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2007年11月20日

【期刊论文】RNA 干扰对活化的小鼠巨噬细胞TNFα表达的影响

李瑜元, 谭兵, 周永健, 聂玉强, 杜艳蕾

中华医学杂志2007; 87 (30); 2140,-0001,():

摘要

目的 观察靶向小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因的小干扰RNA对体外小鼠巨噬细胞系RAW264.7表达TNF-α的抑制作用。方法: 采用化学法合成针对TNF-αmRNA不同位点设计的3条siRNA序列和一条带有荧光标记的BLOCK-ITTM Fluorescent Oligo(修饰的荧光标记的dsRNA)通过脂质体包裹后将其分别转染至小鼠巨噬细胞系RAW264.7,同时设立一个无任何靶基因的siRNA做为阴性对照(siRNA4)。荧光显微镜下观察siRNA的转染效率;用实时荧光定量 PCR和ELISA法分别检测siRNA对TNF-α的mRNA和蛋白表达的抑制作用。结果内毒素刺激后6 h ,巨噬细胞表达TNF-αmRNA 和合成分泌的TNF-α量均增加,于9 ~12 h 达 高峰。利用荧光标记的Oligo观察到siRNA转染效率达72%~80%。siRNA1-4转染巨噬细胞后,与未转染组(TNF-αmRNA 0.2935±0.1470,蛋白2104±32pg/ml)相比,siRNA2、3可见内毒素刺激的TNF-αmRNA(0.1576±0.0308、0.1140±0.0277)和TNF-α蛋白表达[(1355± 348)pg/ml、(817±138)pg/ml]均减少(均P< 0.05),其中siRNA3的抑制率非常显著,达61.2%(P< 0.01)。阴性对照siRNA4对细胞基因及蛋白表达无影响。结论内毒素可刺激小鼠巨噬细胞TNF-α的合成。化学合成siRNA转染小鼠巨噬细胞有较高的转染效率,能有效抑制 TNF-αmRNA及蛋白的表达。

关键词: RNA干扰, 小干扰RNA 巨噬细胞, 肿瘤坏死因子α

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2006年07月31日

【期刊论文】RNA干扰技术在哺乳动物中的应用*

白春学, 陈杰**, 张敏

生物化学与生物物理进展,2003,30(4):650-654,-0001,():

摘要

RNA干扰(RNAi)是生物界普遍存在的一种抵御外来基因和病毒感染的进化保守机制RNAi是由双链RNA触发的转录后基因沉默机制,具有序列特异性,在哺乳动物细胞中,RNAi由21~23个核苷酸组成的双链RNA引发小干扰RNA(siRNA)可以在体外合成或通过表达载体在哺乳动物细胞内合成由于RNAi技术具有快速、简单和特异性强等特点,在基因功能研究、抗病毒治疗和抗肿瘤治疗等方面有广泛的应用前景。

关键词: RNA干扰, 小干扰RNA 哺乳动物

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2006年08月16日

【期刊论文】小干扰RNA对喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原及p53蛋白表达的影响

陶泽璋, 周俊旭△, 周绪红, 肖伯奎, 陈始明, 刘丹

J Clin Otorhinolaryngol (China), Mar 2006, Vol 20, No6,-0001,():

摘要

目的:应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制裸鼠喉癌皮下移植瘤人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达,探讨移植瘤中增殖细胞核抗原(PCNA)及p53蛋白表达的变化。方法:根据hTERTcDNA序列构建表达短发夹RNA(shRNA)的、靶向hTERTmRNA的真核表达质粒pshRNA,其载体质粒含荧光素报告基因。建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下接种模型,将pshRNA转染入荷瘤裸鼠瘤体内,观察肿瘤生长情况。以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤体内的表达;以免疫组织化学SP法检测PCNA及p53蛋白在肿瘤内的表达。结果:所有裸鼠均接种成功,5d后可见皮下肿瘤形成,14d 左右肿瘤直径达5~7mm。pshRNA及空质粒载体转染入瘤体后,共聚焦显微镜下见癌组织中有绿色荧光表达。病理学检查发现:pshRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞分裂少见,可见大量癌细胞坏死。与注射生理盐水的对照组比较,转染质粒完毕后7d抑瘤率为76.50%,P<0.01。pshRNA治疗后瘤体内PCNA蛋白表达显著下调(P<0.05),p53蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论:靶向hTERTmRNA的shRNA可显著抑制人喉癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能是诱导PCNA 下调,促进p53蛋白表达所致。

关键词: 喉肿瘤, 癌,, 鳞状细胞, 小干扰RNA 人端粒酶逆转录酶, 增殖细胞核抗原, p53蛋白

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