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2007年09月21日

【期刊论文】软骨形态发生蛋白1诱导真皮成纤维细胞向软骨细胞表型分化的影响因素

崔磊, 尹烁, 邓辰亮, 李宇琳, 杨光辉, 陈富国, 刘伟, 刘德莉, 曹谊林

中华医学杂志2005年8月31日第85卷第33期/Natl Med J China , August 31, 2005. Vol. 85. No. 33,-0001,():

摘要

目的 探讨软骨形态发生蛋白1(CDMP1)生长因子体外诱导真皮成纤维细胞向成软骨细胞表型分化的影响因素。方法 取包皮环切术后丢弃的真皮组织共3 例,分离成纤维细胞体外培养扩增,以含10% 胎牛血清的F-12 培养液加入CDMP1( 终浓度为100 ng / ml)进行诱导,未加CDMP1 的作为对照。观察细胞多次传代后(P2、P5、P10)细胞表型分化情况;调整CDMP1 浓度分别为10、30、100、300 ng / ml,观察诱导后软骨细胞表型的变化;单层培养与微团块培养成纤维细胞分别体外诱导7、14 d,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞诱导前后骨形态发生蛋白受体(BMPR)、Ⅱ、Ⅳ、X型胶原表达;Western 印迹检测细胞诱导前后Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖的表达;流式细胞术检测表面标志CD29、CD105、CD106、CD166 及细胞诱导后Ⅰ、Ⅱ型胶原表达。结果 细胞多次传代后(P5、P10)仍可表达特异软骨基质Ⅱ型胶原与蛋白聚糖,Ⅱ型胶原阳性细胞率与P2 诱导后差异无统计学意义(P > 0. 05)。CDMP1 浓度为10、30 ng / ml 诱导7、14 d,均未见Ⅱ型胶原与蛋白聚糖表达;CDMP1 浓度为100、300 ng / ml 时,Ⅱ型胶原与蛋白聚糖表达强度差异无统计学意义。单层培养成纤维细胞诱导14 d 后,软骨基质表达消失;微团块三维培养诱导14 d,软骨基质仍保持表达。RT-PCR检测诱导后ActR-I / ALK-2,BMPR-IA/ ALK-3,BMPR-IB/ ALK-6 基因表达明显增强。结论在CDMP1 生长因子诱导下,人真皮成纤维细胞体外扩增后可保持向成软骨细胞表型分化能力,细胞分化与CDMP1 浓度、细胞三维培养条件及BMPR 介导有关。

关键词: 软骨细胞 成纤维细胞, 骨形态发生蛋白质类, 分化

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2007年09月21日

【期刊论文】软骨形态发生蛋白1诱导真皮成纤维细胞表达软骨细胞表型的实验研究

崔磊, 尹烁, 邓辰亮, 杨光辉, 陈富国, 刘伟, 刘德莉, 曹谊林

中华医学志2004年8月2日第84卷第15期/Natl Med J China , August 2, 2004. Vol. 84. No. 15,-0001,():

摘要

目的 应用软骨形态发生蛋白(CDMP)生长因子,体外诱导真皮成纤维细胞向成软骨细胞表型分化,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性。方法 取包皮环切术丢弃真皮组织共3例,成纤维细胞体外培养扩增至第二代,以1×104/cm2密度接种,12h后加入细胞诱导液(10%胎牛血清F-12培养液,CDMP1终浓度为100ng/ml)单层培养,未加的成纤维细胞培养用CDMP1为对照。诱导7d后观察细胞形态变化,Image Plus图像分析软件计算细胞长宽比例。激光花聚焦显微镜分别观察诱导前后细胞内I、II、III型胶原表达及分布,Western印迹检测诱导前后细胞II型胶原蛋白表达。反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测诱导后成软骨相关的Sox9、聚焦蛋白聚糖与II、IX型胶原mRNA表达;同时检测与成骨相关的X型胶原、碱性磷酸酶(AKP)mRNA表达。培养第二代细胞以2×107个细胞/ml细胞密度进行离心管法培养,诱导14d后行阿辛蓝与II型胶原免疫组化染色。结果 诱导后可见单层培养的成纤维细胞形态由长梭形向软骨细胞样多角形转变,Image Plus图像分析软件计算细胞诱导后的长宽比例为(1.40±0.15),较诱导前(7.40±1.30)差异有显著意义(P<0.05);与正常软骨细胞(1.29±0.24)差异无显著意义。免疫荧光激光共聚焦观察发现诱导后细胞内出现II型胶原表达,I、III型胶原表达呈阳性。RT-PCR检测成软骨相关的Sox9,聚集蛋白聚糖,II、IX型胶原mRNA表达阳性;X型胶原、AKP未检测到mRNA阳性表达。Western印迹检测细胞诱导后II型胶原蛋白表达阳性。离心管培养诱导7d后阿辛蓝染色示糖胺聚糖(GAG)均匀分布于基质中,免疫组化染色示基质中II型胶原表达阳性。结论 第二代成人真皮成纤维细胞在CDMP1生长因子诱导下可向成软骨细胞表型分化,并能分泌软骨细胞特异性基质,有望成为软骨组织工程新的种子细胞来源。

关键词: 软骨细胞;成纤维细胞;骨形态发生蛋白质类;抗原, 分化

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2006年10月10日

【期刊论文】利用现代分子生物学技术深入研究大骨节病的分子发病机制

郭雄, 左弘

中国地方病学杂志2005,24(6)701~704,-0001,():

摘要

暂无

关键词: 大骨节病, 软骨细胞 基因, 分子生物学

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2006年10月27日

【期刊论文】兔关节软骨细胞的分离、培养和形态学特征

张志光, 郑卫平, 苏凯, 许跃

中山大学学报(医学科学版),2004,25,(1):63~66,-0001,():

摘要

【目的】探讨兔关节软骨细胞的分离、培养方法,观察单层高浓度培养时细胞表型表达情况。【方法】无菌条件下,从2周龄新西兰白兔的颞颌关节及四肢关节髁突面削取软骨片,采用机械-酶消化法分离软骨细胞,经台盼蓝拒染计数,将细胞按l×106个/孔接种于6孔培养板,传代培养,描绘生长曲线。利用相差显微镜及透射电镜观察细胞形态。应用甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组化对细胞进行鉴定。【结果】每克软骨能获取1.5×106个软骨细胞,活性率为95%。培养2~3d,细胞贴壁、变形,呈多角形;8d左右,细胞融合成层。透射电镜观察显示细胞核圆形,有丰富的粗面内质网、高尔基体及分泌的基质成分。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色阳性。细胞传至5代后,出现“成纤维细胞样”。【结论】本研究建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法;初代、第2代细胞生长良好,适合于实验研究;软骨细胞5代培养后,细胞表型发生改变。

关键词: 关节,, 软骨/, 细胞学, 细胞培养, 软骨细胞/, 超微结构

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2006年10月27日

【期刊论文】兔关节软骨细胞在几丁糖中培养的生物学特性

张志光, 郑卫平, 郑有华, 杨国平

中山医科大学学报(Acad J SUMS),2000,21(4):277~279,-0001,():

摘要

【目的】观察关节软骨细胞在几丁糖凝胶中培养的生物学行为,以探讨几丁糖凝胶作为组织工程细胞支架的可行 性。【方法】从幼龄兔关节表面削取薄层软骨,经酶消化获得大量的软骨细胞。原代培养后,按106/mL细胞浓度接种于几丁糖凝胶,通过绘制生长曲线,组织化学检测,透射电镜观察,了解软骨细胞在几丁糖中生长特征。【结果】软骨细胞在几丁糖中保持圆形,甲苯胺蓝异染及Ⅱ型胶原免疫组化染色呈强阳性;细胞内富含高尔基体、粗面型内质网及大量的分泌泡。【结论】软骨细胞在几丁糖中保持圆形生长状态,几丁糖能促进软骨细胞分裂、增殖,提高其分泌基质的能力。几丁糖可作为可注射性软骨组织工程的载体材料。

关键词: 关节,, 软骨/, 细胞学, 几丁糖凝胶, 细胞培养, 软骨细胞/, 超微结构

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