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2009年11月01日

【期刊论文】人胚胎生殖细胞在人胚胎成纤维细胞饲养层上的生长

王亚平, 刘永刚, 韩兵, 陈地龙, 李芳菲, 王亚平*, 王莎莉

解剖学报,2005,36(3):716~719,-0001,():

摘要

目的探讨以人胚胎成纤维细胞为饲养层分离、培养人胚胎生殖细胞的方法和条件。方法分离、培养3-4月胚胎成纤维细胞,取3~15代细胞经丝裂酶素处理后铺板备用;分离6~11周胚胎原始生殖细胞,将其置于人胚胎成纤维细胞饲养层上,在含生长因子、分化抑制因子的培养体系中培养胚胎生殖细胞;用免疫细胞化学方法检测胚胎生殖细胞表面标志SSEA-1和SSEA-4;钙,钴法检测碱性磷酸酶活性;RT-PCR检测转录因子Oct-4的表达。结果人胚胎成纤维细胞可连续传代25代以上(6月),3~15代细胞可以用作饲养层细胞。分离的胚胎生殖细胞在饲养层上可增殖形成典型胚胎生殖细胞集落,并能连续在体外培养超过8代。集落未分化标志检测显示SSEA-1、SSEA-4呈阳性,碱性磷酸酶活性呈强阳性,Oct-4表达阳性。结论用人胚胎成纤维细胞作为饲养层能获得可连续增殖的胚胎生殖细胞。

关键词: 胚胎生殖细胞 胚胎成纤维细胞, 细胞培养, 免疫细胞化学, 逆转录聚合酶链反应, 人胚

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