关键词: 黑麦B染色体,, 着丝粒区,, 显微切割,, 同源性,, 荧光原位杂交

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2005年10月31日

【期刊论文】G显带染色体脱色FISH技术在识别胃癌标记染色体中的应用

夏建川, 张建华, 关新元, 王辉云, 刘权章, 张贵寅, 李璞

中华医学业遗传学杂志,2000,17(4):274~277,-0001,():

摘要

目的应用一种能快速、准确识别胃癌标记染色体来源的技术,以提高对胃癌细胞复杂染色体畸变辨认的能力。方法采用改良的G显带染色体标本脱色后进行荧光原位杂交 (fluorescence in situ hybridization, FISH),分别对胃癌系SGC-7901的两条标记染色体 (1和M 2) 和一例原发性胃癌的标记染色体 (M3) 进行分析。结果 显示了M 1、M2和M3有复杂的染色体结构畸变:del(7)(p15)/del(7)(q22); t(1; 3)(p11; q11)和del(7)(q32)。结论 该方法具有信号强、背景低和重复性好等优点,在识别胃癌染色体复杂结构改变中具有重要的作用。

关键词: 染色体畸变, 细胞遗传学, 荧光原位杂交

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2005年10月31日

【期刊论文】28例原发性胃癌的直接染色体分析和荧光原位杂交检测

夏建川, 肖晟, 张建华, 刘权章, 张贵寅, 李璞

中华肿瘤杂志,1999,21(5):345~349,-0001,():

摘要

目的检测原发性胃癌的染色体畸变,分析这些变化在胃癌发生和发展中的作用。方法用改良的实体瘤染色体直接制备法,对28例原发性胃癌染色体进行G显带分析,在此基础上建立了一种G显带后脱色,再进行荧光原位杂交(Hs H)的方法m分子水平上证实染色体DNA的变化。结果病例1,2具有简单染色体数目改变,核型分别为49,XY,+2,+8,+9和47,XX,+8,+20。其余26例原发性胃癌的染色体改变复杂,常见的染色体结构异常包括,7q-(21/26)、3p-(14/26)、1p-(11/26)和17p-(10/26)。结论原发性胃癌的染色体改变可分为两种类型:简单型只涉及1~3条染色体 数目改变,8号和9号染色体三体可能构成胃癌的一个细胞遗传学亚型,复杂型涉及较多染色体数目和结构畸变,7q-为最一致的结构异常,可认为是原发性胃癌特征性染色体结构改变之一,7q32-qter区域可能含有一个与胃癌发生和发展密切相关的抑癌基因。

关键词: 胃肿瘤/, 遗传学, 染色体, 原位杂交,, 荧光

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2004年12月29日

【期刊论文】应用FISH技术对肝癌细胞系x染色体畸变的研究

王占民, 刘军, 王学浩, 郑淑芳, 柯扬

肝胆外科杂志,2003,11(2):151~152,-0001,():

摘要

目的 研究人肝细胞肝癌细胞系X染色体畸变规律。方法 制各三株新建人肝细胞肝癌细胞系HCC-9903、EGHC-990l、HCC-98l0染色体标本,用X染色体着丝粒特异DNA探针,对其X染色体进行荧光原位杂(FISH),检测X染色体拷贝数畸变。结果 三株肝癌细胞系X染色体拷贝数均增多,以4拷贝为主。结论 X染色体拷贝数增多在肝癌细胞系中发生频率很高,证明在肝癌发病及发展过程中起到某种作用,其意义值得进一步探讨。这是以FISH技术对肝癌X染色体拷贝数研究的首次报告。

关键词: 肝恶性肿瘤, X染色体, 荧光原位杂交(, FISH),

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2004年12月29日

【期刊论文】应用FISH技术对肝癌细胞系HCC-9903X染色体变异的研究

王占民, 刘军, 郑淑芳, 李东华, 吴小鹏, 马道新, 李昭晖, 刘博, 赵志伦, 柯扬

中华普通外科杂志,2003,18(2):105~106,-0001,():

摘要

目的 研究人肝细胞肝癌细胞系HCC-9903 X染色体畸变规律。方法 建立肝细胞肝癌细胞系HCC-9903,制备其染色体标本,用X染色体着丝粒特异DNA 探针,对其X染色体进行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FLSH)检测X染色体拷贝数畸变。结果 HCC-9903肝癌细胞系染色体变异发生率高,其中X染色体改变存在规律,拷贝数增多,以4拷贝为主,X染色体扩增率达99%。结论 X染色体拷贝数增多在肝癌细胞系中发生频率很高,证明在肝癌发病及发展过程中起到某种作用,其意义值得进一步探讨。

关键词: 癌,, 肝细胞, X染色体, 原位杂交,, 荧光

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2005年07月20日

【期刊论文】IL-8 在兔动脉粥样硬化模型中斑块处的蛋白和基因表达

陈槐卿, 聂永梅, △, 成敏, 刘小菁, 邓伊伶

生物医学工程学杂志,22(2):258~264,-0001,():

摘要

白细胞介素-8(Interleuk in-8,IL-8)是趋化因子CXC亚家族的一员,对中性粒细胞有趋化作用,可以诱导平滑肌细胞的增殖和迁移,是一个促血管生成因子,在动脉粥样硬化慢性炎症过程中起着重要作用。本文通过建立兔高脂血症动脉粥样硬化斑块模型,动态监测了在动脉粥样硬化发展过程中IL-8的蛋白和基因表达,以了解IL-8在动脉粥样硬化中的作用。采用免疫组化的方法定位IL-8在高脂血症兔动脉粥样硬化斑块模型主动脉升弓部血管壁的蛋白表达,8、12周模型组内膜显著增厚并有明显阳性染色,半定量分析A S模型组阳性染色的面积分别是对照组的4.48、8.76倍,平均积分光密度(IOD)值分别是对照组的4.16、4.36倍。采用双抗夹心EL ISA法测定兔血管组织匀浆液中的IL-8蛋白表达量,8、12周A S模型组IL-8蛋白含量与总蛋白比值和对照组比较均有显著性差异,分别是对照组的1.84、2.06倍。用原位杂交的方法定位IL-8mRNA的表达,8周模型组血管内膜有强的阳性染色,IL-8mRNA的表达增加。本研究通过建立动脉粥样硬化模型,动态监测了整个动脉粥样硬化过程中IL-8的蛋白和基因表达。IL-8的蛋白和基因上调主要是在高脂血症兔动脉粥样硬化模型的脂纹期。

关键词: 白细胞介素-8, 动脉粥样硬化, 免疫组化, EL ISA, 原位杂交

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2005年03月08日

【期刊论文】α-synuclein2pEGFP真核表达载体的构建及其在SH2SY5Y细胞中的表达①

杨慧, 张宇新, 赵焕英, 苏月, 苏玉金, 赵春礼, 徐群渊

神经解剖学杂志,2003,19(3):124~128,-0001,():

摘要

为了构建α-synuclein-pEGFP真核表达载体,检测其在SH-SY5Y细胞内的表达,本研究应用下述方法:PCR扩增α- synuclein基因并消除终止密码子;PCR产物连入pGEM T-easy载体,经测序确认无误后,亚克隆入pEGFP-N1,构建α-synucle-in-pEGFP真核表达载体;LipofectAMINE法转染SH-SY5Y细胞;荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,原位杂交和免疫荧光细胞化学法检测α-synucleinmRNA及其蛋白表达。结果显示,该载体转染SH-SY5Y细胞后,可在细胞内观察到报告基因和目的基因的表达产物。结论:α-synuclein-pEGFP真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达。本工作为今后动态观察研究α-synu-clein致Parkinson病多巴胺能神经细胞损伤机制奠定基础。

关键词: α-synuclein, 绿色荧光蛋白, 原位杂交 荧光免疫细胞化学

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2005年03月08日

【期刊论文】原位杂交检测味蛋白及转导蛋白味蕾的表达

杨慧, *, 徐群渊, Roper S Chaudhari N

解剖学报,2000,31(S1):41~44,-0001,():

摘要

目的 利用原位杂交检测味细胞中G蛋白的表达。方法 分别用RT-PCR方法克隆大鼠味蛋白及(a-rod)转导蛋白的全长cDNA,制备地高辛标记的正义链及反义链探针。结果原位杂交分析了150个大鼠味蕾,结果显示味蛋白和转导蛋白在舌味蕾细胞中都有表达。但两种蛋白标记细胞数量有明显差别。每个味蕾大约有1.2个转导蛋白阳性细胞,占总味蕾细胞的0.8%;而每个味蕾平均有6.2个味蛋白阳性细胞,占总味蕾细胞的4.1%;即味蕾中味蛋白阳性细胞大约是转导蛋白阳性细胞的5倍。转导蛋白探针对味蛋白mRNA无交叉杂交反应。在视网膜上可见转导蛋白基因的高度表达,而无味蛋白的表达。结论味蛋白和转导蛋白可能是味细胞的G-蛋白,但以味蛋白特异性表达为主。它们可能参与味觉的信号转导作用。

关键词: 味蛋白, 转导蛋白, 原位杂交 味觉

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2005年03月08日

【期刊论文】人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ基因的克隆与表达

杨慧, 苏玉金, 江小华, 姜重建, 张宇新, 杨秋慧, 徐群渊

解剖学报,2003,34(4):349~352,-0001,():

摘要

目的 研究人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ(GCH Ⅰ)基因在多巴胺代谢过程中的作用。方法 从人胚胎肝脏中提取总RNA,以RT-PCR法扩增GCH ⅠcDNA,克隆于PGEM-T-easy载体中,测序正确后+G18再构建真核表达载体,转染猴肾成纤维细胞系COS7,原位杂交检测其表达。结果 RT-PCR扩增出904bp的cDNA,并成功构建真核表达载体pCI-neo-GCH Ⅰ,原位杂交证实其在COS7表达阳性率为70%~80%。结论 GCH Ⅰ有望用于帕金森病的基因治疗。

关键词: 三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ, RT-PCR, 原位杂交 人胚肝脏

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2005年03月04日

【期刊论文】基因组分析与小麦抗病育种

刘大钧

植物学报,2002,44(9):1096~1104,-0001,():

摘要

系统总结了南京农业大学细胞遗传研究所近20多年来利用基因组分析方法培育从簇毛麦(aynaldia villosa Sch.)、大赖草(Leymus racemosus Lam.)、鹅观草(Roegneria kamoji C. Koch)和纤毛鹅观草(R. ciliaris (Trin.)Nevski)导入白粉病和赤霉病抗性的小麦种质的研究进展。利用染色体C-分带、基因组原位杂交、分子标记(特别是RFLP)等技术与非整倍体分析相结合对所创制的种质进行了系统分析与鉴定。还对所培育的小麦种质在育种实践和理论研究中的潜在价值及相关问题进行了讨论。

关键词: 小麦, 小麦近缘种, 白粉病抗性, 赤霉病抗性, 染色体分带, 原位杂交 分子标记, 基因组分析

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