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2011年05月27日

【期刊论文】酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因的克隆及表达

游松, 蒋雅红, 任杰, 谢兰漪

沈阳药科大学学报,2002,19(4):291~293,-0001,():

摘要

目的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)丙酮酸脱羧酶(PDC)基因的克隆和表达。方法利用PCR技术从酿酒酵母的总cDNA中钓取出PDCsc基因,构建其高效表达质粒,利用Ion和ompT蛋白酶缺陷株Escherichia coli BL21(DE3)进行表达。结果扩增出长约1.7kb的PDCsc基因,成功构建其表达质粒pSC-22b,对转化菌株的SDS-PAGE分析结果显示:该基因获得高效表达,表达蛋白占细胞总蛋白的18.6%。结论成功构建高效表达PDCsc基因的工程菌株,为实现利用PDCsc进行的生物转化奠定基础。

关键词: 酿酒酵母 丙酮酸脱羧酶, 克隆, 高交表达

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2009年04月20日

【期刊论文】视网膜色素变性PRPF-31基因剪接位点突变及其相关表型特征研究

席兴华, 郑多, 夏昆, 潘乾, 雷璐赟, 刘征, 唐朝珍, 夏家辉, 姜德咏, 邓汉湘

中华眼科杂志,2005,11(11):1020~1026,-0001,():

摘要

目的 研究一个常染色体显性遗传视网膜色素变性(ADRP)大家系的致病基因及其相关表型特征。方法 应用基因组扫描定位和突变检测法确定该家系的致病基因,并对其进行详细的家系调查,同时选取该家系不同代别中11例有症状的患者和7例无症状的个体,进行视网膜电图(ERG)、多焦视网膜电图(mERG)、心理物理学及荧光素眼底血管造影等检测。结果 在19号染色体PRPF-31基因5号内含子-1处发现一新的剪接位点突变(IVS5-1G→A)。家系中有症状的患者均在10岁以前发病,病情进展快而严重,呈Ⅰ型弥漫性视网膜色素变性(RP)表现。Goldmann视野检查,30岁以上患者动态视野大范围缺损,部分患者仅存颞侧视岛,静态视野阈值无法查出;mERG检测:双眼暗视a、b波振幅极度下降且低平,呈熄灭型;多焦视网膜电图显示双眼黄斑区及其周围视网膜反应密度显著降低;荧光素眼底血管造影显示黄斑中央凹周围色素上皮萎缩,呈“牛眼样”外观。7例无症状者中,1例经mERG、心理物理学及分子遗传学检测,证实其为轻症RP患者,另1例为疾病基因的杂合携带者。结论 PRPF-31基因5号内含子-1剪接位点突变(IVS5-1G→A)是ADRP的一种新的突变位点。该突变所致的ADRP表型主要为Ⅰ型弥漫性RP,同时,还存在基因外显不全和表现度不一的变异性表达。

关键词: 视网膜炎,, 色素性, 酿酒酵母蛋白质类, 突变, 表型

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2009年02月20日

【期刊论文】木酮糖激酶表达水平对酿酒酵母木糖代谢产物流向的影响*

鲍晓明, 沈煜), 郑华军), 王颖), 鲍晓明)**, 曲音波), 白凤武)

生物化学与生物物理进展,2004,31(8):746~751,-0001,():

摘要

在酿酒酵母中分别引入真菌和细菌的木糖代谢关键酶,木糖还原酶基因XYL1、木糖醇脱氢酶基因XYL-和木糖异构酶基因xylA。并在此基础上以共转化策略超表达下游关键酶木酮糖激酶基因XKS1。与亲本菌株相比,用pMA91和YEp24质粒表达XKS1的重组菌株,木酮糖激酶(xylulokinase, XK)活性分别提高了14和617倍。在限氧条件下,重组菌株对木糖和葡萄糖的共发酵结果显示,表达XYL1,XYL2以及XKS1的重组菌株HSXY2251木糖消耗为1214g/L,提高了12019%,乙醇产量达到914g/L,提高了36%,副产物木糖醇产量为017g/L,下降了8419%。

关键词: 木糖, 木酮糖激酶, 酿酒酵母 乙醇

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2009年02月20日

【期刊论文】酿酒酵母木糖发酵酒精途径工程的研究进展

鲍晓明, 沈煜, 王颖, 鲍晓明*, 曲音波

生物工程学报,2003,19(5):636~640,-0001,():

摘要

途径工程(Pathway engineering),被称为第三代基因工程,改变代谢流向,开辟新的代谢途径是途径工程的主要目的。利用途径工程理念,对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)代谢途径进行理性设计,以拓展这一传统酒精生产菌的底物范围,使其充分利用可再生纤维质水解物中的各种糖分,是酿酒酵母酒精途径工程的研究热点之一。这里介绍了近年来酿酒酵母以木糖为底物的酒精途径工程的研究进展。

关键词: 途径工程, 木糖, 酒精, 酿酒酵母

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2009年02月20日

【期刊论文】酿酒酵母工业菌株中XI木糖代谢途径的建立*

鲍晓明, 沈煜**, 王颖, 史文龙, 刘向勇, 鲍晓明***, 曲音波

中国生物工程杂志,2005,25(9):69~73,-0001,():

摘要

根据代谢工程原理,采取多拷贝整合策略,利用整合载体pYMIKP,将来自嗜热细菌Thermus therm ophilus的木糖异构酶(XI)基因xylA和酿酒酵母(Saccha rom yces cerevisiae)自身的木酮糖激酶(XK)基因XKS1,插入酿酒酵母工业菌株NAN227的染色体中,得到工程菌株NAN2114。酶活测定结果显示,NAN2114中XI和XK的活性均高于出发菌株NAN227,表明外源蛋白在酿酒酵母工业菌株中得到活性表达。对木糖、葡萄糖共发酵摇瓶实验结果表明,工程菌NAN2114消耗木糖4.6g/L,产生乙醇6.9g/L,较出发菌株分别提高了43.8%和9.5%。首次在酿酒酵母工业菌株中建立了XI路径的木糖代谢途径。

关键词: 木糖, 酿酒酵母 乙醇, 木糖异构酶, 木酮糖激酶

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2009年07月07日

【期刊论文】乳酸抗性酵母的筛选及其生长特性的研究

王昌禄, 杜连祥, 顾晓波, 路福平, 赵学明, 饭村穰, 冈崎直人

氨基酸和生物资源,2000,22(3):1~5,-0001,():

摘要

以酿酒酵母(saccharomyces ceevisiae)单倍体YNN-27(αtep-ura-)为亲株,在含有4%乳酸的梯度平板上直接进行紫外线诱变处理,筛选到突变株YNN-27-24。通过对该突变株乳酸抗性产生原因分析、在含有不同浓度的乳酸和潮霉素B(hygromycin B)的YPDL和YPDL H培养基中的重复特性的研究发现,该突变株对乳酸和潮霉素B产生的抗性,不是因对环境条件的适应而产生,而是由基因突变所引起。与突变株YNN27-24相比,乳酸对亲株生长的影响在于延长了其生长的延迟期,而其生长速率没有发生改变。用Mini-photo 518测定供试菌株在生长过程中的吸光度(660 nm)以研究酵母菌的生长特性,是一种行之有效的方法,具有较高的灵敏度和较好的再现性。

关键词: 酿酒酵母 乳酸抗性, 潮霉素B

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2006年06月20日

【期刊论文】通过同源重组构建酿酒酵母新型表达质粒*

吕红

中国科学C辑生命科学,2005,35(1):37~43,-0001,():

摘要

利用同源重组的方法,构建了具有高拷贝数和高稳定性的新型酿酒酵母表达质粒。对酵母附加体型载体pHC11进行一系列改造,得到质粒pHC11R,并用适当的酶切线性化;利用PCR反应得到人IFNa2b表达单元片段,它的两端和线性化的pHC11R的两端具有50bp左右的同源区段。上述两个片段共转化酿酒酵母,在酵母体内经同源重组后得到表达质粒pHC11R-IFNa2b,该表达质粒与pHC11-IFNoa2b相比去除了质粒上用于在大肠杆菌中复制和筛选所需的序列,在宿主菌中的稳定性和拷贝数均有明显提高,同时外源基因的表达量也获得了一定程度的提高。在此基础上,进一步构建了带有不同表达元件的pHR系列载体,使得外源基因能够通过同源重组在酿酒酵母中快速、方便地克隆和表达。

关键词: 同源重组 酿酒酵母 表达质粒

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2004年12月28日

【期刊论文】转译起始密码子周边序列的改变对Δ6-脂肪酸脱氢酶基因表达的影响

邢来君, 张琦, 李明春, 孙颖, 马海庭, *

微生物学报,2004,44,(4):536~539,-0001,():

摘要

将少根根霉中Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(RAD6)的起始密码子周边序列作适当的修改,并把修改后获得的片段(RAD6-1)亚克隆到表达载体pYES2.0,构建重组表达载体pYRAD6-1。经测序验证,把pYRAD6-1 转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达分析,同时以空载体pYES2.0和出发序列所构建的pYRAD6作为对照。通过气相色谱(GC)和气相色谱P质谱(GC-MS)分析表明,在pYRAD6和pYRAD6-1转化的酿酒酵母中生成γ-亚麻酸,而pYES210中没有检测到。其中,pYRAD6-1转化的酿酒酵母γ-亚麻酸表达量占细胞总脂肪酸含量的5.23%,而对照pYRAD6转化的酿酒酵母中表达量只占2.64%。

关键词: 少根根霉,, Δ6-脂肪酸脱氢酶基因,, 转译起始密码子,, 酿酒酵母,, γ-亚麻酸,, 表达

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2006年11月07日

【期刊论文】瑞氏木霉木糖醇脱氢酶基因的分离与鉴定

汪天虹, Merja Penttil, 高培基, 王春卉, 钟玲

生物工程学报,1998,14(3):320~325,-0001,():

摘要

将在木聚糖上生长的瑞氏木霉(Trichodermareesei)RutC230的cDNA文库全部质粒转化已携带有毕赤氏酵母(Pichiastipitis)木糖还原酶基因的重组酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)菌株H475,在H475中构建了瑞氏木霉的CDNA表达亚文库。在以木糖为唯一碳源的选择性酵母合成培养基上,从该亚文库中筛选到瑞氏木霉木糖醇脱氢酶CDNA基因,该基因片段长为113kbSouthern、Northern印迹杂交分析和蛋白质凝胶电泳结果表明该基因确实来源于瑞氏木霉,所编码蛋白质分子量约为40kDa,携带有毕赤氏酵母木糖还原酶和瑞氏木霉木糖醇脱氢酶基因的重组酵母能够在以木糖为唯一碳源的培养基上生长,并能将90%以上的木糖转化为木糖醇、乙醇和其它副产品。

关键词: 瑞氏木霉,, 木糖醇脱氢酶基因,, 酿酒酵母,, 木糖

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