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2011年05月27日

【期刊论文】复方中药861对大鼠肝星状细胞系一氧化氮合酶表达及其活性的影响*

丁惠国, 王宝恩△, 尚宏伟, 王兴翠, 唐素珍, 贾继东, 赵春惠

中国中西医结合杂志,2000,22(5):362~394,-0001,():

摘要

目的:研究复方中药861对大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)一氧化氮合酶(NOs)表达及其酶活性的影响,并探讨该药预防、治疗早期门脉高压的可行性。方法:细胞密度为1×105/ml的HSC-T6接种于细胞培养皿中,95%02,5%C02,37℃,培养24h进行以下分组实验,每组重复6皿,继续培养24h,1组:HSC-T6空白对照组;2组:HSC-T6加复方中药861(2mg/m1);3组:HSC-T6加复方中药861(4mg/m1);4组:HSC-T6加复方中药861(8rng/m1);5组:Hs0k加复方中药861(4rng/m1)加L一硝基精氨酸甲酯(L-NAME,4mg/m1)。采用化学比色法测定NOs活性,采用硝酸还原酶法测定培养液一氧化氮(NO)水平。4%多聚甲醛固定细胞2h,采用免疫细胞化学法观察Hs0R诱导型一氧化氮合酶(iNOs)表达。结果:复方中药861能增加HSC-T6 NOs活性(P<0.01),上清液NO水平也平行增加(P<0.01),L-NAME不能抑制复方中药861刺激的HSC-T6合成、分泌NO增加(P>0.05)。免疫细胞化学研究发现,活化的HSC-T6细胞浆有iN-0s表达,复方中药861能增加HSC-T6 iNOs表达。结论:活化HSC-T6 iNOs表达阳性,与自分泌NO有关;复方中药861能明显增加HSC-T6iNOs表达及其酶活性,NO合成、分泌增加。复方中药861可能通过增加肝星状细胞分泌NO途径,抑制肝星状细胞的收缩,从而降低肝窦阻力。因此,复方中药861在预防、治疗早期门脉高压中可能具有重要作用。

关键词: 复方中药861 肝星状细胞 一氧化氮合酶 门脉高压

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2009年04月20日

【期刊论文】IFN-a1b对肝星状细胞形态及其CTGF表达影响的研究*

汪谦, 陈伟锋, 张可飞, 黄洁夫, 徐鸿绪

中国病理生理杂志,2005,21(6):1147~1150,-0001,():

摘要

目的:通过观察IFN-alb对肝星状细胞(HSC)形态和表达CIGF的影响,探讨IFN-alb在治疗纤维化中的作用机制。方法:采用体外培养大鼠肝星状细胞,分别加入IFN-alb、TGF-β1,观察肝星状细胞的形态学及CTGF表达的改变。结果:透射电镜观察到IFN-alb作用组肝星状细胞有明显的凋亡现象发生;RT-PCR观察到正常组和1GF-β1诱导肝星状细胞表达的CTGF mRNA随IFN-alb的作用而减少。结论:IFN-alb对肝星状细胞表达CT-GF的抑制作用机制可能是通过诱导肝星状细胞凋亡和抑制TGF-β1诱导肝星状细胞表达CTGF。

关键词: 肝星状细胞 干扰素a, 结缔组织生长因子

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2007年05月21日

【期刊论文】扶正化瘀方对肝纤维化大鼠肝脏明胶酶、TIMP-2和星状细胞凋亡的影响

徐列明, 谭春雨, 谭善忠, 蒋健,

上海中医药大学学报2003年12月第17卷第4期/ACTA UNIVERSITATIS TRADITIONIS MEDICALIS SINENSIS PHARMACOLOGIAEQUE SHANGHAI Dec., 2003, Vol. 17, No. 4,-0001,():

摘要

为研究扶正化瘀方(主药:丹参、桃仁、人工虫草菌丝等)治疗肝纤维化的机理,60只Wistar雄性大鼠。除8只作为正常对照组(A,腹腔注射生理盐水)外,52只大鼠腹腔注射0.5%对二甲基亚硝胺(共4周。每周3次。每次2ml/kg), 造成肝纤维化模型,并随机分为3组。模型对照组(B,18只)、扶正化瘀方组(C,17只)、秋水仙碱组(D,17只)。分别给予自来水以及相应中西药物灌胃,共4周。之后,处死大鼠取材检测各项指标。 结果:C组大鼠Hyp和肝组织胶原分期下降。纤维化程度减轻;活化HSC减少。凋亡增加;肝组织MMP-2、MMP-9、TIMP-2表达下降。 结论:促进活化HSC 的凋亡、减少活化HSC 的数量,并由此降低MMP-2、MMP-9、TIMP-2的表达、减轻肝纤维化程度,可能是扶正化瘀方的作用机理之一。

关键词: 肝纤维化, 大鼠模型, 扶正化瘀方, 肝星状细胞 基质金属蛋白酶

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2007年05月21日

【期刊论文】丹参酚酸B对转化生长因子β1和血小板衍生生长因子一BB在肝星状细胞内信号传导的影响

徐列明, 薛冬英, 洪嘉禾,

中国中西医结合杂志2006年5月第26卷第5期/CJITWM, May 2006, Vol. 26, No. 5,-0001,():

摘要

目的 探讨丹参酚酸B(SA-B)抗肝纤维化作用机制。 方法 分离大鼠肝星状细胞(HSC),于无包被塑料培养皿中原代培养7天,继以10-6mmol/L SA-B孵育, 再加10 ng/ml的转化生长因子β1(TGF-β1)或血小板衍生生长因子一BB(PDGF-BB)刺激。 以Western blot法观察SA-B对TGF-β1或PDGF-BB刺激的HSC内ERK蛋白及其磷酸化表达的影响及对TGF-β1或PDGF-BB刺激的HSC表面TGF-β1I型受体(TβRI)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)或PDGF受体β(PDGFR一β)表达的影响。结果 sA-B可抑制原代正常培养9天的HSC及TGF-β】刺激的HSC中ERK1/2的磷酸化;对正常培养的HSC和TGF-β】刺激的HSC表面TβR I和TβRⅡ的表达无明显影响。SA-B抑制原代正常培养9天的HSC和经PDGF-BB刺激的HSC中PDGFR-β的表达,但对PDGF-BB刺激的HSC中ERK1/2磷酸化没有明显作用。结论 SA-B抑制TGF一β1诱导的HSC内ERK信号传导通路。这一抑制作用与HSC上TβR的表达无关,也与PDGF-BB在HSC内的ERK信号传导通路无关。SA-B对PDGF-BB在HSC内的信号传导通路的抑制作用在于抑制了HSC上PDGF受体的表达。

关键词: 肝纤维化, 丹参酚酸B, 细胞内信号传导, 肝星状细胞 转化生长因子β1, 血小板衍生生长因子一BB

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2005年01月26日

【期刊论文】脂多糖诱导大鼠肝星状细胞增殖与提高其胶原表达水平的细胞模型研究*

牛建昭, 王健牛, 建昭, 河福金, 于世赢, 白锦文, 李或, 赵丽云, 赵福建, 王继峰

,-0001,():

摘要

建立较为全面反映肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化效应的细胞模型。方法:应用脂多糖(1ipopolysccharide,LPS)刺激体外培养的大鼠HSC。噻唑蓝(Mn)法测定HSC增殖率。免疫组化法显示HSC表达其I、Ⅲ型胶原的表达水平,并进行图象分析。结果:LPS明显刺激HSC的增殖并提高I、Ⅲ型胶原表达水平,与对照组比较差并有非常显著性意义(P<O.01)。结论:LPS诱导HSC活化模型能够相对全面地反映HSC活化的效应。

关键词: 医学细胞生物学, 肝纤维, 肝星状细胞 脂多糖, 胶原, 大鼠, 细胞模型

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2005年01月25日

【期刊论文】改良法大鼠肝星状细胞的分离培养及鉴定

冷希圣, 翁山耕, 魏玉华, 彭吉润, 郑恩涛, 程继华, 张佑彬, 吕建锋, 杜如昱

北京大学学报(医学版),2001,33(1):83~86,-0001,():

摘要

目的:改良大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)的分离培养及鉴定方法,使之简便易行,高效可靠。方法:采用肝离体胶原酶灌注消化,低速离心去除肝细胞,密度梯度离心法分离HSC,采用台盼蓝染色排斥法鉴定细胞活率,desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定HSC纯度。结果:采用改良法,每只大鼠的HSC得率为(2. 54±0.13)×107个,细胞活率为(98.8±0.7)%,高于旧方法的HSC得率[(2.18±0.18)×107个,P<0.01]和活率(94.3±0.6)%,P<0.01]。用desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定,HSC纯度为(96.8±1.0)%,高于单用desmin鉴定的纯度(91.8±2.2)% (P<0.01)。结论:改良的大鼠HSC分离培养方法简便易行又经济,在保证纯度的同时,提高了得率和活率。采用desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定细胞纯度,提高了鉴定的敏感性。

关键词: 肝星状细胞 细胞,, 培养的, 肝硬化/, 病因学

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2005年01月25日

【期刊论文】大鼠肝星状细胞系的建立及其生物学特性的研究

冷希圣, 冷希圣*, 翁山耕, 李涛, 魏玉华, 彭吉润, 杜如昱

解剖学报,2003,34(3): 269~274,-0001,():

摘要

目的 建立并鉴定肝星状细胞(HSC)细胞系。方法 采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法分离培养大鼠的HSC;通过体外长期传代培养后建立1株细胞系,应用细胞形态学观察、细胞倍增时间测定、细胞生长曲线绘制、染色体分析、双层软琼脂培养、免疫细胞化学检测、RT-PCR检测、聚硅酮膜培养法观测HSC的收缩等方法对其生物学特性进行研究。结果 HSC细胞系已传了78代,保持着肌成纤维样细胞的形态学特点。细胞倍增时间为3615h;细胞的染色体众数42条,为正常大鼠体细胞的染色体表型;双层软琼脂培养未见细胞克隆形成;免疫细胞化学检测表明,细胞系表达Desmin、GFAP、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、iNOS、ICAM-1、TGF-α;RT-PCR检测表明,该细胞系表达TGF-β、ICAM-1;聚硅酮膜培养法显示,HSC 细胞系能在ET-1作用下产生收缩反应。结论 HSC细胞系符合建系标准,是1株新建立的大鼠肝星状细胞系,命名为rHSC-99,可作为肝硬化、门静脉高压症实验研究的模型。

关键词: 大鼠肝星状细胞系, 细胞系, 细胞培养, 大鼠

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2005年01月25日

【期刊论文】白细胞介素-10对与枯否细胞共培养的肝星状细胞表达转移生长因子2β和血小板源生长因子的影响

冷希圣, 秦致中, 李涛, 宋盛晗, 熊亮发, 郭晏同, 彭吉润

中华实验外科杂志,2004,21(60):666~668,-0001,():

摘要

目的 探讨白细胞介素(IL)-10对与枯否细胞(KC)共培养的肝星状细胞(HSC)表达转移生长因子(TGF)-β和血小板源生长因子(PDGF)的影响。方法 分离培养大鼠的KC,建立HSC与KC的共培养系统, 分为4组:1组为HSC单独培养组;2组为HSC与KC共培养组, 不加IL-10;3组为HSC与KC共培养组,加入1.5μg/LIL-10;4组为HSC与KC共培养组,加入15.0μg/L IL-10 。培养48h后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞中TGF-β和PDGFmRNA的表达。Western blot法检测各组细胞TGF-β和PDGF蛋白的表达。结果 KC能促进HSC表达TGF-β和PDGF; IL-10能抑制与KC共培养的HSC的TGF-β和PDGF的表达。结论 IL-10能通过KC对HSC的生物学活性产生影响。

关键词: 肝星状细胞 枯否细胞, 白细胞介素-10, 转化生长因子-β, 血小板源生长因子

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2005年01月25日

【期刊论文】白介素-10抑制肝星状细胞细胞间黏附分子-1的表达

冷希圣, 翁山耕, 魏玉华, 彭吉润, 杜如昱

中华消化杂志,2001,21(8):458~460,-0001,():

摘要

目的 探讨白介素-10(IL210)对肝星状细胞(HSC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法 采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法来分离培养HSC,传代后的HSC随机分为4组:对照组(A组)、肿瘤坏死因子α(TNFα)100 U/ml 组(B 组)、TNFα100U/ml+IL-10 2ng/ml组(C 组)及TNFα100U/ml+IL-10 20ng/ml组(D组)。加药后24h,采用细胞酶联免疫吸附分析(ELISA)和半定量逆转录聚合酶链反应(RT2PCR)等方法,检测HSCICAM-1蛋白及mRNA表达。结果 B组的ICAM-1蛋白和mRNA表达量分别为1.400±0.077和1.301±0.095,明显高于A组的0.559±0.071(P<0.001)和0.666±0.023(P<0.001);C组和D组的ICAM-1蛋白表达量分别为1.017±0. 066和0.919±0.039,mRNA 表达量分别为1.116±0.017和0.979±0.067,均低于B组的ICAM-1蛋白和mRNA表达(P 均<0.05)。结论 IL-10通过抑制HSCICAM-1表达,在抑制肝脏炎症、肝纤维化中发挥作用。

关键词: 肝星状细胞 白介素-10, 细胞间黏附分子-1

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2005年01月25日

【期刊论文】5-羟色胺受体在肝星状细胞上的表达及5-羟色胺对肝星状细胞生物学活性的影响

冷希圣, 李涛, 翁山耕, 彭吉润, 魏玉华, 牟东成, 王万祥, 朱继业

中华外科杂志,2003,41(3):175~179,-0001,():

摘要

目的 探讨52羟色胺(52HT)受体在肝星状细胞(HSC)的表达及5-HT通过其受体的介导对HSC生物学活性的影响。方法 采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法来分离培养HSC;RT-PCR方法检测HSC中5-HT受体1B、2A、2B、3等亚型的表达;Western blot方法检测5-HT及其2A受体阻断剂酮色林、3型受体阻断剂恩丹西隆对HSC表达TGF2β1和Smad4的影响。建立聚硅酮膜培养法,将HSC培养在聚硅酮膜上,研究5-HT及酮色林、恩丹西隆对HSC 收缩的影响。结果 HSC 表达5-HT的1B、2A、2B等受体亚型,不表达3亚型。52HT明显促进HSC表达TGF2β1和Smad4(P<0105),酮色林能抑制TGF2β1和Smad4的表达。恩丹西隆的作用不明显。5-HT能促进HSC的收缩,并成量效依赖关系,这种收缩作用能被酮色林所阻断,不被恩丹西隆阻断。结论 HSC表达5-HT的多种受体亚型,52HT通过其受体的介导对HSC的生物学活性发生影响,在肝硬化、门静脉高压症的发生发展中起了一定的作用。

关键词: 肝星状细胞 5-羟色胺, 受体, 转化生长因子, 收缩

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2007年05月08日

【期刊论文】扶正化瘀319方药物血清对肝星状细胞I型胶原及转化生长因子β1表达的影响

刘成海, 王晓玲, 刘平, 刘成, 谭英姿, 顾宏图

中国中西医结合杂志1999年7月第19卷第7期,-0001,():

摘要

目的:探讨扶正化瘀319方抗肝纤维化的主要作用机理。方法:分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用扶正化瘀319方给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞。胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率,ELISA法测定培养上清的I型胶原含量,免疫细胞化学染色、图像分析半定量转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白表达,RT-PCR法分析I型前胶原、TGFβ1mRNA的表达量。结果:扶正化瘀319方药物血清能明显抑制肝星状细胞的细胞内外胶原生成率,抑制细胞的I型前胶原基因表达及其胶原分泌,抑制肝星状细胞TGFβ1与蛋白表达。结论:扶正化瘀319方能明显抑制肝星状细胞的活化,对肝星状细胞I型前胶原及TGFBβ1mRNA表达的抑制可能是该方抗肝纤维化的主要作用机理。

关键词: 扶正化瘀319方, 肝纤维化, 肝星状细胞 I型胶原, 转化生长因子β1, 基因表达

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2007年05月08日

【期刊论文】抗肝纤维化有效中药复方血清药理学方法探讨

刘成海, 刘平, 刘成, 季光, 徐列明

中国实验方剂学杂志1998年4月第4卷第2期/Chinee Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Apr., 1998, 4 (2),-0001,():

摘要

摘要扶正化瘀方灌胃正常大鼠制备血清,温育大鼠肝细胞受星状细胞,将含药血清及冻干粉直接添加于培养细胞,通过观察细胞形态及功能变化,探讨复方抗肝纤维化的血清药理试验方法。结果表明冻于粉抑制细胞增殖及活力。二次给药l h后同种灭活血清抑制星状细胞增殖、促进肝细胞增殖,能较好地用于抗肝纤维化的体外药理试验。

关键词: 血清药理学, 肝纤维化, 肝星状细胞 肝细胞

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2007年05月08日

【期刊论文】丹酚酸A对培养的大鼠肝星状细胞增殖与胶原生成的作用

刘成海, LIU Cheng-Hai, LIU Ping, HU Yi-Yang, XU Lie-Ming, WANG Zhen-Nan, LIU Cheng

中国药理学报2000Aug, 21 (8): 721-726,-0001,():

摘要

目的:研究丹酚酸A对培养的大鼠肝星状细胞增殖与胶原生成的影响。方法:用链酶蛋白酶与胶原酶对肝脏进行原位灌流消化,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,传一代培养。MTT法与[3H]TdR掺入法测定细胞增殖。丽春红染色、图象分析法半定量细胞胶原沉积量,ELISA法测定细胞培养上清中I型胶原分泌量,检测细胞层总蛋白量校正细胞数。RT-PCR法分析前胶原α2(I)基因的表达。结果:丹酚酸A 100μmol/L引起部分细胞脱壁与死亡,有一定毒性反应。丹酚酸A 0.1-10μmol/L对细胞形态无明显影响。丹酚酸A1-100μmol/L浓度依赖性抑制细胞增殖,降低胶原沉积量与I型胶原分泌量。丹酚酸A1-10μmol/L对前胶原α2(I)mRNA表达均有明显抑制作用。结论:丹酚酸A抑制肝星状细胞增殖与胶原表达,是丹参抗肝纤维化的主要有效成分之一,抑制肝星状细胞活化是其抗肝纤维化的主要作用机制。

关键词: 丹参, 丹酚酸A, 肝硬化, 细胞分裂, 胶原, 培养的细胞, 基因表达, 大鼠, 肝星状细胞

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