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2009年04月23日

【期刊论文】骨髓基质细胞的体外培养和成骨方向的诱导分化

凌均棨, 唐志英, 林家成, 李京平, 杨国平

中华老年口腔医学杂志,2005,3(1):4~7,-0001,():

摘要

目的:体外分离狗的骨髓基质细胞,诱导其成骨分化并鉴定成骨活性。方法:体外分离培养狗的骨髓基质细胞,传代培养中加入10—8mol/L地塞米松、50μg/ml维生素C和10mmol/Lβ-甘油磷酸钠进行诱导分化,进行细胞形态和增殖观察,矿化结节Von Kossa染色,细胞碱性磷酸酶染色和Ⅰ型胶原免疫组化染色检测其成骨活性。结果:骨髓基质细胞经诱导后表现出明显的成骨活性,体外矿化结节Von Kossa钙染色阳性;传代细胞碱性磷酸酶染色阳性,酶活性>80%,Ⅰ型胶原免疫组化染色强阳性。结论:体外分离培养的骨髓基质细胞中含有骨源性前体细胞,传代细胞具有较强的成骨潜能。

关键词: 骨髓基质细胞, 碱性磷酸酶, 染色法

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2007年11月26日

【期刊论文】神经组织细胞特异性蛋白在大鼠羊膜上皮细胞中的表达

陈东, Lou

中国临床康复2006-07-10出版第10卷第25期/Chinese Journal of Clinical Rehabilitation July 10, 2006, Vol. 10, No. 25,-0001,():

摘要

背景:有证据表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原,且可以分泌多种神经营养因子及递质。若羊膜上皮细胞能够代替神经细胞,其神经营养作用必将为治疗神经推行性病变带来广阔前景。 目的:检测神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中是否表达? 设计:重复测量设计。 单位:吉林大学第二临床医学院,吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。 材料:实验于2004-10/2005-10在吉林大学基础学院组织与胚胎学教研室完成。选取清洁级孕12~14d的Wistar大鼠1只,将分离出的羊膜上皮细胞用于实验。小鼠抗大鼠神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶单克隆抗体、免抗大鼠神经元特异性烯醇化酶和NT-3多克隆抗体(武汉博士德公司);大鼠抗大鼠Musashi抗体(日本庆应义塾大学岗野荣之教授惠赠)。 方法:取孕12~14d的Wistar大鼠胎盘,剥离羊膜获得上皮细胞,在37℃、体积分数为0.05的CO2环境下,胰蛋白酶消化5min,加入DMEM/F12培养液,以5×109L-1的浓度接种于培养瓶中。培养3d后,细胞以1×108L-1的浓度接种于预先涂有多聚赖氨酸的直径35mm平皿中,用质量浓度为40g/L的多聚甲醛固定20min。采用免疫细胞化学染色方法对神经元特异性抗原微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶在羊膜上皮细胞中的表达情况进行检测。 主要观察指标:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况。 结果:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察:羊膜上皮细胞培养24h后,细胞扁平呈成纤维细胞样。3~5d后,胞体饱满,核大而圆,核仁清晰,突起发达,并互相连成网状。②神经组织细胞培养特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况:培养4d后免疫细胞化学染色结果可见,羊膜上皮细胞表达Nestin、神经元特异性烯醇乙酶、乙酰胆碱转移酶以及Musashi、神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白。 结论:羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性,可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源。

关键词: 羊膜, 上皮细胞, 免疫细胞化学, 染色法 组织细胞, 大鼠

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2006年10月10日

【期刊论文】CD44介导的透明质酸对单核细胞黏附和迁移的作用

谭玉珍, 李鸿帅, 王海杰

解剖学报,2005,36(5):541~545,-0001,():

摘要

目的 研究透明质酸(HA)在单核细胞中的分布,HA受体CD44和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在单核细胞中的表达以及HA及其受体对单核细胞黏附和迁移的影响。 方法 用Percoll非连续密度梯度离心法分离狗外周血单核细胞,然后用免疫荧光染色法标记单核细胞的HA、CI)44和ICAM-1。通过用透明质酸酶(HAase)消化细胞表面的HA、在培养皿底面和细胞培养池膜上涂布HA和在培养液中添加HA,观察细胞表面的HA、底物HA和游离HA对细胞黏附和迁移的影响。以抗体阻断剂抑制CIM4或ICAM-1,研究HA受体的介导作用。 结果 单核细胞表面和细胞内存在HA,并表达CD,:M和ICAM-1。消化细胞表面HA后,黏附和迁移的单核细胞数减少。在培养皿底面和细胞培养池膜上铺HA,黏附和迁移的细胞数增加。培养液中加入HA,黏附和迁移的细胞数减少。阻断CI)44后。HA底物上黏附和迁移的细胞数减少,而阻断ICAM-1后黏附和迁移的单核细胞数无明显变化。结论 单核细胞内外分布有HA。单核细胞表面的HA和底物HA促进细胞的黏附和迁移,但游离HA阻碍单核细胞的黏附和迁移。CI)44介导HA对单核细胞黏附和迁移的作用。

关键词: 单核细胞, 透明质酸, CD44, 细胞间黏附分子-1, 免疫荧光染色法

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