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2011年04月25日

【期刊论文】石榴皮提取物的大孔树脂纯化及其抗氧化性能

张元湖, 张立华, 张元湖※, 安春艳, 杨雪梅

农业工程学报,2009,25:142~147,-0001,():

摘要

为开发石榴皮资源提供技术支持,从D101、AB-8和DA-2013种大孔吸附树脂中筛选出D101树脂,进一步研究D101对石榴皮提取物中多酚和总黄酮的纯化工艺。所得最佳纯化工艺为:上柱液浓度5ms/mL,pH5,上柱液体积180mL,上柱液流速80mL/h,以60%乙醇溶液为洗脱液,洗脱流速80mL/h,洗脱液体积为100mL。在此条件下,多酚和总黄酮的含量由30.43%和17.12%分别提高53.55%和35.71%。同时对纯化前后的抗氧化活性进行了比较研究。结果表明,石榴皮提取物经纯化后清除二苯基三硝基苯肼自由基(DPPH•)和抗油脂过氧化能力都强于粗提物。

关键词: 石榴皮,, 多酚,, 黄酮,, 大孔树脂,, 纯化,, 抗氧化作用

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2011年04月19日

【期刊论文】铜诱导华溪蟹金属硫蛋白的分离纯化

王兰, 马文丽, 王兰*

食品科学,2008,29(5)78~82,-0001,():

摘要

采用体外铜暴露法对河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)进行处理,诱导金属硫蛋(metallothionein,MT)的高效表达。取肝胰腺组织匀浆、冷冻离心,采用丙酮沉淀粗提(50%~80%),然后将MT粗提液依次经过SephadexG-50凝胶过滤层析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、透析脱盐、冷冻干燥,分离纯化MT,并进行洗脱峰的紫外光谱扫描分析、SDS。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE)及质谱分析。结果表明:得到了纯度较高的华溪蟹MT,主要以单体及二聚体形式存在,其分子量为6882D。

关键词: 铜, 河南华溪蟹, 金属硫蛋白, 分离纯化

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2011年03月18日

【期刊论文】邻单胞菌M6中甲基对硫磷水解酶(MPH)的纯化及性质的研究①

崔中利, 徐玮②, 林恒③, 刘卫东, 李顺鹏

高技术通讯,2006,16(1):84~87,-0001,():

摘要

通过热变性、硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex-A50阴离子交换层析和CM Sephamse Fast Flow阳离子交换层析等一系列步骤从有机磷农药降解菌Plesiomonas sp. M6中获得了甲基对硫磷水解酶(Methvl parathion hydrolase, MPH, EC 3.1.8.3)的电泳纯。酶谱显示和SDS-PAGE电泳表明纯化的酶只有一条条带,其分子量约为33kD。该酶热稳定性比较高,55℃、15min处理后酶活保持稳定,最适反应pH为9.0,最适反应温度在10℃左右。动力学分析表明其对甲基对硫磷的米氏常数(Km)为2.14mmol/L,最大反应速度(Vmax)为14.08μmol/L. min,转换数(kcat)为2863s-1。

关键词: 甲基对硫磷水解酶(MPH), 邻单胞菌M6, 纯化 性质

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2011年01月04日

【期刊论文】亚微米生物功能磁性复合微球的构建及在质粒DNA捕获中的应用①

邓乐, 雷涵②, 邓乐③, 朱文杰

高技术通讯:2002,8:75~80,-0001,():

摘要

采用分散聚合法,以Mn-Zn铁磁体为磁核,苯乙烯-丙烯酸共聚物为高分子壳层,合成了表面带羧基的磁性高分子微球。通过比较微球与有机试剂(酚/氯仿)纯化分离质粒DNA的效果,得出结论:前者具有安全、低耗、快速、高效及不接触有毒试剂的特点。

关键词: 分散聚合,, Mn-Zn铁磁体,, 磁性高分子微球,, 质粒DNA,, 纯化分离

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2010年07月01日

【期刊论文】共轭亚油酸的性质及合成

陈忠周, 丰艳梅, 赵刚, 赵玉芬

中国油脂,2000,25(5):41~45,-0001,():

摘要

系统地介绍和评述了共轭亚油酸的化学、生理性质,来源,合成与转化,分离纯化及检测等领域近年来的进展。由于共轭亚油酸对实验动物具有抗突变、抗癌、抗动脉粥样硬化、减肥、缓和免疫反应副作用等许多优点,因此在药物和食品等研究领域中有很广阔的应用前景。

关键词: 共轭亚油酸, 生理性质, 异构化, 抗癌, 分离纯化

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2009年10月21日

【期刊论文】pET15b-EGFP原核表达载体的构建及其表达和纯化

王一飞, 董晓, 王家宁黄永章郭凌郧

郧阳医学院学报,2005,24(6):321~325,-0001,():

摘要

目的:利用中间载体pGEM-T easy vector构建表达型载体pET15b-EGFP,在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白EGFP并将其纯化。方法:以质粒pLEGFP-C1为模板采用聚合酶链反应(PCR)的方法特异性扩增EGFP cD-NA序列,利用Taq DNA聚合酶的非模板依赖性末端转移酶活性催化PCR扩增的EGFP序列和三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,在EGFP序列两3’端加“ ,将纯化后的EGFP序列与中间载体pGEM-T easy vector连接后转化感受态大肠杆菌DH5ct,经蓝白筛选,挑取白色单菌落进行扩增、酶切鉴定,正确重组的质粒命名为pGEM-T-EGFP用XhoI和BamH1分别双酶切pGEM-T-EGFP和pET15b,低熔点琼脂糖回收EGFP eDNA和线性化的pET15b片段后将两片段相连,转化感受态大肠杆菌DH5ct并对重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序,获取正确重组的表达型质粒并命名为pET15b-EGFP。将正确重组的质粒pET15b-EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基p-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。利用表达蛋白N端的组氨酸“标签”(His-tag)进行N一树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化蛋白质。结杲:经测序证实重组质粒pET15b-EGFP中的EGFP eDNA序列与从Clontech公司购买的质粒pLEGFP-C1中的EGFP eDNA序列完全一致,从而成功构建了表达型重组质粒pET15b-EGFP。pET15b-EGFP转化感受态大肠杆菌BI21(DE )并经诱导后得到高效表达,表达量可达66me,/100ml菌液,SDS-PAGE和Western blotting显示纯化蛋白为目的蛋白EGFP。结论:表达型重组质粒pET15b-EGFP的成功构建和表达、纯化为细胞穿透肽-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。

关键词: TA克隆载体, 增强型绿色荧光蛋白(, EGFP), 重组质粒, 蛋白表达, 蛋白纯化

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2009年10月21日

【期刊论文】灭活SARS病毒的纯化鉴定及初步应用

王一飞, 钱垂文, 熊盛, 张关英, 陆家海, 张传海, 李久香, 万卓越, 郑焕英, 张庶民

现代免疫学,2005,25(2):152~154,-0001,():

摘要

为制备纯化的灭活SARS病毒,取广东省CDC提供的灭活SARS-CoV病谳培养液进行超滤,收集相对分子质量介于100000至500000之间的组分。并浓缩。对纯化过程中各组分进行抗原活性签定和蛋白质含量测定。并加佐剂后免疫动物,测定抗体免疫应答。结果表明:超滤后活性抗原蛋白质回收率7.6%,纯化倍数为9,抗原活性达到1∶480 免疫家免获得的血清ELISA效价达到1∶10000以上,中和抗体效价达到1∶2000以上。表明该纯化工艺能获得较高纯度的灭活SARS-CoV病毒颗粒。

关键词: SARS-CoV, 纯化 ELISA, 免疫应答

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2009年09月18日

【期刊论文】锌金属硫蛋白的初步研究

刘成梅, 熊勇华, 杨晓浪, 吴广平

食品科学,2003,24(3):53~56,-0001,():

摘要

本文介绍了金属硫蛋白的理化性质以及生物学功能。研究了锌诱导家兔肝脏金属硫蛋白产生,提取纯化以及鉴定的方法。

关键词: 金属硫蛋白, 分离纯化 鉴定

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2009年09月18日

【期刊论文】百合多糖的纯化与化学结构鉴定研究

刘成梅, 付桂明, 游海, 涂宗财, 万茵

食品科学,2002,23(5):114~117,-0001,():

摘要

本研究从百合水提液中分离纯化得到两种多糖LP1、LP2,得率分别为鲜百合重0.55%、0.25%,经纸层析和凝胶柱层析鉴定均为单一组分,将这两种多糖进行气相色谱和凝胶柱层析分析,结果如下: LP1 由葡萄糖、甘露糖组成,比例为1:2.46,分子量为7.94×104 LP2由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸组成,比例为1:0.73:2.6:1.8:0.84,分子量1.815×104。

关键词: 百合多糖, 纯化 鉴定

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2009年09月13日

【期刊论文】抗突变乳酸菌的筛选及其活性物质的分离纯化

曹郁生, 苏伟

中国乳品工业,2005,33(9):25~29,-0001,():

摘要

采用HPLC法及Ames法对实验室分离和保藏的36株乳酸菌进行筛选,其中乳杆菌L2发酵上清液对阳性物NQO及NPD具有较强的抗突变活性,并且36h的培养物活性最强。将L2发酵上清液进行DEAE-Spharose离子交换层析,收集样品中在A280处有吸收峰共16管,然后用截留分子量为3ku的超滤管进一步纯化脱盐,分别用HPLC法及Ames法对其抗突变活性进行鉴定。结果表明,其中3管具有较强活性,将它们进行PAGE,用考马斯亮蓝R250染色,各管在同一位置出现均一条带,并成功地染上了PAS试剂,因此可初步证明该物质为一种糖蛋白。

关键词: 乳酸菌, 抗突变活性, 筛选, 分离纯化

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2009年07月23日

【期刊论文】家蚕滞育生物钟蛋白质Ea se A4 的纯化及其分子结构分析*

徐世清, 徐世清), 甲斐英则), 徐俊良), 东健一郎), 谷直纪), 郑必平)

中国生物化学与分子生物学报,1999,15(2):242~246,-0001,():

摘要

Ease A4 是家蚕卵的一种滞育生物钟蛋白质. 产下后2d 的家蚕C108 品种滞育性卵,经过丙酮脱脂、85℃热处理、硫酸铵沉淀和Sephadex G225 凝胶过滤层析初步分离,进一步经过Sep 2Pak C18 脱盐浓缩,HPLC (柱为YMC-Pack Protein-RP) 分离,通过SDS2PA GE 和MALD IMS方法鉴定,纯化得到Ease A4 蛋白质。从10g蚕卵最终得到了11.8μg Ease A4。Ease A4由从His 到Tyr 的155个氨基酸残基构成,蛋白质部分的分子量为16 601。其22 位氨基酸残基A sn 处有一个Asn-X-Thr 糖基化场所,并有糖基结合在该部位,糖基的分子量约为760。Ease A4 的61 位和150位的两个Cys 氨基酸残基之间存在二硫键. 糖基和二硫键的存在不仅有利于酶蛋白的分离,还可能与酶活性有关。

关键词: 家蚕, 滞育性卵, Eaterase A4, 纯化 分子结构

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2009年07月07日

【期刊论文】成年猪胰岛分离和纯化的实验研究

于德民, 吴锐, 尹潍, 夏致祥, 袁咏

中华器官移植杂志,1995,16(4):146~149,-0001,():

摘要

采用经胰导管连续灌注胶原酶技术,从每个胰腺中获得平均469100±208300个胰岛(7693个胰岛/g胰腺),纯化后平均152000±109000个胰岛/胰腺(2486个胰岛/g胰腺)。平均回收率32.49%,纯度80%。在培养第1、第3和第7天间,胰岛细胞对高糖和茶碱刺激有明显反应,胰岛素释放量,分别为低糖的1.39~3.67(P<0.05),提示分离纯化后及培养期间的胰岛功能良好。胰岛形态学观察表明,双硫腙特异性的与胰岛B细胞胰岛素颗粒内的锌螯合使其着色,台盼兰染色证实胰岛活率在90%以上。本文将分离纯化后及培养的经双硫腙染色的阳性细胞团进行电镜检查,证实为形态结构完整的胰岛。

关键词: 猪胰岛, 培养, 分离, 纯化

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2009年06月10日

【期刊论文】大孔吸附树脂分离纯化苦杏仁苷的研究

田呈瑞, 崔国庭

食品工业科技,2005(4):89-92,-0001,():

摘要

研究了以苦杏仁为原料,用大孔吸附树脂分离纯化苦杏仁苷的工艺。实验结果袁明,大孔树脂LsA-30比较适舍吸附和分离苦杏仁苷,其交换客量为55.5mg/mL的湿树脂,在室温条件下,pH在6~9时,吸附能力较强;被吸附的苦杏仁苷用pH6或pH8的60%乙醇在40℃条件下,以流速1~2mL/min洗脱,得到的产品为白色晶体,纯度为93.6%。

关键词: 树脂, 分离纯化 苦杏仁苷

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2009年06月10日

【期刊论文】桑椹红色素纯化的动态洗脱条件研究

田呈瑞, 徐建国, 胡青平

食品工业科技,2005(4):155-157,-0001,():

摘要

桑椹红色素是一种安全、无毒的食用天然色素。运用单因素实验和正交实验研究了桑椹红色素在LSA-21大孔吸附树脂上的动态洗脱工艺,经极差分析和方差分析确定了其最佳洗脱条件。结果表明,最佳蒸馏水洗脱条件为:水洗流速1.5BV/h,用水量1q6Bv,时间l.4h;最佳酸}生乙醇洗脱条件为乙醇浓度75%,洗脱流速1.0BV/h,洗脱剂用量2.5Bv。各因素时色素洗脱效果的影响程度依次为洗脱流速、乙醇浓度、洗脱剂用量。经纯化后的色素为紫黑色粉末,其色价是未纯化的8倍左右,比国家规定的最低标准提高了14倍左右。

关键词: 桑椹红色素, 纯化 大孔吸附树脂, 动态洗脱

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2009年06月10日

【期刊论文】桑椹红色素纯化的动态吸附条件研究

田呈瑞, 徐建国, 胡青平

西北植物学报,2005(6):1166-1170,-0001,():

摘要

桑椹红色素是一种安全、无毒的食用天然色素。本实验对8种大孔吸附树脂进行筛选,然后通过单因素试验、正交试验和方差分析确定了吸附桑椹红色素的最佳操作条件。结果表明,LSA-21树脂对桑椹红色素的吸附和解吸性能较好确定的最佳吸附条件为:料液浓度(以吸光度计)为0.425Abs,上柱速度3.5Bv/h,料掖pH1.57。

关键词: 桑椹红色素, 纯化 大孔吸附树脂, 动态吸附

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2009年04月06日

【期刊论文】肿瘤基因组学研究中纯化技术的应用与发展

田勇泉, 刘仲奇

《癌症》,2004,23(11):1357~1360,-0001,():

摘要

为了获得尽可能纯净的肿瘤组织、细胞用于肿瘤基因组学研究,人们发展了一系列的肿瘤组织纯化技术。从各种手工显微切割纯化技术,到借助各种机械手段并经显微切割纯化肿瘤组织,再发展到激光技术在组织纯化领域内的全面应用,推动了肿瘤基因组学研究的发展。每一种纯化技术都有其各自的优势与不足,究竟采取哪种方式,取决于研究者对实验的要求以及研究者所处的环境条件。

关键词: 肿瘤基因组学, 纯化 显微切割

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2009年03月30日

【期刊论文】重组双功能水蛭素的发酵、纯化和鉴定

宋后燕, 莫炜, 张艳玲, 王龙生, 杨新英, 宋后燕*

生物工程学报,2004,1(1):126-129,-0001,():

摘要

构建了重组双功能水蛭素(Recombinant-RGD-Hinodin、r-RGD-Hirudin)cDNA的表达质粒RGD-Hirudin-pPIC9K,转化入毕赤酵母中,经筛选得到高表达的阳性克隆。种子菌经过3d发酵培养,其培养液上清经超滤浓缩、凝胶过滤层析和离子交换层析后,得到纯度大于97%、比活性为12000ATU/mg的r-RGD-Hirudin,回收率大于60%,发酵产率为1g/L。纯化后的r-RGD-Hirudin经过还原SDS-PAGE,抗凝血酶活力分析、抗血小板聚集分析、质谱分析及等电聚焦分析等方法鉴定,证明该表达产物为水蛭素的衍生物,具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重功能。

关键词: 重组双功能水蛭素(, r-RGD-Hiroudin), 高效表达, 发酵, 纯化 鉴定

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2009年02月20日

【期刊论文】短双歧杆菌α-D-半乳糖苷酶的纯化及性质

肖敏, 刘树峰, 朱崇日, 钱新民

中华微生物学和免疫学杂志,2001,5(3):307~311,-0001,():

摘要

目的 研究短双歧杆菌(Bifidobacterium breve) α-D-半乳糖苷酶的纯化及性质。方法 采用硫酸铵分级沉淀及柱层析法纯化酶蛋白,垂直板状SDS2PAGE 和native gradient PAGE 检查蛋白纯度。结果 native gradient PAGE 电泳后活性染色确定无细胞粗酶液中含有一种α-D-半乳糖苷酶,纯化后的酶蛋白是一个相对分子质量(Mr) 约为156×103 的双亚基蛋白质,等电点pH为5.3,最适反应温度为37℃,在40℃以下稳定,70℃时失去所有的酶活性。最适反应pH 为5.5~6.5,酶在pH5.5~9.5 范围内稳定。Hg+、Cu2 +、Ag+ (各1mmol/L) 和PCMB (0.01mmol/L) 强烈抑制酶活性,Co2 +、Mg2 +、Ca2 +、Mn2 +、Zn2 + (各1mmol/L) 、EDTA 和DTT(0.01mmol/L) 对酶活性没有抑制。酶专一性水解α-D-半乳糖苷键。酶对p2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷、m2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷和o2硝基苯酚2α-D-半乳糖苷的Km分别为0.168mmol/L、1.07mmol/L 和0.456mmol/L, Vmax 分别为4.55μmol/ min、0.378μmol/ min 和0.614μmol/ min。结论 B. breve 的α-D-半乳糖苷酶与少数国外报道的其他双歧杆菌的α-D-半乳糖苷酶有相似之处,也有不同点。其Mr 不同,在60℃之内的热稳定性明显较好。

关键词: 双歧杆菌, α-D-半乳糖苷酶, 纯化

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2009年02月11日

【期刊论文】牛肝β-D-葡萄糖醛酸苷酶的分离纯化和性质研究*

王旻, 冯波, 方民

药物生物技术,2004,11(3):150~152,-0001,():

摘要

采用自溶、35%硫酸铵分部沉淀、CM-纤维素柱层析、羟基磷灰石柱层析由动物肝脏中分离纯化β-D-葡萄糖醛酸苷酶,获得比活26700U/mg的纯酶,活力回收率为42.8%,纯化的酶经SDS-PAGE呈单一条带。该酶以β-D-酚酞葡萄糖醛酸苷为底物的Km值为2.0×10-4mol/L,以对硝基苯酚葡萄糖醛酸苷为底物的Km值为2.5×10-4mol/L。在pH值5~6的范围内,该酶的活力较高,最适pH值为5.5,在pH值5.5时稳定性最好。在30~50℃范围内酶活力均较稳定。

关键词: β-D-葡萄糖醛酸苷酶, 牛肝, 纯化 酶学性质

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2009年01月19日

【期刊论文】Streptoverticillium mobaraense谷氨酰胺转胺酶的表达、纯化和复性

李华钟, 唐名山, 王树英, 陈坚

食品与发展工业,2004,30(4):71、81、91,-0001,():

摘要

以基因组DNA为模板,利用PCR技术从茂原轮链丝菌(Streptoverticilliummobaraense)中扩增得到产成熟谷氨酰胺转胺酶MTG的结构基因mtg,克隆于表达载体pQE230T,构建成lac启动子控制下的His6融合表达质粒pMTG,将此重组质粒转化到受体菌E. coli M15中。对质粒稳定性的研究表明,E. coli M15在无选择压的情况下,于37℃连续转接5次,质粒丢失率仅有24%,说明质粒基本稳定。重组菌经IPTG诱导,表达的重组谷氨酰胺转胺酶占菌体总蛋白的18%,经SDS2PAGE分析,表达的蛋白质的分子质量为38ku,与预期分子质量相符。表达产物主要以包涵体的形式存在。细胞经超声破碎,离心取包涵体溶于8mol/L的尿素中,然后通过Ni2NTA亲和柱分离纯化和稀释法复性。目的蛋白的纯度可达95%以上。比酶活为1013U/mg。

关键词: 谷氨酰胺转胺酶,, Streptoverticilliummobaraense,, 大肠杆菌,, 纯化,, 复性

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