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2010年12月15日

【期刊论文】肺炎衣原体CPn0308 的基因克隆及其内源性蛋白定位的研究

刘殿武, 贾天军, 罗建华, 张庶民, 钟光明

卫生研究,2008,37(2):219~222,-0001,():

摘要

目的 克隆肺炎衣原体基因CPn0308,表达融合蛋白,并制备抗体对其表达的内源性蛋白进行初步定位。方法 根据STD基因库提供的信息设计引物,聚合酶链反应(PCR)克隆目的基因,用BamHI/NotI对克隆的目的基因和pGEX-6P2 载体进行酶切,T4 连接酶连接后,重组质粒经42℃转化XL1-blue 细菌:用PCR进行初步筛选,交叉PCR对提取质粒进一步确定,最后对插入片断进行序列分析:用IPTG诱导阳性克隆的细菌使其表达GST融合蛋白,纯化后免疫小鼠制备抗体,使用IFA 对内源性蛋白进行定位分析。结果 克隆出肺炎衣原体基因CPn0308,全长为366bp,编码121个氨基酸;并表达了融合蛋白GST-CPn0308,分子量约为39kD;制备了抗体,IFA实验发现该蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜蛋白上。结论 成功克隆肺炎衣原体基因CPn0308,其内源性蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜上。

关键词: 肺炎衣原体 基因克隆, 内源性蛋白

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