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2009年10月21日

【期刊论文】大肠杆菌可溶性表达人碱性纤维细胞生长因子的研究

洪岸, 孙晋华, 洪岸*, 张玲, 孙奋勇, 宋照熙

微生物学报,2003,43(4):448~452,-0001,():

摘要

包涵体的形成与外源基因在大肠杆菌中的表达量高度相关,在适当的范围内,降低hbFCF在表达宿主BL21(DE3)plysS中的表达,成为实现高可溶性表达的关键。在不改变氨基酸序列的条件下,对hbFCF高表达菌株突变重组子起始密码ATC下游前3个密码子的摇摆碱基进行随机回复突变,共有7种组合,合成引物PCR扩增后,克隆至表达载体pET-3e,将重组子转导BL21(DE3)plysS后,IPTC诱导表达,发现其中1株有较高可溶性和活性的菌株。可见部分降低外源蛋白的表达量可以避免与减少包涵体的形成。

关键词: 可溶性表达,, 包涵体,, 碱性成纤维细胞生长因子,, 大肠杆菌,, 回复突变

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2009年07月14日

【期刊论文】大鼠血管平滑肌细胞中bFGF及其受体FGFR-1的基因表达

陈剑秋, 孙晋津

天津医科大学学报, 2005,11(1):8~10(下转第l4页),-0001,():

摘要

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体FGFR-1在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的表达情况。方法:建立大鼠血管平滑肌细胞原代培养并鉴定;使用原位杂交检测VSMCs中bFGF及其受体FGFR-l的mRNA表达;用免疫组织化学和Western Blot技术鉴定bFGF蛋白表达情况。结果:通过光镜和免疫组织化学技术从细胞形态和结构上使VSMCs得到鉴定;原位杂交证实大鼠VSMCs表达bFGF及其受体FGFR-l的mRNA;免疫组织化学表明VSMCs的胞核和胞浆中有bFGF蛋白表达,Western Blot显示bFGF有18KDa、22KDa、22.5KDa 3种异构体形式。结论:大鼠血管平滑肌细胞表达bFGF及其受体FGFR-1 mRNA,bFGF有多种异构体形式并分布在VSMCs的胞核和胞浆中。

关键词: 碱性成纤维细胞生长因子 受体, 血管平滑肌细胞, 大鼠

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2009年03月27日

【期刊论文】外源性碱性成纤维细胞生长因子对缺血大鼠脑内源性碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

叶诸榕, 陆锦标, 刘颖, 施建英

中国神经科学杂志,2004,20(4):290~294,-0001,():

摘要

目的 研究外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)缩小局灶性脑缺血梗死灶的机制。方法 用免疫组化ABC法检测在局灶性脑缺血模型上给予生理盐水或bFGF后早期生长反应蛋白-1(Egr-1),bFGF,碱性成纤维细胞生长因子受体(bFGFR)的动态表达。结果给药组在3h-3d各时间段梗死灶均有不同程度的缩小。对照组和给药组Egr-1表达均表现为3~6h的增强过程,但给药组更强于对照组。对照组12h见有bFGF表达增强,而bFGFR表达3h到达高峰,6h起下降,12h时bFGFR的表达已恢复至正常水平(出现了配体和受体表达时相上不匹配)。给药组bFGF表达提前且增强,3h即见有bFGF表达增强,6h时出现第一峰,从而与bFGFR 3~6h的表达增强过程相吻合。结论 外源性bFGF能缩小梗死灶,该神经保护作用是通过Egr-1蛋白高表达使内源性bFGF的表达增高且提前,从而与bFCFR的表达增强过程重叠而实现的。

关键词: 脑缺血, 碱性成纤维细胞生长因子 碱性成纤维细胞生长因子受体

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2009年03月27日

【期刊论文】bFGF, bFGFR及Egr-1基因蛋白在大鼠局灶性脑缺血后的表达

叶诸榕, 刘颖, 陆锦标, 朱建辉, 张秀荣, 赵仲华

中国神经科学杂志,2002,18(3):602~606,-0001,():

摘要

观察持续性局灶性脑缺血(permanent middle cerebral artery oeellasion, pMCAO)损伤后表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblas growth factor, bFGF)的细胞种类、时相与不同细胞之间的相互影响,并探讨Egr-1基因蛋白对bFGF表达的影响。结果表明:在持续性局灶性脑缺血后,缺血梗死灶周边区免疫组化结果显示bFGF表达出现双相增强。缺血1h缺血边缘区主要在星形胶质细胞(Astrocyte, As)中bFcF出现一过性增强,并见细胞外基质中出现bFGF点状着色。缺血6h~1d时bFCF染色再次增强,神经元及各类胶质细胞中的表达均有增强。但是经Western-blot定量测定发现脑组织bFGF含量仅在缺血后6h~1d时出现增强。缺血1h时,bFGF可能经缺血细胞受损的细胞膜到达细胞外,与细胞外硫酸肝素或相关分子结合,内化进入缺血边缘区细胞,从而造成bFGF免疫组化染色一过性增强。第二次增强可能是缺血损伤刺激及内化的bFGF诱导的蛋白合成的增加。缺血2~6h bFGFR在神经元及各类胶质细胞中的表达均增强,主要位于缺血区的边缘。由于bFGFR表达时程早于bFGF转录合成增加,因此限制了内源性bFGF发挥保护缺血损伤神经元的作用,这使得外源应用bFGF成为必要。Egr-1基因蛋白的表达在缺血损伤后1~6h增强,其表达增高的时相早于bFGF蛋白转录合成的增加,并且因为其能够促进bWGF启动子的活性,因而可能在bFGF自分泌机制中发挥重要作用。

关键词: 碱性成纤维细胞生长因子(, bFGF), 碱性成纤维细胞生长因子受体(, bFCFR), 早期生长反应蛋白-1(, Egr-1), 脑缺血

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2009年03月27日

【期刊论文】大鼠持续性灶性脑梗死区血脑屏障改变对125I-碱性成纤维细胞生长因子通透的影响*

叶诸榕, 刘颖, 陆锦标

复旦学报(医学版),2002,29(2):79~83,-0001,():

摘要

目的 系统观察大鼠持续性局灶性脑缺血(permanent oriddle cerebral artery occlusion, pMCAO)后0.5h到14d血脑屏障(blood-brain bamier, BBB)的损伤及对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)通透的影响。方法 采用抗BBB抗体的免疫组化方法显示pMCAO后不同时间BBB结构的改变。采用125I标记bFGF示踪法显示静脉注射125I-bFGF后脑组织7射线计数变化表示bFGF通透性的变化。结果 在动脉桂塞后O.5h抗BBB免疫组化染色显示毛细血管壁的结构已发生改变,即使到了14d时大量新生毛细血管出现在梗死区周围,但是抗BBB抗体免疫组化仍为阴性,表明此时血管壁尚未达到完全修复。从梗死后2h开始125I-bFGF通透有明显的增加,持续到梗死后14d,125I-bFGF主要出现在基底节及梗死累及的岛叶和顶叶皮层。结论脑缺血后外周静脉应用bFGF是可行的,尽早应用bFGF对保护神经元是至关重要的。

关键词: 125-I碱性成纤维细胞生长因子 持续性局灶性脑缺血, 血脑屏障

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2005年09月28日

【期刊论文】碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及表达

周刚, 张启旭, 陆佳韵, 刘芝华

中国修复重建外科杂志,2004,18(5):435~439,-0001,():

摘要

目的构建人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast grow th facto r,bFGF)真核表达质粒,研究其在体内外的表达。方法通过基因克隆技术,构建并大量制备pcDNA 3.1/myc-His(-)C-bFGF真核表达体系,RT-PCR和细胞免疫组织化学方法检测体外瞬时表达情况;直流电脉冲介导重组质粒pcDNA 3.1/myc-His(-)C-bFGF和pCD2-血管内皮细胞生长因子121(vascularendo thelial growth factor, VEGF121)在兔颈部肌肉瓣内转移并表达, 测定其促血管生成的生物学效应。结果构建的pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF真核表达体系成功转染体外培养HeLa细胞,目的基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达。pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF和pCD2-VEGF121重组质粒分别转染在体肌瓣,获得外源基因高水平表达。转基因肌肉发生血管增生、血流增强的生物学效应。结论构建了人bFGF真核表达质粒,并可在体内外顺利表达,为进一步组织移植或组织工程基因治疗研究奠定了基础。

关键词: 碱性成纤维细胞生长因子 基因克隆, 基因表达

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