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2007年09月21日

【期刊论文】软骨形态发生蛋白1诱导真皮成纤维细胞表达软骨细胞表型的实验研究

崔磊, 尹烁, 邓辰亮, 杨光辉, 陈富国, 刘伟, 刘德莉, 曹谊林

中华医学志2004年8月2日第84卷第15期/Natl Med J China , August 2, 2004. Vol. 84. No. 15,-0001,():

摘要

目的 应用软骨形态发生蛋白(CDMP)生长因子,体外诱导真皮成纤维细胞向成软骨细胞表型分化,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性。方法 取包皮环切术丢弃真皮组织共3例,成纤维细胞体外培养扩增至第二代,以1×104/cm2密度接种,12h后加入细胞诱导液(10%胎牛血清F-12培养液,CDMP1终浓度为100ng/ml)单层培养,未加的成纤维细胞培养用CDMP1为对照。诱导7d后观察细胞形态变化,Image Plus图像分析软件计算细胞长宽比例。激光花聚焦显微镜分别观察诱导前后细胞内I、II、III型胶原表达及分布,Western印迹检测诱导前后细胞II型胶原蛋白表达。反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测诱导后成软骨相关的Sox9、聚焦蛋白聚糖与II、IX型胶原mRNA表达;同时检测与成骨相关的X型胶原、碱性磷酸酶(AKP)mRNA表达。培养第二代细胞以2×107个细胞/ml细胞密度进行离心管法培养,诱导14d后行阿辛蓝与II型胶原免疫组化染色。结果 诱导后可见单层培养的成纤维细胞形态由长梭形向软骨细胞样多角形转变,Image Plus图像分析软件计算细胞诱导后的长宽比例为(1.40±0.15),较诱导前(7.40±1.30)差异有显著意义(P<0.05);与正常软骨细胞(1.29±0.24)差异无显著意义。免疫荧光激光共聚焦观察发现诱导后细胞内出现II型胶原表达,I、III型胶原表达呈阳性。RT-PCR检测成软骨相关的Sox9,聚集蛋白聚糖,II、IX型胶原mRNA表达阳性;X型胶原、AKP未检测到mRNA阳性表达。Western印迹检测细胞诱导后II型胶原蛋白表达阳性。离心管培养诱导7d后阿辛蓝染色示糖胺聚糖(GAG)均匀分布于基质中,免疫组化染色示基质中II型胶原表达阳性。结论 第二代成人真皮成纤维细胞在CDMP1生长因子诱导下可向成软骨细胞表型分化,并能分泌软骨细胞特异性基质,有望成为软骨组织工程新的种子细胞来源。

关键词: 软骨细胞;成纤维细胞;骨形态发生蛋白质类;抗原 分化

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