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2009年11月08日

【期刊论文】小鼠骨髓基质细胞的生物学特性及血管新生能力

黄岚, 张坡, 蒋世忠, 武晓静, 宋明宝

中华心血管杂志,20003,31(9):681~684,-0001,():

摘要

目的探讨体外培养的骨髓基质细胞的一些生物学特性及体内移植后在缺血区新血管生成中的作用。方法分离5~6周龄的小鼠胫骨、股骨,用预冷的DMEM/F12培养基冲洗出骨髓,经密度梯度离心分离出骨髓单个核细胞,接种后12~16 d形成单层贴壁的成纤维样细胞。体外诱导分化鉴定分离的细胞,用传代的细胞进行生长曲线测定,观察其接种贴壁率、分裂指数,检测细胞周期和超微结构,并建立下肢缺血模型。荧光标记的体外扩增的骨髓单个核细胞被移植入缺血组织。移植后2周,荧光显微镜及内皮细胞碱性磷酸酶染色,检查荧光阳性细胞与染色阳性细胞的时空关系。结果体外传代培养的单个核细胞倍增时间约为42 h。传代10 h贴壁率达90%以上。分裂指数曲线与生长曲线相似。细胞周期显示约83%的细胞处于G1期。结论体外培养的骨髓基质细胞生长稳定,传代后的细胞适应性强,增殖较快,表现出较早期细胞特点,在体外及移植入体内缺血区能分化为血管内皮细胞,有望用于改善组织缺血。

关键词: 骨髓细胞 细胞培养, 细胞分化, 血管, 缺血

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2006年07月06日

【期刊论文】肿瘤坏死因子α对小鼠破骨细胞分化的影响

葛立宏, 赵玉鸣, 葛立宏Δ, Agi E. Grigoriadis

北京大学学报(医学版),2005,37(4):433-435,-0001,():

摘要

目的:在诱导破骨细胞分化的体外骨髓细胞培养系统中,研究破骨细胞分化因子(RANKL)存在和不存在的情况下,肿瘤坏死因子α(TNF-α)对破骨细胞分化的影响。方法:选用小鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)依赖性非附着性骨髓细胞,在含有25µg /L M-CSF和0,1,10,100µg/L TNF-α的α-MEM 培养液中培养5d后,观察抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)阳性多核细胞的形成;细胞在含有25µg/L M-CSF和30µg/L sRANKL的α-MEM培养液中进行培养,比较加入和不加入10µg /L TNF-α培养4、5、6 和9 d 后,所形成的TRAP(+)多核细胞的数目和骨吸收面积。结果:TNF-α在没有RANKL的情况下,不能诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞。在RANKL存在的情况下,TNF-α可促进破骨样细胞的形成和骨吸收,但对破骨细胞分化的促进作用仅表现在培养的早期。结论:在RANKL存在的情况下TNF-α可促进破骨细胞的分化,但不能取代RANKL。TNF-α加速破骨细胞的形成,却并不延长其生存时间。

关键词: 肿瘤坏死因子α, 破骨细胞, 骨髓细胞 幸存

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2006年01月11日

【期刊论文】体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为造血干/祖细胞方法的初步研究*

黄绍良, HE Zhi-xu, HUANG Shao-liang, ZHOU Qi-feng, LI Shu-nong

中国病理生理杂志,2003,19(4):443-447,-0001,():

摘要

目的:探讨体外定向诱导胚胎干细胞(ESC)发育为造血干细胞(HSC)的方法。方法:将小、鼠E14胚胎干细胞在含于细胞生长因子(SCF)和血管内皮生长因子(VEGF)的甲基纤维素培养基上首先诱导发育为胚胎体(EB),再将EB置于均含SCF、VEGF、IL-3、IL-6及促红细胞生成素(EPO)的3各不同培养体系中定向分化为HSC,并观察HSC表面标志性抗原、造血集落形成及瑞氏-姬姆萨染色的结果。结果:经两阶段诱导ESC分化为HSC,发现在甲基纤维半固体培养体系中HSC发育缓慢,分化14d后CD34+/Sca-1+细胞数量最高为(31.5+-4.7)%;而在骨髓基质细胞饲养层上HSC发育缓慢较快,细胞数量较多,分化第10dCD34+/Sca-1+细胞数即达到峰值,为(47.8+-6.3)%;骨髓基质细胞饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系中HSC发育同样迅速,所产生的CD34+/Sca-1+细胞数量在3个体系中最高,为(53.6+-7.2)%。经瑞氏-姬姆萨染色证实上述细胞为早期造血细胞,均有形成各系造血细胞集落的能力。结论:使用骨髓基质饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系及SCF、VEGF、IL-3、IL-6及EPO等细胞因子,通过阶段诱导分化,可从小鼠ESC获得较高比例的HSC。

关键词: 胚胎干细胞, 造血干细胞, 骨髓细胞 分化, 小鼠

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2006年01月11日

【期刊论文】两步法体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为CD34+/Sca-1+造血干细胞的研究

黄绍良, HE Zhi-xu*, HUANG Shao-liang, ZHOU Qi-feng, LI Shu-nong

中华儿科杂志,2004,42(11):830-834,-0001,():

摘要

目的 建立一种体外诱导胚胎干细胞(embryonic stem cell, ESC)定向发育为CD+34/Sca-1+造血干细胞(hematopoietie stem cell, HSC)的实验方法。方法 联合应用血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor, VEGF)、干细胞因子(stem cell factor, SCF)、白血胞介素3(interleukin 3.IL-3)、白细胞介素6(interleukin 6, IL-6)和促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)分阶段首先诱导ESC形成富含CD+34/Sca1+细胞的胚胎体(embryoid body, EB),然后分别观察EB细胞在甲基纤维素半固体培养体系和骨髓基质细胞饲养层培养体系中进一步分化为HSC的情况。结果 VEGF联合其他细胞因子能有效促进EB中HSC的形成,CD+34/Sca-1+细胞数高达(13.72+-1.92)%,收获此阶段的EB进一步诱导发现。甲基纤维素培养体系造血克隆形成率明显低于骨髓基质细胞培养体系,在甲基纤维素中CD034/Sca1-1+细胞数最高只能达到(20.52+-2.78)%,而基质细胞中CD+34/Sca-1+细胞数可达(34.60+-3.71)%(t=5.26,P<0.001)以上,且来自骨髓基质细胞培养体系的造血分化细胞在造血集落培养时能形成类型和数量更多的造血克隆。结论 使用VEGF联合SCF、IL-3、IL-6、EPO分阶段诱导ESC形成富含CD+34/Sca-1+细胞的EB,并进一步在骨髓基质细胞培养体系扩增,是体外诱导ESC发育为HSC的较好方法。

关键词: 干细胞, 造血干细胞, 骨髓细胞 细胞分化

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2006年08月21日

【期刊论文】混合系白血病基因相关白血病骨髓细胞形态学特征

朱平, 杨英, 张英, 曹香红, 朱强

Chin J Med, February 2005, Vol 28, No.2,-0001,():

摘要

目的 通过观察混合系白血病(Mixed lineage leukemia,MLL)基因相关白血病患者骨髓细胞形态学特征,了解MLL基因重排特征与FAB形态学分型的关系。方法用多重巢式RT-PCR方法检测214例白血病和淋巴瘤的常见白血病相关融合基因,选择有MLL基因异常的白血病患者骨髓细胞涂片做光镜下的形态学观察,比较具有不同MLL基因异常的白血病细胞的形态学差异。结果患者中发现MLL基因异常者14例,其中有MLL/AF6融合基因者5例,骨髓细胞形态学均为FAB-M5型,具有典型的原始单核细胞白血病的特征:在光镜下均表现为细胞体积大,染色质疏松,细胞核折叠,有1~2个大而清晰的核仁,胞质嗜碱性呈毛玻璃样。多数细胞核旁淡染区明显,胞浆内可见细长型奥氏小体,染色体纤细。过氧化物酶染色阴性,非特异脂酶染色阳性,可被氟化钠抑制。其他MLL基因异常7例,包括MLL部分串联重复(PTD),MLL/AF10融合基因,MLL/AF4阳性者,分别属于M1,M4型,MDS和幼稚淋细胞白血病。结论MLL基因异常主要见于与单核细胞相关的白血病,MLL/AF6重排可能是急性原始单核细胞型白血病一种独立亚型的重要标志,该融合基因可能与单核细胞分化有更密切的关系。

关键词: 白血病, 骨髓细胞

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2005年04月20日

【期刊论文】骨髓基质细胞分泌物促进PC12细胞的分化和存活

樊东升, 郑梅, 樊东升*, 张俊, 宋德懋, 范少光

中华神经科杂志,2005,4(1):20~23,-0001,():

摘要

目的 体外检测骨髓基质细胞分泌物对PC12细胞的活性作用,并探讨其产生的可能机制。方法 收集培养至第4代第7天的SD大鼠MSCs培养上清, 按不同的体积百分比浓度加入到PC12细胞培养体系中。在倒置相差显微镜下观察1d和4d的细胞形态学改变;用丙二酸钠对PC12细胞造成氧化应激损伤, 同时加入不同体积百分比浓度的MSCs培养上清,采用MTT法测定24h后的细胞活性。结果 有突细胞/总细胞数、最长突起长度随培养时间及MSC培养上清体积百分比的增加而增加;PC12细胞氧化损伤后,加入一定浓度MSC培养上清组的PC12细胞活性较未加入组增高,差异有显著性。结论 MSCs能够合成和分泌具有神经营养活性的物质,该物质能诱导PC12细胞分化并减轻氧化应激对PC12细胞的损伤。

关键词: 骨髓细胞 PC12细胞, 细胞因子, 神经生长因子

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2005年02月25日

【期刊论文】八珍汤对血虚模型小鼠造血调控因子影响的实验研究

杨志荣, 淳泽, 罗霞, 陈东辉, 余梦瑶, 程耀锋,

生物医学工程学杂志,2004,21(5):727~731,-0001,():

摘要

探讨八珍汤对由环磷酰胺引起的小鼠骨髓造血功能抑制的调控作用。采用环磷酰胺致小鼠血虚模型,测定八珍汤对骨髓抑制小鼠外周血象及其细胞因子产生的影响。结果表明,八珍汤对环磷酰胺所致血虚模型小鼠骨髓细胞有促进增殖作用;经八珍汤诱导制备的巨噬细胞、脾细胞、肺条件培养液和骨骼肌条件培养液能促进血虚模型小鼠骨髓细胞增殖,促进血虚模型小鼠骨髓基质细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)。八珍汤对环磷酰胺所致化疗损伤的造血调控作用可能与直接或间接刺激造血微环境的基质细胞分泌正性和负性造血生长因子有关。

关键词: 八珍汤,, 造血生长因子,, 骨髓细胞,, 肿瘤坏死因子

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2010年12月19日

【期刊论文】血液病患者骨髓间充质干细胞的增殖分化特点*

茹永新, 冯敏, 夏永辉, 崔雯, 林永敏, 杨晴英, 茹永新△

天津医药,2009,37(3):167~169,-0001,():

摘要

研究血液病患者骨髓间充质干细胞(MSC)的体外增殖分化特点。方法:用H4434 甲基纤维素半固体培养基培养168 例血液病患者骨髓单个核细胞14 d,分析贴壁梭形细胞形态和生长等级特点;CD29、CD44、α-SMA、α-醋酸奈酚酯酶和碱性磷酸酶组化染色鉴定MSC 特性和分化特点。结果:所有患者贴壁细胞为梭形,核圆或椭圆形,瑞氏染色胞浆淡蓝,核为紫红色;α-醋酸奈酚酯酶染色阳性。所有患者贴壁细胞的CD29 和CD44 阳性率在90%~95%之间,碱性磷酸酶和α-SMA 阳性率分别为25%和30%。再生障碍性贫血、急性白血病、骨髓异常增生综合征和骨髓增殖性疾病4组患者贴壁细胞生长等级不同,再生障碍性贫血组分别高于其他3组(P<0.05)。结论:血液病患者MSC 非诱导体外培养广泛表达骨和肌型细胞标志;再生障碍性贫血患者MSC 生长等级显著高于急性白血病、骨髓异常增生综合征和骨髓增殖性疾病。

关键词: 血液病 间质干细胞 骨髓细胞 细胞,, 培养的 细胞分化 细胞增殖

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